抗體偶聯(lián)藥物（ADC）兼具抗體的高特異性和細(xì)胞毒素的高抗腫瘤活性，對制劑生產(chǎn)也提出了更高要求。在ADC制劑生產(chǎn)中的經(jīng)驗(yàn)，ADC制劑生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)，從微生物控制、微粒控制、交叉污染控制以及其它關(guān)鍵點(diǎn)控制。
本次講詳細(xì)解析ADC制劑生產(chǎn)過程中的“微生物控制”。
ADC制劑生產(chǎn)過程中的微生物控制
ADC制劑的生產(chǎn)和其他大分子的生產(chǎn)有很多相通之處，比如對微生物的控制。微生物控制主要包含濕熱滅菌、熱原控制、除菌過濾、生物凈化四個(gè)方面：
一、濕熱滅菌
濕熱滅菌主要針對滅菌柜做器具滅菌，其中有五個(gè)注意點(diǎn)：
（一）滅菌柜性能：CD開發(fā)是確定滅菌柜性能的重要手段。平衡時(shí)間、BD測試和泄露率測試，這些性能測試也是考量滅菌柜質(zhì)量的重要因素。
（二）針對滅菌柜的驗(yàn)證：包括空載熱分布、裝載熱穿透、BI挑戰(zhàn)以及最大裝載/最小裝載。滅菌柜在所有驗(yàn)證項(xiàng)目達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)后才能投入生產(chǎn)使用。
（三）裝載策略設(shè)計(jì)：這一部分考量的是裝載的代表性以及涵蓋范圍。如果裝載發(fā)生變化，應(yīng)當(dāng)在前期驗(yàn)證過程中盡可能地考量到，僅通過一個(gè)評估就能將變化涵蓋，從而減少驗(yàn)證的工作量。裝載發(fā)生變化后，需要重新驗(yàn)證的時(shí)間節(jié)點(diǎn)，也是設(shè)計(jì)裝載時(shí)需要重點(diǎn)考量的部分。
（四）生產(chǎn)實(shí)際過程中的運(yùn)行參數(shù)：驗(yàn)證通常采用Worse case參數(shù)，所以生產(chǎn)過程中會采用更加保守的策略。例如：驗(yàn)證時(shí)，滅菌條件為121℃、30min，而在實(shí)際生產(chǎn)中，可以考慮用122℃、30min的參數(shù)進(jìn)行生產(chǎn)。這樣可以保證在生產(chǎn)過程中，滅菌柜的溫度即使低于122度，但只要高于121度，驗(yàn)證依然有效，可使風(fēng)險(xiǎn)降到最低。
（五）考慮Holding Time：通過相應(yīng)的驗(yàn)證來確定滅菌后的存放時(shí)限。例如一些器具滅菌以后存放多長時(shí)間。該時(shí)限的確定通常有兩個(gè)策略：一是通過相應(yīng)的時(shí)限驗(yàn)證來確定，二是通過模擬灌裝挑戰(zhàn)來確定。
濕熱滅菌的第二部分主要針對凍干機(jī)的SIP。
首先，CIP站作為為凍干機(jī)清洗提供介質(zhì)的裝置，需要考量是否進(jìn)行相應(yīng)的SIP。純化水罐可以不進(jìn)行滅菌，WFI罐則需要滅菌或至少進(jìn)行蒸汽消毒處理，目的是控制微生物的限度。此外，凍干機(jī)SIP時(shí)需保證滅菌溫度和時(shí)間，以符合滅菌的要求。
其次，凍干機(jī)的SIP過程一般采用過度殺滅。由于CIP結(jié)束后，凍干機(jī)并非處于干燥狀態(tài)，導(dǎo)致微生物滋長，之后再進(jìn)行SIP會有失敗的風(fēng)險(xiǎn)，所以CIP后不要放置太長的時(shí)間，應(yīng)盡快進(jìn)行SIP。在SIP中，也要關(guān)注凍干機(jī)的通氣過濾器。
第三是SIP的驗(yàn)證。該驗(yàn)證一般通過風(fēng)險(xiǎn)評估來確定探頭的數(shù)量以及BI的數(shù)量和點(diǎn)位，如對于凍干箱箱體的板層、內(nèi)壁和大門，就需要通過風(fēng)險(xiǎn)評估來考慮在哪些地方布置探頭和BI。SIP的管路和過濾器則必須布置探頭和BI，以此確保管路和過濾器能夠達(dá)到無菌效果。BI在布置的過程中一定要牢固，且不能堵塞管路。如果布置不合適，可能導(dǎo)致SIP結(jié)束后，BI被蒸汽沖走，產(chǎn)生引入污染的風(fēng)險(xiǎn)，或者堵塞管路，最終造成SIP的失敗。
最后是SIP的時(shí)效性。與滅菌器柜相同，需要考察其Holding Time。該考察可以通過驗(yàn)證來確定，也可以進(jìn)行三批模擬灌裝來確定滅菌的時(shí)效性。通氣過濾器的滅菌次數(shù)也很關(guān)鍵，要根據(jù)過濾器的耐受次數(shù)以及實(shí)際的生產(chǎn)情況來綜合考察。
二、熱原控制
微生物控制第二部分是熱原控制，主要涉及隧道烘箱，可以從五個(gè)方面來解析：
（一）隧道烘箱的運(yùn)行模式。在生產(chǎn)過程中采用的生產(chǎn)模式通常叫日間模式；在生產(chǎn)停止過程中，恰當(dāng)?shù)姆绞绞乔袚Q成夜間模式，保持隧道烘箱的送風(fēng)，防止因送風(fēng)關(guān)閉造成隧道烘箱污染。
（二）冷卻段滅菌。一般每批生產(chǎn)前需要對冷卻段進(jìn)行滅菌，保證冷卻段的無菌環(huán)境。
（三）冷卻段壓差梯度的設(shè)計(jì)。特別是對于ADC的生產(chǎn)，一般會使用隔離器來保證活性藥物生產(chǎn)的安全性，所以隧道烘箱的出口段壓差比普通隧道烘箱高。這對隧道烘箱的挑戰(zhàn)較大，需要防止隔離器的風(fēng)灌到隧道烘箱，還要防止冷卻段的風(fēng)灌到加熱段。采用雙級的壓差梯度可以避免冷卻段對高溫段的影響。
（四）隧道烘箱本身各段的壓差。要與設(shè)計(jì)保持一致。在實(shí)際運(yùn)行中不能偏離設(shè)計(jì)，否則可能造成倒灌，進(jìn)而影響除熱原的效果。
（五）溫度和網(wǎng)帶速度。這個(gè)時(shí)候要考察不同規(guī)格的西林瓶對應(yīng)的除熱原溫度、網(wǎng)帶速度存在差別，這些參數(shù)需要通過驗(yàn)證來確定。
三、除菌過濾
微生物控制需要考慮的第三部分是除菌過濾，主要是藥液的除菌過濾。
具體包含以下六個(gè)方面：
（一）濾膜材質(zhì)和膜面積的選擇。目前在市面上，濾膜材質(zhì)多用PVDF和PES。在實(shí)際操作中，材質(zhì)的選擇要根據(jù)藥液的特性確定，通常是根據(jù)藥液的兼容性選擇。膜面積的選擇要留有緩沖余地，如果僅通過計(jì)算的值來選擇，沒有留有緩沖，可能會造成濾器的堵塞和破損，尤其要注意高粘度、高濃度、有蛋白聚集的情況，可以考慮采用預(yù)過濾和多級濾器并聯(lián)的方式來有效降低風(fēng)險(xiǎn)。
（二）時(shí)限研究?；靹蚝笾吝^濾前一定要考察時(shí)限，還要考慮藥液整體的過濾時(shí)間、藥液過濾后的存放時(shí)間。
（三）影響藥液除菌過濾效能的因素。其中最主要的是藥液本身的性質(zhì)，此外還有過濾工藝參數(shù)，如過濾的壓力、以及過濾器和藥液相互的作用，還有過濾量和使用周期。
（四）無菌連接。無菌連接器市面上也有很多種。此時(shí)要重點(diǎn)考察廠家對無菌連接器是否進(jìn)行了相應(yīng)驗(yàn)證、驗(yàn)證資料是否齊全、整體的密封性以及無菌連接器輻照滅菌驗(yàn)證資料是否齊備。因?yàn)檫^濾的時(shí)候要考量濾器前后端的壓差，所以也要有相應(yīng)的壓力監(jiān)測系統(tǒng)，還要有相應(yīng)的記錄及進(jìn)行相應(yīng)的計(jì)量。
（五）一次性系統(tǒng)。根據(jù)EU GMP規(guī)范，使用前要進(jìn)行完整性測試。這時(shí)候要考量的是在無菌狀態(tài)下，做完整性測試過程中的通氣、通水經(jīng)過相應(yīng)的過濾，應(yīng)當(dāng)怎樣收集過濾的水。
（六）微生物負(fù)荷。需要重點(diǎn)考察的是取樣量。法規(guī)要求是10CFU / 100ml。ADC和其他大分子藥物附加值比較高，通常會采用折中的方案。例如取3ml，規(guī)定定量的CFU。微生物負(fù)荷的取樣時(shí)間，也是一個(gè)考量點(diǎn)。一般的取樣會在除菌過濾前。如果除菌過濾是持續(xù)的過程，那就要在除菌過濾前的最后時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣。
四、生物凈化
第四部分就是ADC制劑生產(chǎn)過程中微生物控制的非常重要的一部分，即生物凈化，通常指隔離器VHP。
隔離器VHP需要重點(diǎn)關(guān)注四個(gè)方面：
（一）CD/CV的開發(fā)。隔離器的溫度、濕度、壓差以及蒸發(fā)盤的溫度、過氧化氫的注入量、持續(xù)時(shí)間，都是在CD/CV開發(fā)過程中重點(diǎn)考量的參數(shù)。
（二）BI的選擇與處理。BI的選擇重點(diǎn)考慮D值；BI的保存要注意溫濕度以及避免裸手接觸BI。驗(yàn)證過程可考慮分?jǐn)?shù)法，每個(gè)點(diǎn)布置3個(gè)BI，防止出現(xiàn)個(gè)別陽性的情況。
（三）VHP實(shí)施過程中的控制。要關(guān)注幾個(gè)點(diǎn)：一是VHP的起始階段，即除濕后的濕度。還要關(guān)注VHP過程中（提升階段）過氧化氫達(dá)到的濃度，該濃度需達(dá)到一定的數(shù)值，且經(jīng)過驗(yàn)證。如驗(yàn)證的時(shí)候達(dá)到400PPM才能達(dá)到殺滅的效果，但如果實(shí)際過程中，濃度沒有達(dá)到400PPM則會造成風(fēng)險(xiǎn)，這就不是成功的VHP過程。凈化階段持續(xù)時(shí)間也很重要，比如驗(yàn)證過程中進(jìn)行的是85分鐘的驗(yàn)證，生產(chǎn)過程中就會更保守，延長時(shí)間，真正對無菌保證起到雙保險(xiǎn)的作用。
（四）過氧化氫排殘。一般要配備高低濃度探頭，有的設(shè)備商只配了一種探頭，并宣稱高低濃度均可監(jiān)測。實(shí)際上這種探頭對高濃度比較精確，而低濃度時(shí)誤差非常大，所以并不適宜。比較適宜的做法是分開設(shè)置濃度探頭，并且要確認(rèn)低濃度探頭的精度范圍。很多時(shí)候，低濃度探頭在1ppm的精度不高，排殘的時(shí)候顯示到了1ppm，如果以更精確的便攜式監(jiān)測的話，可能有幾個(gè)ppm，這對于敏感性高的藥品有一定影響。同時(shí)，低濃度探頭的安裝位置也很重要。
在排殘時(shí)需要在驗(yàn)證過程中做實(shí)驗(yàn)，保證過氧化氫的濃度達(dá)到實(shí)際的數(shù)值，而不是在隔離器本身的探頭里面顯示的數(shù)值。因?yàn)樘筋^精度有限，一些特殊藥品對過氧化氫的敏感度非常高，此時(shí)需要單獨(dú)考察，考察時(shí)要做到：一是延長排殘時(shí)間，二是以相應(yīng)的方法進(jìn)行確認(rèn)。
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