摘要
活性藥物只有從脂質(zhì)體中釋放出來才可能在體內(nèi)進一步發(fā)揮治療作用，脂質(zhì)體釋藥過程可通過體外釋放行為來模擬，因此，體外釋放行為是脂質(zhì)體重要質(zhì)量控制指標(biāo)。文獻報道的常用脂質(zhì)體釋放行為評價方法有取樣分離法、透析法、流通池法、Franz擴散池法、ussing chamber法以及一些改良優(yōu)化的方法，每種評價方法都有特定的優(yōu)勢和應(yīng)用局限性。《中華人民共和國藥典》目前并沒有明確脂質(zhì)體體外釋放評價方法，這在一定程度上阻礙了脂質(zhì)體的應(yīng)用，因此，研究建立重復(fù)性好、操作性強、標(biāo)準(zhǔn)化程度高的體外釋放方法是脂質(zhì)體開發(fā)過程中亟待解決的問題。該文概括了近年來脂質(zhì)體體外釋放行為評價方法的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用情況，分析了每種釋放方法的特點，以期為脂質(zhì)體體外釋放行為評價方法的發(fā)展和完善提供參考。
正文
脂質(zhì)體是由脂質(zhì)雙分子層所形成的封閉囊泡，囊泡內(nèi)水相和雙分子層內(nèi)可以包裹不同類型的活性藥物。與其他傳統(tǒng)藥物載體系統(tǒng)相比，脂質(zhì)體基于納米結(jié)構(gòu)特點，可改善藥物滲透性和溶解性，提高難溶性藥物口服生物利用度，通過包載活性藥物來改善制劑體內(nèi)外穩(wěn)定性，提高療效，減少毒副作用，改善患者順應(yīng)性。
鑒于越來越多脂質(zhì)體產(chǎn)品進行注冊申報，美國、歐盟、中國藥品監(jiān)管機構(gòu)都針對脂質(zhì)體開發(fā)制定了對應(yīng)指導(dǎo)原則，這些指導(dǎo)原則都將體外釋放行為作為脂質(zhì)體的重要質(zhì)量控制指標(biāo)，要求在脂質(zhì)體開發(fā)過程中進行充分研究，因為脂質(zhì)體的藥物釋放、吸收、體內(nèi)安全性、有效性和體內(nèi)外穩(wěn)定性等都可在體外釋放行為中得以體現(xiàn)。
然而，目前《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)并沒有明確脂質(zhì)體體外釋放度評價方法，美國食品藥品管理局(FDA)在《脂質(zhì)體藥物CMC)、人體藥動學(xué)和生物等效性研究以及標(biāo)簽管理》僅指出“企業(yè)應(yīng)建立經(jīng)過驗證的體外釋放試驗分析方法”，也未明確可參考的方法，歐洲藥品管理局(European Medicines Agency，EMA)也未發(fā)布過脂質(zhì)體釋放行為評價方法。且由于對脂質(zhì)體釋藥機制了解不夠，研究人員自行開發(fā)的方法往往缺乏科學(xué)性、規(guī)范性和針對性，難以準(zhǔn)確評價脂質(zhì)體釋藥過程，這在一定程度上影響了脂質(zhì)體的開發(fā)和應(yīng)用。
筆者在本文主要結(jié)合脂質(zhì)體特性，對國內(nèi)外脂質(zhì)體體外釋放行為的評價方法進行概述，并簡要描述具體操作，分析這些方法應(yīng)用過程中的注意事項，提出體外釋放方法開發(fā)的關(guān)注要點，以期促進脂質(zhì)體體外釋放行為評價方法的完善和發(fā)展。
1、常用體外釋放方法
脂質(zhì)體體外釋放行為評價方法優(yōu)缺點總結(jié)見表1。
1.1 取樣分離法
取樣分離法是參照口服制劑溶出方法，將脂質(zhì)體直接置于釋放介質(zhì)中，控制攪拌速度和介質(zhì)溫度，定時取樣過濾、離心、超濾或離心超濾后測量藥物含量，計算藥物累積釋放量，根據(jù)釋放曲線來評價脂質(zhì)體體外釋放行為的方法。
取樣分離法的影響因素主要有介質(zhì)溫度、攪拌速度及介質(zhì)類型等。根據(jù)給藥部位，控制溫度在(37±0.5)或(32±0.5)℃以模擬皮膚溫度; 合適的攪拌速度可以防止脂質(zhì)體聚集，使已釋放的游離藥物在介質(zhì)中均勻分散; 釋放介質(zhì)可能影響藥物的穩(wěn)定性及釋放速率，需根據(jù)吸收部位及評價方法等進行合理選擇。
唐蘭如等采用薄膜超聲分散法制備大豆苷元與和厚樸酚復(fù)方長循環(huán)脂質(zhì)體，再將脂質(zhì)體與氫氯噻嗪、鉤藤堿及輔料壓片制備加味脈君安脂質(zhì)體片劑，采用取樣分離法對比研究加味脈君安脂質(zhì)體片劑和市售脈君安片的體外釋放行為，取樣后測定藥物含量。研究發(fā)現(xiàn)，與市售脈君安片相比，加味脈君安脂質(zhì)體體外釋放緩慢，預(yù)期體內(nèi)具有一定緩釋效果，符合高血壓用藥特征，有進一步開發(fā)潛力。
取樣分離法使用的裝置較常見，攪拌方式和取樣技術(shù)簡單，方法較成熟。然而，取樣過濾尤其是離心或超濾時可能破壞脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，且過濾時脂質(zhì)體容易堵塞濾孔，這會影響測定準(zhǔn)確性。因此，選用取樣分離法時需注意這些不利因素，操作過程中加以控制。
1.2 透析法
透析袋可截留一定相對分子量物質(zhì)，透析法是使用透析袋將釋放出的游離藥物與被脂質(zhì)體包載的藥物進行物理分離，于特定時間點取釋放介質(zhì)，測定藥物濃度，評估脂質(zhì)體釋放行為的一種方法。在脂質(zhì)體體外釋放行為評價方法中，透析法應(yīng)用比較廣泛，根據(jù)裝置及脂質(zhì)體加入位置不同，透析法分為正向動態(tài)透析法和反向動態(tài)透析法。
1.2.1 正向動態(tài)透析法
正向動態(tài)透析法是將脂質(zhì)體密封在透析袋中，兩端密封后放置于釋放介質(zhì)，按照設(shè)定的時間點取出適量釋放介質(zhì)，通過測定藥物含量來評價藥物體外釋放行為的方法。采用該方法，脂質(zhì)體與介質(zhì)不直接接觸，通過透析袋進行物理隔離，一般透析袋內(nèi)脂質(zhì)體溶液體積遠小于容器中釋放介質(zhì)體積。
吳斯宇等采用乙醇注入法制備環(huán)肽修飾的姜黃素/黃芩苷靶向共遞送納米脂質(zhì)體，運用正向動態(tài)透析法進行體外釋放研究，將該脂質(zhì)體溶液裝入透析袋密封后置于釋放介質(zhì)，開啟攪拌，定時取樣并補液。研究表明，該脂質(zhì)體釋放平穩(wěn)，具有一定緩釋作用。
林雯等采用逆向蒸發(fā)法制備替莫唑胺脂質(zhì)體，并運用正向動態(tài)透析法進行體外釋藥行為考察。將脂質(zhì)體溶液放至透析袋，兩端用夾子固定后置于100mL磷酸鹽緩沖溶液(pH值5.0)中，37℃水浴保溫，振蕩速度100r·min-1，定時取樣并補加空白介質(zhì)，研究顯示該脂質(zhì)體前2h屬于突釋階段，約釋放60%，其后進入緩釋階段，藥物釋放速度變緩，6h時基本釋放完畢。
趙笛等以薄膜分散法制備吸入用瑞德西韋脂質(zhì)體，運用正向動態(tài)透析法考察體外釋藥行為，將吸入用瑞德西韋脂質(zhì)體溶液置于透析袋，透析袋截留相對分子質(zhì)量3500，溶出介質(zhì)為200mL模擬肺液，取樣體積1mL，溫度控制在37℃，取樣后立即補液，研究發(fā)現(xiàn)瑞德西韋脂質(zhì)體在該釋放介質(zhì)中約4h即能夠釋放>90%。
正向動態(tài)透析法操作簡便，對設(shè)備要求較低，取樣后無需再進行過濾操作分離脂質(zhì)體和游離藥物。但需注意藥物與透析袋的相容性及透析袋對藥物的吸附性，而且透析袋內(nèi)水層幾乎不流動，會影響脂質(zhì)體釋放速率。此外，攪拌速度不宜過快，否則會導(dǎo)致透析袋動過快或幅度過大，容易引起破損，導(dǎo)致藥物泄露。
1.2.2 反向動態(tài)透析法
反向動態(tài)透析法是將脂質(zhì)體與釋放介質(zhì)直接接觸，即將測定樣品分散在透析袋外體積較大的介質(zhì)中的一種釋放方法。采用該方法可將脂質(zhì)體進行極大程度的稀釋，能更好地模擬脂質(zhì)體在體內(nèi)環(huán)境中的釋放行為。
戴雅彬等采用薄膜分散法制備雷公藤內(nèi)酯酮(triptonide，TPN)脂質(zhì)體，采取反向動態(tài)透析法評價TPN脂質(zhì)體體外釋放情況，量取空白介質(zhì)1mL裝至透析袋內(nèi)，透析袋截留分子量為14×106，然后將透析袋置于燒杯，于燒杯中加入釋放介質(zhì)37mL，加藥前充分平衡透析袋內(nèi)外環(huán)境，取TPN脂質(zhì)體溶液2mL加入透析袋外釋放介質(zhì)，控制溫度37℃，開啟攪拌，定時從透析袋內(nèi)取樣100μL測定透析袋內(nèi)TPN總濃度。研究發(fā)現(xiàn)TPN脂質(zhì)體無突釋現(xiàn)象，釋放60min內(nèi)為快速釋放期，360min時，TPN脂質(zhì)體基本釋放完全。
賈東升等用乙醇注入法制備淫羊藿苷元(icaritin，IT)脂質(zhì)體，用反向動態(tài)透析法測定IT脂質(zhì)體釋藥特性，釋放介質(zhì)為20%甲醇磷酸鹽緩沖液，取空白介質(zhì)1mL置透析袋，兩端封閉后置容器中釋放介質(zhì)，透析袋外介質(zhì)體積為200mL，溫度控制在37℃，以(100±5) r·min-1頻率振蕩2h進行系統(tǒng)平衡，取適量IT脂質(zhì)體加至透析袋外釋放介質(zhì)中，在規(guī)定時間取樣后測定透析袋內(nèi)藥物濃度，研究顯示IT脂質(zhì)體的體外釋放行為呈現(xiàn)緩釋性特征，72h累積釋放量>90%。
無論是正向動態(tài)透析法還是反向動態(tài)透析法，透析袋的使用存在大小及形狀各異、截留分子量選擇缺乏科學(xué)性等缺點，此外容器選用較隨意、取樣方法不合理、攪拌速度不固定等問題，均會對測定結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響，這也限制了透析法作為標(biāo)準(zhǔn)化脂質(zhì)體體外釋放評價方法的可行性。
1.3 尤斯灌流室(Ussing chamber)法
脂質(zhì)體進入體內(nèi)后通常先進行藥物釋放，處方工藝等因素均會對藥物體內(nèi)藥動學(xué)行為產(chǎn)生影響，進而影響脂質(zhì)體臨床使用有效性與安全性，而僅通過常規(guī)藥學(xué)體外評價指標(biāo)對比往往不能充分反映不同批次脂質(zhì)體體內(nèi)釋藥行為差異。因此，為充分評估脂質(zhì)體產(chǎn)品特性，除考慮釋放行為外，有必要進行組織藥物滯留情況比較研究，以充分研究脂質(zhì)體在組織中的釋放及殘留情況。Ussing chamber和Franz擴散池可以滿足對釋藥行為及組織滯留情況研究的需求，這兩種裝置既可以用于評價脂質(zhì)體的體外釋放情況，也可以評估藥物的透膜能力及在組織中的藥物滯留情況，因此在非注射用藥脂質(zhì)體，比如脂質(zhì)體凝膠劑、局部用脂質(zhì)體等開發(fā)中應(yīng)用較多。
Ussing chamber由丹麥科學(xué)家Ussing發(fā)明，主要由灌流室和電路系統(tǒng)構(gòu)成，灌流室兩個溶液貯器分別用來放置釋放介質(zhì)和供試品溶液，灌流方式包括循環(huán)式和持續(xù)式兩種，另有管道系統(tǒng)用來加熱和充入特定比例氣體(CO2、O2或N2)，電路系統(tǒng)用來測定電壓、電流、電容等。Ussing chamber技術(shù)可在脂質(zhì)體釋藥過程中維持膜完整性和活性，更真實模擬體內(nèi)釋藥環(huán)境。
一般來說，載藥脂質(zhì)體口服后，經(jīng)上消化道時大多數(shù)藥物已從脂質(zhì)體中釋放或吸收入血。不過，結(jié)腸定位給藥技術(shù)可以實現(xiàn)載藥脂質(zhì)體在結(jié)腸部位的釋放，這可確保脂質(zhì)體在到達釋藥部位前保持結(jié)構(gòu)完整性，以便更好發(fā)揮其特色治療作用，地塞米松磷酸鈉為臨床常用抗炎藥物，常用其溶液劑經(jīng)灌腸方法來治療各種結(jié)腸炎癥。李國鋒等采用二次乳化法制備地塞米松磷酸鈉(dexamethasone sodium phosphate，DSP)脂質(zhì)體，采用Ussing Chamber體外實驗法考察DSP脂質(zhì)體累積透過量及在黏膜內(nèi)的分布量，將分離好的結(jié)腸黏膜固定于Ussing chamber裝置，即刻于裝置黏膜側(cè)和漿膜側(cè)分別加入介質(zhì)溶液6mL，將整個裝置置37℃恒溫環(huán)境，并不斷于兩側(cè)介質(zhì)中通入氧氣和氮氣混合氣體至實驗結(jié)束，30min后分別于黏膜側(cè)和漿膜側(cè)加入脂質(zhì)體溶液1mL，對照組于黏膜側(cè)加入地塞米松磷酸鈉溶液1mL。研究發(fā)現(xiàn)，該脂質(zhì)體能夠使地塞米松磷酸鈉在結(jié)腸黏膜透過量得到延緩和減少。
雖然一些脂質(zhì)體可用于皮膚、口腔、眼部及直腸等部位，有增加藥物在局部黏膜組織中濃度、降低藥物吸收入血的速度等優(yōu)勢，但該類脂質(zhì)體制劑或口服脂質(zhì)體制劑較少見，而且多數(shù)處于實驗室研究階段，所以ussing chamber用于脂質(zhì)體體外釋放研究并不多。
1.4 Franz擴散池法
Franz擴散池可模擬脂質(zhì)體跨過半透膜或皮膚、腸壁等屏障的擴散作用，由供給室和接收室組成，兩室由膜層分隔開。將一定量脂質(zhì)體置于供給室內(nèi)，釋放介質(zhì)置于接收室，藥物可透過膜層轉(zhuǎn)移到接收室的釋放介質(zhì)中，釋放過程中需控制攪拌速度和介質(zhì)溫度。Franz擴散池使用的膜可以是透析袋、人工模擬膜、細(xì)胞以及人類和動物的皮膚或上皮組織。使用Franz擴散池進行體外試驗，尤其能夠客觀反映局部用藥脂質(zhì)體或半固體脂質(zhì)體的藥物釋放過程。
仲博等采用薄膜蒸發(fā)法制備殼聚糖修飾的麻黃堿脂質(zhì)體凝膠劑，采用Franz擴散裝置進行體外釋放和透過試驗，將供試品溶液置于供給室并將其頂部密封，將處理過的大鼠皮膚固定于供給室和接收室之間，接收室中注入釋放介質(zhì)，控制溫度為37℃，介質(zhì)為pH值6.8的磷酸鹽緩沖溶液，在設(shè)定時間點取樣并補液。研究表明，與普通劑型相比，脂質(zhì)體中麻黃堿緩釋性能良好，可緩慢釋放后透過大鼠皮膚到達接收室。
宋娟等采用逆向蒸發(fā)法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯-補骨脂脂質(zhì)體(epigallocatechin gallate psoralen liposome，EGCG-PL)，并利用Franz擴散裝置比較EGCG-PL與EGCG-補骨脂醇溶液組(epigallocatechin gallate psoralen solution，EGCG-PS)體外透皮性質(zhì)的差異，介質(zhì)為20%乙醇溶液，膜材采用處理好的大鼠皮膚，確保介質(zhì)與鼠皮充分接觸，將EGCG-PL及EGCG-PS加至供給室，將其頂部密封防止溶液揮發(fā)，排除氣泡干擾。攪拌速度為400r·min-1，控制溫度(32±0.5)℃，定時取樣5mL，并立即補等體積空白介質(zhì)，高效液相色譜法(HPLC)測定不同時間接受液中EGCG、補骨脂素及異補骨脂素的濃度，研究結(jié)果顯示EGCG-PL中EGCG、補骨脂素及異補骨脂素24h單位面積累積透過量和組織滯留量明顯高于EGCG-PS。
除了脂質(zhì)體處方因素外，攪拌速度及膜的材質(zhì)、來源、結(jié)構(gòu)和厚度，溫度和試樣體積等因素都會對Franz擴散池體外釋放曲線造成影響。Franz擴散池法優(yōu)勢在于裝置成本低，操作方便，取樣后無需再過濾分離，可避免藥物損失，缺點是攪拌效果難以保證，氣泡難以去除，可能導(dǎo)致釋放的藥物在接收室內(nèi)分布不均勻。Franz擴散池最初為體外研究無菌半固態(tài)制劑的藥物釋放和透皮效果而發(fā)明，因此對于其他劑型或其他給藥途徑的脂質(zhì)體適用度并不高。
1.5 流通池法
流通池法是使用恒流泵將釋放介質(zhì)貫通流通池，經(jīng)上端濾過后測定溶液中藥物濃度的方法，主要控制參數(shù)包括介質(zhì)溫度、泵流速、介質(zhì)類型、流動方式等。流通池有兩種類型，包括循環(huán)式流通池法和開放式流通池法，其中開放式流通池法釋放介質(zhì)通過流通池后不再返回，而是借助自動取樣裝置按設(shè)置時間點進行取樣，這樣可保證脂質(zhì)體與空白的釋放介質(zhì)充分接觸，一直保持適宜漏槽條件。
YUAN等基于多柔比星(doxorubicin，DOX)脂質(zhì)體，構(gòu)建了一種流通池體外評價方法，釋放介質(zhì)為100mmol·L-1 NH4HCO3、5%蔗糖、75mmol·L-1 2-(N-嗎啉)乙磺酸和5%羥丙基環(huán)糊精溶液，介質(zhì)體積為78.4mL，考察溫度分別為37，45和55℃，控制流速16mL·min-1，采用循環(huán)式模式，樣品加入量1.6mL。研究顯示，在釋放介質(zhì)中加入NH4HCO3 可促進DOX脂質(zhì)體釋放，但會引起藥物沉淀，在釋放介質(zhì)中加入羥丙基-環(huán)糊精可避免DOX脂質(zhì)體沉淀，優(yōu)化后的釋放度測定方法可區(qū)分不同成分、理化性質(zhì)和制備方法DOX脂質(zhì)體制劑。
張蓓以小分子抗腫瘤藥物阿糖胞苷(cytarabine，Ara-C)為模型藥物，采用薄膜分散法設(shè)計制備內(nèi)部膠凝化的脂質(zhì)體，采用流通池法評價阿糖胞苷內(nèi)部膠凝化脂質(zhì)體(cytarabine gel liposome，Ara-C-GL)和普通脂質(zhì)體(cytarabine common liposome，Ara-C-CL)體外釋放行為，樣品池直徑22.6mm，控制溫度(37±0.5)℃，釋放介質(zhì)為5%葡萄糖(加入1%疊氮鈉) 250mL，取樣量0.5mL。將脂質(zhì)體裝至透析袋內(nèi)，密封兩端袋口，放入樣品池中。樣品池尖端放入一顆直徑5mm紅寶石保護進水管，釋放介質(zhì)被CY-7活塞泵從介質(zhì)放置瓶中轉(zhuǎn)入流通池，計算機控制取樣器分別在預(yù)定時間取樣，HPLC測定樣品濃度。研究結(jié)果顯示，隨著流速增加，Ara-C-GL釋放加快，釋放量增加; 與Ara-C-CL相比，Ara-C-GL釋放初期快于Ara-C-CL，后期總體釋放顯著慢于Ara-C-CL，表現(xiàn)出較好緩釋效果。
流通池法是一種可靠的復(fù)雜脂質(zhì)體產(chǎn)品體外釋放分析方法，該方法受操作誤差影響較小。對于長效脂質(zhì)體制劑，循環(huán)式流通池法可有效防止介質(zhì)揮發(fā)，滿足釋放度測定在較長時間內(nèi)進行的需求，能有效降低測量誤差，但流通池也存在設(shè)備價格高、操作復(fù)雜、過濾器易被異物堵塞、過濾器和玻璃珠易吸附藥物等缺點。
1.6 結(jié)合法
結(jié)合法是指通過對取樣分離法、流通池法和透析法等裝置進行改進、完善而用于脂質(zhì)體體外釋放行為評價的方法，其中應(yīng)用最多的是取樣分離法與透析法相結(jié)合的方法。取樣分離與透析結(jié)合可以借助常規(guī)溶出法的攪拌、控溫、自動取樣、補液等功能及透析袋對藥物的裝載、截留功能，更加簡潔高效地完成對脂質(zhì)體體外釋放行為的考察。
張辛寧等采用薄膜分散法制備紫杉醇衍生物脂質(zhì)體，按照籃法與正向透析結(jié)合方法進行體外釋放測定，將脂質(zhì)體溶液置于透析袋，兩端封閉扎緊后置于溶出轉(zhuǎn)籃，然后放入溶出杯，杯中已加入釋放介質(zhì)1000mL，盡量保證有效釋放透析袋長度一致，釋放介質(zhì)為0.5%聚山梨酯-80溶液，轉(zhuǎn)速100r·min-1，取樣體積10mL，取出溶液經(jīng)孔徑0.45μm有機微孔濾膜過濾后檢測。研究表明，該脂質(zhì)體有一定緩釋效果，釋放速率顯著低于對照組。
李武超等采用乙醇注入法制備了一種D-甘露糖修飾的黃芩苷陽離子脂質(zhì)體，采用取樣分離的槳法與正向透析法結(jié)合，釋放介質(zhì)為pH值7.4磷酸鹽緩沖液，將脂質(zhì)體裝入透析袋，兩端夾緊密封，放入溶出杯，控制溫度(37±0.5)℃，攪拌速度80r·min-1，按預(yù)定時間取樣1mL并補液，測定藥物含量。研究發(fā)現(xiàn)，該脂質(zhì)體具有明顯體外緩釋特性，體外釋藥行為符合Ritger-Peppas方程。
羅盼生等以硫酸銨梯度法制備多柔比星長循環(huán)脂質(zhì)體，采用取樣分離小杯槳法與透析法結(jié)合法考察該脂質(zhì)體體外釋放行為，釋放介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液，介質(zhì)用量為50mL，將脂質(zhì)體溶液裝于透析袋，兩端扎緊密封，置于溶出儀槳葉底部，控制溫度37℃，轉(zhuǎn)速50r·min-1，取樣體積3mL。研究發(fā)現(xiàn)，該脂質(zhì)體體外釋放具備良好緩釋效果。
結(jié)合法一般需基于脂質(zhì)體特點，充分利用實驗室設(shè)備，并需對構(gòu)建的新的體外溶出方法進行適當(dāng)驗證，以評估該方法的科學(xué)性和適用性。因此，結(jié)合法并不是普適方法。應(yīng)用過程中，需注意透析袋材質(zhì)、截留分子量、攪拌速度、控制溫度、釋放介質(zhì)體積、不同方法的結(jié)合方式對脂質(zhì)體釋放行為造成的影響。
1.7 其他方法
1.7.1 電化學(xué)法
自動化在線監(jiān)測可直接測定釋放介質(zhì)中的藥物濃度，不會損失藥物或制劑，從而避免誤差，電化學(xué)法就是一種自動化在線監(jiān)測方法，其可快速在線評估體外釋放情況。
MORA等采用伏安法通過測定多柔比星鹽酸鹽脂質(zhì)體的氧化還原反應(yīng)時產(chǎn)生的化學(xué)信號，實時在線評價多柔比星體外釋放度。研究發(fā)現(xiàn)，多柔比星鹽酸鹽脂質(zhì)體在前1h內(nèi)為突釋階段，此后藥物緩慢釋放。盡管這種方法可直接測定藥物的含量，但其僅適用于具有電化學(xué)信號活性藥物的測定，且每種藥物的敏感性和響應(yīng)性差異較大，因此該方法的應(yīng)用具有較大局限性。
1.7.2 樹脂吸附法
金沙在一系列脂質(zhì)體體外釋放方法研究的基礎(chǔ)上，開發(fā)出一種新的樹脂吸附法，并用模型藥物進行了驗證，該方法原理是利用樹脂吸附釋放的游離藥物，而樹脂不溶于水，因此免除了分離釋放介質(zhì)中藥物和樹脂上吸附的藥物的步驟。相較于常規(guī)的透析方法和離心分離法，樹脂吸附法能快速分離已釋放的藥物，節(jié)約測定時間和成本，并且能較好區(qū)分不同處方工藝的丙泊酚脂質(zhì)體。在該研究中，金沙選取了脂溶性的羥基積雪草酸(madecassic acid，MD)以及水溶性的氧化苦參堿(oxymatrine，OMT)作為模型藥物。研究發(fā)現(xiàn)，MD氫化大豆卵磷脂(hydrogenated soybean phosphatidylcholine，HSPC)脂質(zhì)體和MD海藻酸鈉殼聚糖層自組裝脂質(zhì)體具有明顯的緩釋作用，在超過MD漏槽條件下，樹脂吸附法也能較好地測定脂質(zhì)體釋放速率，一定程度上解決了難溶性藥物無法達到漏槽條件的問題。
該方法創(chuàng)新點在于將一定量樹脂加入到釋放介質(zhì)中，優(yōu)化了釋放方法，樹脂可以起到吸附游離藥物的作用，該法對其他藥物的適用性有待進一步研究。
1.7.3 溶出改進方法
溶出改進方法主要基于取樣分離法、結(jié)合法測定的儀器裝置，改善這些方法中影響檢測結(jié)果的不可控因素，對裝置進行改進優(yōu)化，并在此基礎(chǔ)上設(shè)計出一套規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)化的改良體外釋放測定裝置。
歐婷使用新的槳桿部件，設(shè)計和改進了透析袋裝置，使透析管與槳桿相連，采用自行設(shè)計的透析裝置E2建立了釋放度透析檢測方法，利用該方法測定了鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液的體外釋放情況。研究發(fā)現(xiàn)，該新方法普適性良好，改良的釋放裝置在穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、可操作性、規(guī)范性等方面達到了預(yù)期效果。ABDEL-MOTTALEB等將轉(zhuǎn)籃改造成底部為透析袋的玻璃籃，用其對比研究布洛芬脂質(zhì)體、脂質(zhì)納米囊的體外釋放行為。研究發(fā)現(xiàn)與常規(guī)透析法相比，玻璃籃透析法能顯著區(qū)分不同脂質(zhì)體體外釋放行為的差異。
2、結(jié)束語
合適的釋放介質(zhì)種類、溫度、轉(zhuǎn)速等均是脂質(zhì)體體外釋放行為方法建立過程中的技術(shù)挑戰(zhàn)，另外需注意透析袋材質(zhì)、截留分子量、形狀、大小、預(yù)處理方法等產(chǎn)生的影響。透析袋可能吸附藥物，因此，需注意透析袋的材質(zhì)。常用的透析袋包括醋酸纖維素酯膜和再生纖維素膜兩種。其中，醋酸纖維素酯膜疏水性強，適合親水性藥物釋放時使用; 透析袋另一重要參數(shù)是截留分子量，選擇合適截留分子量的透析袋，可保證游離藥物的透膜速度; 適當(dāng)?shù)那疤幚矸椒梢允雇肝龃玫匠浞秩苊?，更利于游離藥物透過，常用前處理方法是將透析袋在釋放介質(zhì)中浸泡或煮沸。
不同脂質(zhì)體藥物品種有不同的釋放度檢查方法，尤其是新興或改進的方法，規(guī)范性差、缺乏研究驗證、適用范圍窄，給質(zhì)量控制與評價等帶來不確定性。因此，建立重復(fù)性好、操作性強、標(biāo)準(zhǔn)化程度高的釋放度方法是脂質(zhì)體體外釋放行為開發(fā)中的重大技術(shù)難點。
在進行脂質(zhì)體體外釋放行為測定時，需詳細(xì)記錄所用的方法、試驗條件和設(shè)備型號、介質(zhì)類型、攪拌速度、控制溫度等關(guān)鍵參數(shù)，充分考慮釋放方法的適用性。此外，需繪制完整的脂質(zhì)體體外釋放曲線，釋放的終點確定要合理，至少確保釋放已達平臺期，或累積釋放超過80%。無論是使用現(xiàn)有方法或修訂、完善的新方法，均應(yīng)經(jīng)過充分驗證，以確保釋放方法的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。此外，釋放方法區(qū)分性要好，處方和生產(chǎn)工藝的變化能在釋放曲線中得到體現(xiàn)。
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