摘要：抗生素類藥物中的聚合物研究一直是業(yè)內(nèi)研究的熱點(diǎn)，也是CDE審評(píng)的重點(diǎn)，本文以某抗生素為例，闡述其聚合物控制的研究思路及控制過(guò)程，不足和缺陷之處望同行批評(píng)指正。
一、背景介紹
抗生素類藥物質(zhì)量研究中最關(guān)注的一類雜質(zhì)為聚合物類雜質(zhì)，聚合物雜質(zhì)是指抗生素類藥物分子之間通過(guò)共價(jià)鍵的形式結(jié)合，形成的一系列不同分析量的雜質(zhì)，主要包括二聚體、三聚體以及多聚體等，其形成基質(zhì)為該類藥物分子中通常含有游離的氨基和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定的四元內(nèi)酰胺環(huán)，容易發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生聚合物雜質(zhì)。
目前已報(bào)道的檢測(cè)方法主要包括葡聚糖凝膠G10色譜法、尺寸排阻色譜法（SEC）、二維柱切換質(zhì)譜聯(lián)用法等，本文以某抗生素鈉為例，通過(guò)TSK-二維質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其聚合物進(jìn)行定性研究，然后鎖定聚合物的結(jié)構(gòu)，定向合成聚合物雜質(zhì)，采用RP-HPLC法對(duì)聚合物雜質(zhì)進(jìn)行定量控制。
二、TSK-二維質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其聚合物進(jìn)行定性研究
一維色譜條件
供試品配制：取抗生素鈉，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含主成分0.5mg的溶液，作為供試品溶液。
色譜柱：TSKgelG20SWXL（7.8mm×300mm，5.0μm）；流動(dòng)相A：磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，0.5mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.5mol/L磷酸二氫鈉溶液，體積比為63：37；流動(dòng)相B：乙腈；洗脫方式：等度洗脫；
洗脫程序?yàn)椋?/span>
檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣體積：10uL。
二維色譜條件：
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相A：5mM乙酸銨(調(diào)pH為4.0，優(yōu)選用乙酸調(diào)節(jié)pH)水溶液；流動(dòng)相B：乙腈；柱溫：室溫檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；
洗脫程序?yàn)椋?/span>
質(zhì)譜條件為：
質(zhì)譜掃描模式為：
二維收集條件：
主峰前兩個(gè)雜質(zhì)二維分離后MS定性研究結(jié)果顯示：雜質(zhì)1分子離子峰m/z為957，雜質(zhì)1分子離子峰m/z為957，雜質(zhì)2分子離子峰m/z為428。
雜質(zhì)1
雜質(zhì)2
根據(jù)雜質(zhì)I和雜質(zhì)2質(zhì)譜信息可知雜質(zhì)1為聚合物分子（m/z977），雜質(zhì)2為小分子雜質(zhì)。
根據(jù)雜質(zhì)1的質(zhì)譜信息，推斷形式機(jī)制如下：
降解途徑為兩分子抗生素發(fā)生酯化反應(yīng)產(chǎn)生：
三、RP-HPLC聚合物控制
通過(guò)制備液相獲得聚合物1對(duì)照品，采用反相高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行控制。
供試品溶液取本品，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.5mg的溶液。
對(duì)照品溶液取聚合物對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.5ug的溶液。
色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以三乙胺醋酸溶液(取三乙胺14ml與冰醋酸 5.7ml，加水稀釋至100ml，搖勻) –乙腈-水(1.2:120:880) ，并用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.2為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；進(jìn)樣體積20ul。雜質(zhì)1譜圖如下所示，保留時(shí)間70min處的峰為聚合物1。
四、結(jié)論
通過(guò)TSK色譜法將聚合物峰與主峰分離，運(yùn)用二維柱切換結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)將聚合物雜質(zhì)峰進(jìn)行二次分離并定性，然后利用合成制備液相技術(shù)進(jìn)行組分富集及制備，得到純度較高的聚合物單體對(duì)照品，進(jìn)而采購(gòu)常規(guī)的RP-HPLC法對(duì)聚合物雜質(zhì)進(jìn)行定量控制，確保了該抗生素品種的質(zhì)量可控。
五、參考文獻(xiàn)
[1] 2020版《中國(guó)藥典》二部。
[2] 注射用頭孢西丁鈉的聚合物雜質(zhì)分析[J].中國(guó)新藥雜志 2021 年第 30 卷第 11期。
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