講到清潔驗(yàn)證，我們先說其法規(guī)和指南，這樣我們后續(xù)文章中部分的觀點(diǎn)，我會(huì)直接寫明來自于哪個(gè)法規(guī)指南，便于大家自行查閱。
需要注意的是，由于法規(guī)指南都來源于不同的機(jī)構(gòu)，而不同的監(jiān)管機(jī)構(gòu)的理念可能彼此之間存在差異，就導(dǎo)致這些法規(guī)指南中可能存在部分不一致的內(nèi)容，至于讀者要遵守哪些法規(guī)指南，那還要基于讀者產(chǎn)品的法規(guī)市場以及個(gè)人理解來決定。
下面我們將列出涉及清潔驗(yàn)證的相關(guān)法規(guī)指南：
1.GMP
首先我們要了解企業(yè)應(yīng)當(dāng)進(jìn)行清潔驗(yàn)證是GMP的要求，無論是FDA、EU還是NMPA，都在GMP中列明了清潔的相關(guān)要求。不同的是FDA的21CFR屬于“規(guī)章”，其只是寫明了設(shè)備設(shè)施清潔合格的要求，并未使用過多的內(nèi)容來描述清潔驗(yàn)證的內(nèi)容，而是在指南或指導(dǎo)原則中寫明了FDA的期望。而EU GMP和中國GMP的正文中寫明了對清潔驗(yàn)證的要求。EU GMP附錄15 Qualification and Validation中單獨(dú)將清潔驗(yàn)證作為一節(jié)來進(jìn)行了規(guī)定，NMPA在2015年發(fā)布的GMP附錄：確認(rèn)與驗(yàn)證中也單獨(dú)將清潔驗(yàn)證作為其中的一個(gè)章節(jié)來進(jìn)行了規(guī)定。不過需要注意的是EU GMP（Volume 4）在其法律法規(guī)體系中屬于Guideline，是不需要強(qiáng)制執(zhí)行的。而中國GMP最初是屬于“部門規(guī)章”，但是國家市場監(jiān)督管理總局在2022年8月份發(fā)布關(guān)于廢止和修改部分規(guī)章的決定（征求意見稿）中，擬將GMP納入“規(guī)范性文件”管理，但是無論是屬于部分規(guī)章還是規(guī)范性文件，中國GMP都是要求強(qiáng)制執(zhí)行的，所以大家如果要理解清潔驗(yàn)證的要求，應(yīng)優(yōu)先學(xué)習(xí)GMP中的內(nèi)容。
2.官方機(jī)構(gòu)指南
除了GMP之外，部分官方機(jī)構(gòu)也發(fā)布了行業(yè)指南或者指導(dǎo)原則對清潔驗(yàn)證的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了細(xì)化要求和說明，作者將部分官方機(jī)構(gòu)發(fā)布的指南進(jìn)行了整理匯總，詳見下表：
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發(fā)布機(jī)構(gòu) |
指南名稱 |
頒布年份 |
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FDA |
Guide to inspections validation of cleaning processes清潔工藝驗(yàn)證檢查指南 |
1993年 |
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EMA |
Guideline on setting health based exposure limits for use in risk identification in the manufacture of different medicinal products in shared facilities在共用設(shè)施中生產(chǎn)不同藥品使用風(fēng)險(xiǎn)辨識建立健康暴露限度指南 |
2015年 |
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Questions and answers on implementation of risk-based prevention of cross-contamination in production and ‘Guideline on setting health-based exposure limits for use in risk identification in the manufacture of different medicinal products in shared facilities’基于風(fēng)險(xiǎn)防止藥品生產(chǎn)中交叉污染以及 “共用設(shè)施中不同藥品生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)識別所用基于健康的暴露限設(shè)定指南” 實(shí)施問答 |
2018年 |
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WHO |
Points to consider when including Health-Based Exposure Limits (HBELs) in cleaning validation清潔驗(yàn)證中包括基于健康的暴露限（HBEL）時(shí)的考慮要點(diǎn) |
2021年 |
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PIC/S |
PI052-1 Inspection of health based exposure limit (HBEL) assessments and use in quality risk management基于健康的暴露限值（HBEL） 的評估及其在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理中的使用的檢查指南 |
2020年 |
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PI053-1 Questions and answers on implementation of risk-based prevention of cross-contamination in production and ‘Guideline on setting health-based exposure limits for use in risk identification in the manufacture of different medicinal products in shared facilities’基于風(fēng)險(xiǎn)防止藥品生產(chǎn)中交叉污染以及 “共用設(shè)施中不同藥品生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)識別所用基于健康的暴露限設(shè)定指南” 實(shí)施問答 |
2020年 |
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CFDI |
藥品共線生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（征求意見稿） |
2021年 |
3.行業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布指南或行業(yè)視角
部分行業(yè)協(xié)會(huì)例如PDA、ISPE等也發(fā)布了多個(gè)指南對“清潔驗(yàn)證”這個(gè)主題進(jìn)行了細(xì)化的指導(dǎo)，詳見下表：
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發(fā)布機(jī)構(gòu) |
指南名稱 |
頒布年份 |
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PDA |
PDA TR29 Points to Consider for Cleaning Validation清潔驗(yàn)證考慮要點(diǎn) |
2012年 |
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PDA TR49 Points to Consider for Biotechnology Cleaning Validation生物制藥清潔驗(yàn)證考慮要點(diǎn) |
2010年 |
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ISPE |
Cleaning Validation Lifecycle - Applications, Methods, and Controls清潔驗(yàn)證生命周期-應(yīng)用、方法和控制 |
2020年 |
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APIC |
Guidance on aspects of cleaning validation in active pharmaceutical ingredient plants原料藥工廠中清潔驗(yàn)證指南 |
2021年 |
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ASTM |
E3106-18 Standard Guide for Science-Based and Risk-Based Cleaning Process Development and Validation基于科學(xué)和風(fēng)險(xiǎn)的清潔工藝開發(fā)和驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)指南 |
2018年 |
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E3219-20 Standard Guide for Derivation of Health-Based Exposure Limits (HBELs)基于健康的暴露極限（HBEL）推導(dǎo)的標(biāo)準(zhǔn)指南 |
2020年 |
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Pharmaceutical online |
Cleaning Validation for the 21st century21世紀(jì)清潔驗(yàn)證 |
2019年 |
* 需注意的是，表中列明的指南并不一定是指導(dǎo)清潔驗(yàn)證內(nèi)容的，但是部分指南對清潔驗(yàn)證過程中的某些內(nèi)容很關(guān)鍵，例如HBEL的推算。
上述的法規(guī)指南都表明了監(jiān)管方和行業(yè)協(xié)會(huì)的態(tài)度和目前的看法，不同于監(jiān)管機(jī)構(gòu)，行業(yè)協(xié)會(huì)在指南的指導(dǎo)方面具有更好的靈活度。但是自2015年EMA發(fā)布HBEL指南（Guideline on setting health based exposure limits for use in risk identification in the manufacture of different medicinal products in shared facilities在共用設(shè)施中生產(chǎn)不同藥品使用風(fēng)險(xiǎn)辨識建立健康暴露限度指南）之后，行業(yè)內(nèi)都將HBEL作為清潔驗(yàn)證合格限度的算法之一，導(dǎo)致2015年后大量的指南或指導(dǎo)原則更新，我們也可以看出，上述列舉的大部分機(jī)構(gòu)，包括WHO、ISPE、APIC等都在2015年后更新了其指南，其主要升級的原因就是合格限度計(jì)算方法的更新以及生命周期概念的引入。
二、 清潔驗(yàn)證生命周期概念
FDA在2011年發(fā)布了《行業(yè)指南—工藝驗(yàn)證：一般原則與規(guī)范》，將工藝驗(yàn)證分為工藝開發(fā)、工藝性能確認(rèn)、持續(xù)工藝確認(rèn)。FDA在該指南中，將生命周期的概念引入到工藝驗(yàn)證活動(dòng)中，將前端的工藝開發(fā)以及后端的持續(xù)工藝確認(rèn)放入了工藝驗(yàn)證活動(dòng)中，從此工藝驗(yàn)證不再是一次性的活動(dòng)，而是一個(gè)持續(xù)監(jiān)測并不斷優(yōu)化的過程。
同樣，清潔驗(yàn)證也適用于該理念，PDA在2012年更新的PDA TR29《清潔驗(yàn)證考慮要點(diǎn)》中就已經(jīng)引入了這個(gè)概念，將清潔驗(yàn)證也分為了清潔工藝的開發(fā)與設(shè)計(jì)、清潔驗(yàn)證/確認(rèn)和驗(yàn)證狀態(tài)的維護(hù)。而在2020發(fā)布的ISPE清潔驗(yàn)證指南、2021年發(fā)布的WHO清潔驗(yàn)證指南、APIC的清潔驗(yàn)證指南中也引入了這個(gè)概念，NMPA在2021年發(fā)布的《藥品共線生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（征求意見稿）》中也引入了這個(gè)概念。
在后續(xù)發(fā)布的指南中，清潔驗(yàn)證的生命周期逐漸的完善化，目前主要是分為清潔工藝開發(fā)、清潔驗(yàn)證/確認(rèn)以及持續(xù)清潔確認(rèn)，簡單來說，清潔工藝的開發(fā)就是對清潔工藝在實(shí)驗(yàn)室的研究和評估，確認(rèn)清潔工藝的CQA和CPP，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的過程，這個(gè)過程往往也涉及到清潔驗(yàn)證分析方法的開發(fā)和驗(yàn)證。而清潔驗(yàn)證/確認(rèn)則是我們傳統(tǒng)的連續(xù)3次的清潔驗(yàn)證，在這個(gè)過程中我們會(huì)進(jìn)行取樣并檢測以證明我們的清潔方法是有效且穩(wěn)定的。后續(xù)的持續(xù)清潔確認(rèn)則是基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理而制定出的后續(xù)監(jiān)測方案，有可能只需要進(jìn)行目測，也有可能是每批監(jiān)測。我們將在正文中進(jìn)行描述。
清潔驗(yàn)證的生命周期和工藝驗(yàn)證的生命周期是類似的，都是起始于清潔方法的開發(fā)和設(shè)計(jì)，從源頭開始進(jìn)行控制，結(jié)束于產(chǎn)品退市或方法取消，在過程中進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測。但是也存在著很大的不同，相比于工藝驗(yàn)證中可能存在著大量的變異來源以及批內(nèi)差異而言，清潔驗(yàn)證并沒有這么復(fù)雜，關(guān)于統(tǒng)計(jì)學(xué)的應(yīng)用也會(huì)比工藝驗(yàn)證略微簡單，我們也會(huì)在后續(xù)對應(yīng)章節(jié)中描述這塊內(nèi)容。
三、 清潔工藝的開發(fā)和設(shè)計(jì)
好，看到這里，我們終于開始進(jìn)入清潔驗(yàn)證的正文了。我們先來講講清潔驗(yàn)證生命周期的第一部分：清潔工藝的開發(fā)和設(shè)計(jì)。實(shí)際上目前國內(nèi)大部分廠家這塊工作都是欠缺的，相比于清潔工藝的開發(fā)與設(shè)計(jì)，他們更愿意花費(fèi)時(shí)間和金錢在產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的開發(fā)和設(shè)計(jì)上，特別是FDA在近年來推行QbD（質(zhì)量源于設(shè)計(jì)）的理念，大部分企業(yè)都在產(chǎn)品工藝開發(fā)上投入了大量的時(shí)間和金錢，進(jìn)行DOE（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)）或OFAT（單因子法），而在清潔方法的開發(fā)上，他們甚至連簡單的實(shí)驗(yàn)室模擬都不做，僅僅是給生產(chǎn)提供部分溶解度信息，由生產(chǎn)車間使用通用方法來進(jìn)行清潔，而這也往往是后續(xù)清潔驗(yàn)證失敗的主要原因之一。
那么我們今天就來講講清潔工藝開發(fā)和設(shè)計(jì)需要做什么呢？
在我們開始這個(gè)話題之前，我們回答這么2個(gè)問題：
a）清潔的目的是什么？
b）清潔驗(yàn)證的目的是什么？
先回答第一個(gè)問題，清潔的目的是為了將污染物去除，來防止污染和交叉污染。
第二個(gè)問題EU GMP和中國GMP進(jìn)行了解答，我們看一下：
EU GMP：清潔驗(yàn)證是有記錄的證據(jù)表明，給定的清潔規(guī)程有效且可重復(fù)地去除了污染物、先前產(chǎn)品的殘留物與低于預(yù)定義閾值的清潔劑。目的是證明清潔過程始終符合預(yù)定的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。
中國GMP：清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。
EU GMP說的比較拗口，我們來轉(zhuǎn)化成白話，既清潔驗(yàn)證的目的是為了證明清潔方法的有效性和持續(xù)性，證明清潔方法能夠持續(xù)有效的將共用設(shè)備中污染物清潔至合格標(biāo)準(zhǔn)，防止污染和交叉污染。
在我們轉(zhuǎn)化的這句話中，我們有這么幾個(gè)關(guān)鍵詞：清潔方法、公用設(shè)備、污染物、合格標(biāo)準(zhǔn)。
我們清潔工藝的開發(fā)和設(shè)計(jì)就是圍繞著這幾個(gè)關(guān)鍵詞來進(jìn)行的，而這幾個(gè)詞也是我們第二階段進(jìn)行驗(yàn)證的主要元素。我們需要在清潔工藝開發(fā)階段將這幾個(gè)關(guān)鍵詞搞清楚并且經(jīng)過測試和確認(rèn)，并在第二階段來證明他們。
1.污染物
首先我們要考慮我們需要去除和檢測的污染物是什么？很多人會(huì)說我們?nèi)コ蜋z測的污染物就是API，真的是這樣么？如果我們設(shè)計(jì)的清潔方法是首先將API進(jìn)行滅活或結(jié)構(gòu)破壞，那么我們最終帶入下一個(gè)產(chǎn)品并進(jìn)行檢測的污染物是什么呢？如果這個(gè)問題搞不清楚，對整個(gè)清潔驗(yàn)證工作的影響是巨大的。
一般來說，主要的污染物是API，但是如果基于研發(fā)數(shù)據(jù)證明API在設(shè)備儲(chǔ)存條件下會(huì)快速的降解或者類似于大分子產(chǎn)品（我們需要對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)的破壞和滅活），那么應(yīng)當(dāng)對降解產(chǎn)物的去除進(jìn)行評估和分析；
某些情況下，輔料也有可能會(huì)對下批產(chǎn)品造成危害，但是這種可能比較小，我們也可以依靠FDA的輔料數(shù)據(jù)庫等來作為數(shù)據(jù)支持證明輔料的危害性；
當(dāng)生產(chǎn)過程中使用的清潔劑不會(huì)在下個(gè)產(chǎn)品引入時(shí)，我們應(yīng)當(dāng)將清潔劑作為我們清潔方法的一個(gè)目標(biāo)；
對于后續(xù)品種有微生物限度要求時(shí)，應(yīng)考慮如何對微生物進(jìn)行控制，包括但不限于微生物的清潔以及后續(xù)的保存（CHT概念的引入）；
當(dāng)后續(xù)品種有細(xì)菌內(nèi)毒素的控制要求時(shí)（例如靜脈注射劑或其API），應(yīng)考慮對微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行控制。
2.公用設(shè)備
產(chǎn)品要使用的設(shè)備在清潔方法開發(fā)階段也是需要考慮的一個(gè)因素，除去某些昂貴的生物藥可以使用一次性設(shè)備外，大部分藥品還是使用的公用設(shè)備，那么在開發(fā)清潔方法時(shí)應(yīng)考慮設(shè)備方面的某些因素。
簡單來說，設(shè)備方面需要考慮的因素主要分為以下幾類：
功能：我們需要考慮設(shè)備具備哪些功能，例如是否具備CIP/COP的功能。了解設(shè)備的功能對于清潔方法的開發(fā)是極為有利的，因?yàn)榭梢员苊馕覀兩僮吆芏鄰澛?，想想吧，如果一個(gè)CIP的設(shè)備，我們開發(fā)了一個(gè)手動(dòng)清潔的方法，我們勢必還要進(jìn)行二次調(diào)整，甚至需要重新對設(shè)備進(jìn)行確認(rèn)；又或者說我們開發(fā)了一個(gè)高壓力的清潔工藝，但是設(shè)備的噴淋球僅能提供較低的壓力，那么我們還需要繼續(xù)調(diào)整方法。需要注意的是，某些產(chǎn)品研發(fā)階段時(shí)尚不能確定后續(xù)的生產(chǎn)地點(diǎn)或設(shè)備時(shí)，可以先開發(fā)初步的清潔方法，后續(xù)根據(jù)設(shè)備差異性分析來進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，或者也可以將產(chǎn)品的溶解度等信息提供給CMO公司，由他們來進(jìn)行清潔方法的開發(fā)。
材質(zhì)：設(shè)備材質(zhì)對于清潔來說是很重要的一個(gè)因素，我們需要在實(shí)驗(yàn)室使用相同材質(zhì)的小型設(shè)備表面來進(jìn)行模擬和研究，以確保產(chǎn)品與設(shè)備材質(zhì)之間是否存在吸附等不易清洗的特性。另外，我們也需要使用相同材質(zhì)的小型設(shè)備表面來對方法學(xué)進(jìn)行部分研究，例如擦拭回收率等等。原則上來講，每種材質(zhì)都應(yīng)當(dāng)進(jìn)行相應(yīng)的研究，但是如果有數(shù)據(jù)證明某種材質(zhì)比另一種材質(zhì)更容易清潔和擦拭，則可只進(jìn)行最難清潔表面的相關(guān)研究。需要提醒的是，如果表面材質(zhì)比較難獲得，最好在采購設(shè)備的時(shí)候就直接向設(shè)備供應(yīng)商索要材質(zhì)模型。
結(jié)構(gòu)：設(shè)備的結(jié)構(gòu)同樣是我們在清潔工藝開發(fā)階段需要考慮的重要因素，特別是當(dāng)設(shè)備可能存在多孔、死角、污物累計(jì)的區(qū)域時(shí)，在開發(fā)清潔方法的時(shí)候應(yīng)著重對這些區(qū)域進(jìn)行清潔，必要時(shí)開發(fā)單獨(dú)的清潔方法或流程。而這些區(qū)域往往也是我們在進(jìn)行清潔驗(yàn)證時(shí)的取樣區(qū)域。
確認(rèn)：了解到設(shè)備確認(rèn)的信息也有助于我們清潔方法的開發(fā)，因?yàn)槲覀兦鍧嵎椒ㄖ泻芏嗟膮?shù)都需要設(shè)備本身來進(jìn)行輸出，例如溫度、壓力等，所以了解到設(shè)備確認(rèn)的信息有助于我們開發(fā)方法的時(shí)候盡可能選擇在參數(shù)范圍內(nèi)的。應(yīng)著重關(guān)注清潔方法CQA和CPP所涉及的相關(guān)部件的確認(rèn)狀態(tài)和范圍。必要時(shí)，應(yīng)重新對設(shè)備進(jìn)行確認(rèn)。
3.清潔方法
確定了污染物和公用設(shè)備后，我們就可以開發(fā)清潔方法了。一般都是在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行初步研究，通常包括對污物和相關(guān)工藝設(shè)備表面組合進(jìn)行篩選，采用代表性污物和相關(guān)設(shè)備表面的材質(zhì)試樣測試殘留的可清潔程度。清潔條件可根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中的污物-表面組合選定。
常規(guī)的清潔方法有2種，物理清潔和化學(xué)清潔，我們在清潔過程中可以根據(jù)清潔的關(guān)鍵程度（批次間清潔、更換產(chǎn)品清潔）選用其中的1種方法或2種方法共用。物理方法往往是通過物理清潔、沖洗等方式將污染物從設(shè)備表面去除，而化學(xué)方法往往是依靠與污染物反應(yīng)或者破壞的方法將污染物去除。之前有人員反饋如果污染物不溶于或微溶于水時(shí)，是不可以拿水來作為清洗劑的，這種觀點(diǎn)其實(shí)是不準(zhǔn)確的，雖然污染物不溶于或微溶于水，但是我們同樣可以使用水對污染物進(jìn)行物理沖洗，然后將其從設(shè)備表面上脫落下來。
常見的清潔方法通常設(shè)計(jì)為以下流程：
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步驟 |
功能 |
注解 |
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真空或預(yù)沖洗 |
去除易溶性和/或非粘附的殘留物。 |
洗滌步驟之前減少污物負(fù)載。 |
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清潔溶劑洗滌 |
去除可溶且干燥的殘留物，通過降解、加熱和/或用洗滌劑潤濕來溶解污物。 |
污物和生物負(fù)荷除去的第一步；經(jīng)常在較高溫度下進(jìn)行；可包括堿性洗滌劑或堿金屬氫氧化物、酸性洗滌劑或酸、兩者的組合，或者可以是一種溶劑或溶劑的混合物。 |
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沖洗 |
去除懸浮或溶解的污物，如果適用，除去清洗液。 |
可能包括一系列的噴淋沖洗，并可包括用更高級別沖洗溶劑的最終沖洗。 |
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干燥 |
除去水和其它溶劑。 |
可以通過空氣或氮?dú)獯蹈?，或通過加熱完成。除去水分時(shí)可輔以有機(jī)溶劑的最后沖洗。 |
需要注意的是，如果產(chǎn)品生產(chǎn)工藝是持續(xù)生產(chǎn)，一個(gè)生產(chǎn)周期后才進(jìn)行轉(zhuǎn)產(chǎn)清潔的，往往認(rèn)為生產(chǎn)周期末的污染物殘留是最多的，應(yīng)作為最差條件來考慮（PDA TR29），但是如果清潔工藝開發(fā)的時(shí)候能夠證明每次的真空或預(yù)沖洗都能使污染物殘留與單批的殘留是類似的情況下，則是可以不將生產(chǎn)周期作為最差條件的。
清潔方法開發(fā)后，應(yīng)參照工藝驗(yàn)證的方法定義CQA（關(guān)鍵質(zhì)量屬性）和CPP（關(guān)鍵工藝參數(shù)），并可根據(jù)情況進(jìn)行DOE或者OFAT試驗(yàn)。
4.合格標(biāo)準(zhǔn)
近些年來，人們逐漸認(rèn)識到零風(fēng)險(xiǎn)是不存在的，低風(fēng)險(xiǎn)是可以接受的。對于清潔驗(yàn)證來說也是一樣的，污染物完全被去除是不現(xiàn)實(shí)的，他們清潔到低于可接受的標(biāo)準(zhǔn)就是合理的。
在EMA發(fā)布HBEL指南之前，常見的清潔合格標(biāo)準(zhǔn)限度有以下幾種算法：
（1）基于最大產(chǎn)品日劑量
這種算法，簡單來說，就是允許殘留物在下一產(chǎn)品的最大日服用劑量時(shí)低于污染物本身最小日服用劑量的1/1000，是按照雜質(zhì)指標(biāo)控制的。因此公式也很簡單：
ARL=污染物最小日劑量/（下一產(chǎn)品最大日劑量?1000）
當(dāng)存在多個(gè)下一產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)選擇最嚴(yán)格的一個(gè)，既日服用劑量最大的那個(gè)產(chǎn)品。若下一產(chǎn)品不是每日服藥的，則應(yīng)進(jìn)行劑量的轉(zhuǎn)換，保持分子和分母劑量的一致。
這種算法是制劑產(chǎn)品最常見的算法之一，需要注意的是，ARL在這里代表的是比例或者濃度，既上一個(gè)污染物在下一個(gè)產(chǎn)品中所允許的比例，如果需要具體的數(shù)值，還需要結(jié)合下一個(gè)產(chǎn)品的最小批次量MBS來計(jì)算。一定要理解ARL的定義，這樣的話，才能理解后續(xù)10ppm的定義。
（2）基于毒性
在HBEL指南出現(xiàn)之前，也有部分企業(yè)基于毒性或者毒理學(xué)數(shù)據(jù)來計(jì)算殘留限度，PDA TR29在2012年更新的版本中就給了使用PDE的方法來計(jì)算污染物的殘留合格標(biāo)準(zhǔn)。但是由于該理念太超前，導(dǎo)致PDA TR29中PDE計(jì)算舉例中存在多處與EMA指南不一致的內(nèi)容，那我們當(dāng)然還是參考最新的法規(guī)指南來執(zhí)行。
該算法在之前更多的是作為參考，因?yàn)镻DE等算法并未統(tǒng)一，導(dǎo)致大家使用該種算法的頻率不高。
（3）默認(rèn)值（10ppm）
10ppm也是使用比較多的算法之一，特別是在API領(lǐng)域，因?yàn)椴糠諥PI可能并不了解后續(xù)產(chǎn)品的用法用量，特別是創(chuàng)新藥。而使用10ppm有一個(gè)非常重要的原則就是你應(yīng)當(dāng)先基于其他算法計(jì)算出ARL來，然后再和10ppm進(jìn)行對比，當(dāng)10ppm更嚴(yán)格時(shí)，可選擇10ppm的算法（PDA TR29）。其實(shí)就上面這句話看來，10ppm的方法實(shí)際上并沒有被認(rèn)可，它只是一種更嚴(yán)格的整數(shù)計(jì)算方法而已。按照這個(gè)邏輯來說，當(dāng)1ppm＜ARL＜10ppm時(shí)，我也可以選擇1ppm來作為默認(rèn)值。
上文講到了ARL是比例，這里可以看出來10ppm的性質(zhì)也是比例，如果要知道具體的殘留限制，還需要結(jié)合后續(xù)產(chǎn)品的最小批次量MBS來計(jì)算。而有的公司直接將10ppm作為殘留限度來計(jì)算，肯定是不合理的做法。
需要注意的是，在APIC的清潔驗(yàn)證指南中，其寫明由于API后續(xù)的步驟很多，還包含很多除雜步驟，故其認(rèn)為可使用50ppm或100ppm。
而在EMA發(fā)布HBEL之后，幾乎所有的相關(guān)指南都進(jìn)行了更新，詳見下表：
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發(fā)布年份 |
法規(guī)指南名稱 |
清潔殘留限度 |
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1993 |
FDA清潔驗(yàn)證檢查指南 |
限度必須在科學(xué)上是合理的，例如1/1000日劑量、10ppm |
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2010 |
中國GMP附錄15 |
活性物質(zhì)殘留限度標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)基于毒理試驗(yàn)數(shù)據(jù)或毒理學(xué)文獻(xiàn)資料的評估建立 |
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2012 |
PDA TR29 |
1/1000日劑量、PDE/ADE、TTC、10ppm |
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2014 |
EMA HBEL指南 |
應(yīng)推導(dǎo)出HBEL來識別共用設(shè)備中的交叉污染 |
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2015 |
EU GMP附錄15 |
基于毒理學(xué)數(shù)據(jù)，參考EMA HBEL指南 |
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2015 |
PIC/S GMP指南附錄15 |
基于毒理學(xué)數(shù)據(jù)，參考EMA HBEL指南 |
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2018 |
EMA HBEL問答 |
可使用HBEL作為清潔驗(yàn)證的限度 |
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2020 |
PIC/S HBEL推導(dǎo)備忘錄及問答 |
采用HBEL作為清潔驗(yàn)證的限度 |
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2021 |
WHO清潔驗(yàn)證指南 |
HBEL，但是傳統(tǒng)的限度若低于HBEL限度，可繼續(xù)使用 |
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2021 |
APIC清潔驗(yàn)證指南 |
HBEL、TTC、通用限度（例如10ppm） |
我們可以看出，在2015年之后，幾乎所有的行業(yè)指南都推薦優(yōu)先使用HBEL的算法來進(jìn)行計(jì)算殘留限度，而傳統(tǒng)的算法則可作為參考方法或作為警戒限來使用（當(dāng)傳統(tǒng)限度低于HBEL時(shí)）。
HBEL的算法公式：
ARL=HBEL/下一產(chǎn)品最大日劑量
但是我們剛剛說到了ARL實(shí)際上就是一個(gè)比例，不能夠直接用來計(jì)算檢測殘留，那我們下一步應(yīng)如何換算呢。
首先我們將上一個(gè)產(chǎn)品最大所允許的殘留量算下來，我們用MAC或者M(jìn)ACO來表示：
MACO=ARL?MBS（下一產(chǎn)品最小批次量）
有的同學(xué)可能就問了，這個(gè)MBS是指的API的用量還是指的制劑所有的API+輔料的用量呢？
這里要看我們前面ARL計(jì)算的時(shí)候所用的下一產(chǎn)品最大日劑量的選擇了，你是選擇的按API計(jì)還是按照片重計(jì)，若按照API計(jì)，則MBS應(yīng)為API用量，若按照片重計(jì)，則MBS應(yīng)為所有的API+輔料的用量。兩者其實(shí)相差不大，在有安全因子的前提下，不會(huì)有過大的波動(dòng)，API的計(jì)算方法更準(zhǔn)確一些，但是針對像21金維他類似的復(fù)方產(chǎn)品，使用片重則會(huì)更方便一些。
得到MACO值后，我們就得到了所有公用設(shè)備上所允許殘留的污染物的限制了，那如何轉(zhuǎn)化成淋洗法或者擦拭法么？我們需要進(jìn)一步的轉(zhuǎn)化，既然整個(gè)設(shè)備上的污染物殘留量我知道了，是不是單個(gè)設(shè)備上的污染物殘留我也知道了呢？當(dāng)然知道了，我們只需要將MACO分以下就好了。例如我一共3個(gè)設(shè)備，每個(gè)設(shè)備內(nèi)表面積是100cm2，污染物MACO值是300g，那我每個(gè)設(shè)備的殘留MACO值就是：300g/3=100g，每平方厘米的MACO值就是：300g/（3?100cm2）=1g/cm2。
那后續(xù)就簡單了，如果使用淋洗法，我們就用這個(gè)設(shè)備的MACO值來除以淋洗水體積，就可以得出檢測濃度的限值了。而擦拭法則可以根據(jù)擦拭面積和溶出液體積來進(jìn)行檢測濃度限值的計(jì)算了。
合格標(biāo)準(zhǔn)大體的算法就是上述內(nèi)容了，但是呢，清潔驗(yàn)證麻煩就麻煩在這些細(xì)節(jié)部分，對于限度的計(jì)算還有很多內(nèi)容需要明確，但是介于篇幅太長，我們在第二階段的時(shí)候再來討論合格標(biāo)準(zhǔn)的其他問題。
5.分析方法
其實(shí)分析方法也算是合格標(biāo)準(zhǔn)的一部分，因?yàn)榧热恢贫藰?biāo)準(zhǔn)限度，就應(yīng)當(dāng)有合適的檢測方法，但是介于我們合格標(biāo)準(zhǔn)占用了太長的篇幅，我們就單起一節(jié)來說分析方法。
分析方法可分為專屬方法（例如HPLC、GC等）和非專屬方法（例如TOC、電導(dǎo)率等）。兩種方法各有利弊，但是優(yōu)先推選專屬性的方法。只有當(dāng)污染物類別比較多，不好區(qū)分（例如生物藥滅活后）時(shí)，才建議使用非專屬方法，但是非專屬方法應(yīng)額外考慮空白的影響。
專屬方法和非專屬方法的優(yōu)缺點(diǎn)見下表：
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方法分類 |
優(yōu)點(diǎn) |
缺點(diǎn) |
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專屬方法 |
可以明確的分析出污染物的大小與結(jié)構(gòu)；污染物檢測水平能夠明確的反映出設(shè)備污染水平；可使用多種萃取液或提取溶劑。 |
開發(fā)和檢測時(shí)間比較長；只有污染物是明確的才可以使用專屬性的方法。 |
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非專屬方法 |
開發(fā)時(shí)間比較短；檢測時(shí)間比較短 |
認(rèn)為所有相應(yīng)響應(yīng)均為雜質(zhì)，當(dāng)結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，無法提供足夠的信息；通常稀釋倍數(shù)較大，影響靈敏度；部分方法受溶劑的限制，例如TOC僅能用水。 |
任何方法都要經(jīng)過驗(yàn)證或確認(rèn)，驗(yàn)證項(xiàng)目參照ICH Q2，一般包括：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍、耐用性和回收率。這里所說的回收率不是準(zhǔn)確度檢測的樣品回收率，而是清潔驗(yàn)證活動(dòng)中的擦拭回收率或者淋洗回收率，這個(gè)我們在下面單獨(dú)開一節(jié)單獨(dú)來講回收率。
清潔驗(yàn)證中的非專屬性分析方法不用額外進(jìn)行專屬性方法的補(bǔ)充。
要在驗(yàn)證前進(jìn)行方案的設(shè)計(jì)和討論，合理的設(shè)計(jì)可以一次性的完成相關(guān)驗(yàn)證工作。
雖然大部分的污染物最終定義都是API，但是由于污染物殘留量很少，常規(guī)的API含量分析方法驗(yàn)證完成并不能代表方法的適用性，應(yīng)當(dāng)使用有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證策略來驗(yàn)證API污染物的檢測方法。
下表中是驗(yàn)證項(xiàng)目的部分關(guān)注點(diǎn)：
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序號 |
驗(yàn)證項(xiàng)目 |
目的及關(guān)注點(diǎn) |
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1 |
準(zhǔn)確度 |
應(yīng)選擇三個(gè)濃度各做三次，濃度范圍應(yīng)至少包含LOQ至合格限度。 |
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2 |
精密度 |
包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。 |
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3 |
專屬性 |
確保其它的物質(zhì)對污染物不造成干燥；非專屬性方法不需要進(jìn)行此項(xiàng)目。 |
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4 |
檢測限/定量限 |
可使用不同的方法確定，例如信噪比等。 |
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5 |
線性/范圍 |
濃度范圍應(yīng)至少包含LOQ至合格限度。 |
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6 |
耐用性 |
對分析方法中有可能產(chǎn)生波動(dòng)的參數(shù)進(jìn)行微調(diào)進(jìn)行驗(yàn)證。 |
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7 |
溶液穩(wěn)定性 |
與驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品可以保留多久的時(shí)間。 |
在某些情況下，例如生產(chǎn)IND階段的產(chǎn)品時(shí)，企業(yè)并不進(jìn)行清潔驗(yàn)證，而只是進(jìn)行清潔效果確認(rèn)，在這種情況下，往往不需要進(jìn)行完整的分析方法驗(yàn)證。
通常這種情況下，工廠使用限度法代替殘留檢測法。這種檢測可以用于臨床生產(chǎn)的確認(rèn)批（如果在線性范圍內(nèi)進(jìn)行全面驗(yàn)證則成本可能較高）。
這種檢測通常不能證明清潔工藝的重復(fù)性或耐用性，除非檢測結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于可接受限度。
當(dāng)檢測結(jié)果接近殘留限度時(shí)，往往需進(jìn)行評估后才能決定是否可以放行。
四、 總結(jié)
清潔工藝的開發(fā)和設(shè)計(jì)主要是針對以上幾點(diǎn)進(jìn)行合理的實(shí)驗(yàn)室研究和評估，并根據(jù)產(chǎn)品、設(shè)備等特性設(shè)定清潔方法的CQA和CPP，必要時(shí)進(jìn)行DOE或者OFAT的研究，并最終形成開發(fā)報(bào)告。但是基于目前國內(nèi)MAH的制度，很多CRO公司或者M(jìn)AH尚不明確后續(xù)CMO或者生產(chǎn)工廠的具體情況，這個(gè)時(shí)候也可以將部分研究工作后延，放到第二個(gè)階段正式實(shí)施前完成。
在第一階段清潔工藝開發(fā)和設(shè)計(jì)階段完成后，應(yīng)形成書面的相關(guān)資料后方可進(jìn)入第二階段，書面的資料一般包括但不限于：
清潔工藝開發(fā)和設(shè)計(jì)報(bào)告；
實(shí)驗(yàn)總結(jié)；
方法學(xué)驗(yàn)證方案及報(bào)告；
CQA和CPP評估報(bào)告。
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