摘要：藥品質(zhì)量研究中涉及各種計(jì)算方法，如內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法等，本文將各種計(jì)算方法進(jìn)行了系統(tǒng)整理，相關(guān)計(jì)算公式也進(jìn)行了簡(jiǎn)化，便于記憶及運(yùn)用，不足和缺陷之處，望同行批評(píng)指正。
一、面積歸一化法
把所有出峰的組分含量之和按100%計(jì)的定量方法，通常各組分的校正因子差異不大時(shí)，較為準(zhǔn)確，藥品質(zhì)量研究前期使用較為廣泛，如原料藥的工藝開(kāi)發(fā)，中間體過(guò)程控制等，常采用該方法。該方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單，方便，人為帶來(lái)的干擾較小（如濃度差異、進(jìn)樣精度等），缺點(diǎn)是只能應(yīng)用于相對(duì)比較，無(wú)法準(zhǔn)確定量。
二、加校正因子的自身對(duì)照法
目前為已知雜質(zhì)定量控制的常規(guī)手段，有加校正因子的主成分自身對(duì)照法和加校正因子的主成分對(duì)照品法，審評(píng)中心更傾向于后者，校正因子的計(jì)算方式有單點(diǎn)法、多點(diǎn)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定的結(jié)果更為準(zhǔn)確，計(jì)算公式為
該校正因子與USP相對(duì)相應(yīng)因子（Relative Response Factor）互為倒數(shù)關(guān)系，計(jì)算時(shí)應(yīng)注意。
三、不加校正因子的自身對(duì)照法
根據(jù)藥品安全控制的需要，參照EP10.0 2.2.46. CHROMATOGRAPHIC SEPARATION TECHNIQUES中的相關(guān)規(guī)定，校正因子在 0.8-1.2之間可不加校正因子。參照《HPLC法校正因子研究中的幾個(gè)問(wèn)題》張哲峰，化藥藥學(xué)二部的相關(guān)文章，該校正因子的適用范圍為0.2～5之間，超出該范圍，方法應(yīng)進(jìn)一步優(yōu)化。
四、外標(biāo)法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）
又稱校正曲線法，是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)系列，在標(biāo)準(zhǔn)條件下，測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度值A(chǔ)i，以吸光度值A(chǔ)，(i=1，2，3...)對(duì)被測(cè)物質(zhì)的含量c(i=1，2，3...)建立校正曲線A= f(c)，在同樣條件下，測(cè)定樣品的吸光度值A(chǔ)，根據(jù)被測(cè)物質(zhì)的吸光度值A(chǔ)，從校正曲線求得其濃度Cx。通常在熒光分光光度法、原子吸收分光光度法等應(yīng)用中使用。
五、外標(biāo)法（直接比較法）
精密稱（量）取對(duì)照品和供試品，配置成溶液，分別精密取一定量進(jìn)樣，適用于以手動(dòng)進(jìn)樣器定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣為宜。利用的是對(duì)照品與樣品中單位濃度峰面積的響應(yīng)值一致的原理。
外標(biāo)法計(jì)算公式：
六、內(nèi)標(biāo)法
可避免因樣品前處理及進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，通常在GC、ICP-MS等檢測(cè)中常用，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配制溶液，各精密量取適量，記錄色譜圖。根據(jù)對(duì)照品內(nèi)標(biāo)的比值與樣品中內(nèi)標(biāo)的比值一致的原理，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算公式如下：
公式變形，=
C對(duì)內(nèi)：指對(duì)照品中的雜質(zhì)內(nèi)標(biāo)的濃度;A對(duì)內(nèi)：指對(duì)照品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；C對(duì)：指對(duì)照品中目標(biāo)物的濃度；C樣：指供試品中目標(biāo)物的濃度；
實(shí)例：以某原料中殘留溶劑檢測(cè)為例，分析方法大致簡(jiǎn)述如下，內(nèi)標(biāo)溶液 稱取丁酮適量，用水稀釋制成每1ml中約含0.2mg的溶液。供試品溶液 取本品約1.0g，精密稱量，置10ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。對(duì)照品溶液 取對(duì)照品適量，精密稱定，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋，定容至刻度，搖勻即得，精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液（1）各4ml，分別置頂空瓶中，密封。 色譜條件 頂空進(jìn)樣，毛細(xì)管色譜柱，限度 按標(biāo)準(zhǔn)加入法以峰面積計(jì)算，殘留量不得過(guò)0.1%。
七、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法
可以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，適用于頂空進(jìn)樣等，供試品和對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中，基質(zhì)有干擾的情況。通常在氣相色譜中使用，精密稱（量）取某個(gè)雜質(zhì)或待測(cè)成分對(duì)照品適量，配制成適當(dāng)濃度的對(duì)照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)或主成分含量，再扣除加入的對(duì)照品溶液含量，即得供試品溶液中某個(gè)雜質(zhì)和主成分含量。
計(jì)算公式如下：
C本：樣品中雜質(zhì)的本底濃度；?C：樣品中雜質(zhì)的加入濃度；A對(duì)（本+?C）：對(duì)照品中雜質(zhì)本底加加入濃度后的峰面積；
實(shí)例：以某原料中殘留溶劑檢測(cè)為例，分析方法大致簡(jiǎn)述如下，供試品溶液 取本品約1.0g，精密稱量，置10ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻。對(duì)照品溶液 取對(duì)照品適量，精密稱定，用供試品溶液稀釋定容至刻度，搖勻。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各4ml，分別置頂空瓶中，密封。 色譜條件 頂空進(jìn)樣，毛細(xì)管色譜柱，限度 按標(biāo)準(zhǔn)加入法以峰面積計(jì)算，殘留量不得過(guò)0.1%。
八、標(biāo)準(zhǔn)加入內(nèi)標(biāo)法
可避免因樣品前處理及進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，又能排出基質(zhì)干擾。通常在氣相色譜中使用，標(biāo)準(zhǔn)加入內(nèi)標(biāo)法中，采用對(duì)照品峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積，帶入外標(biāo)法公式計(jì)算即可，公式如下:
實(shí)例：以某原料中殘留溶劑檢測(cè)為例，分析方法大致簡(jiǎn)述如下，內(nèi)標(biāo)溶液 稱取丁酮適量，用水稀釋制成每1ml中約含0.2mg的溶液。供試品溶液(1)取本品約1.0g，精密稱量，置10ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。供試品溶液 精密量取供試品溶液（1）與內(nèi)標(biāo)溶液各2ml，置頂空瓶中，密封。對(duì)照品溶液 取溶劑適量，精密稱定，用內(nèi)標(biāo)溶液定量稀釋制成每1ml中約含待測(cè)物0.1mg，精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液（1）各2ml，置頂空瓶中，密封。 色譜條件 頂空進(jìn)樣，毛細(xì)管色譜柱，限度 按標(biāo)準(zhǔn)加入內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，殘留量不得過(guò)0.5%。計(jì)算公式如下：
九、思考
計(jì)算方式屬于分析方法非常重要的組成部分，基于檢測(cè)物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)、檢測(cè)設(shè)備及控制理念選擇合適的計(jì)算方式將有效的提高分析方法的準(zhǔn)確性，不用計(jì)算方式其原理相同，即“待測(cè)物峰面積與其濃度成正比” ，內(nèi)標(biāo)法避免因樣品前處理及進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，標(biāo)準(zhǔn)加入法可以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，工作中若能適當(dāng)運(yùn)用不同的計(jì)算方式，可以彌補(bǔ)檢測(cè)方法自身的不足，起到事半功倍的效果。
十、參考文獻(xiàn)
[1] 液相色譜檢測(cè)方法（第二版）。
[2] 2020版《中國(guó)藥典》。
京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
