摘 要： 采用高效液相色譜-熒光檢測法測定化妝品中α-三聯(lián)噻吩。樣品經(jīng)甲醇超聲提取20 min，以C18色譜柱進行分離，以乙腈-水（體積比為85∶15）為流動相進行洗脫，用熒光檢測器測定，色譜峰面積外標(biāo)法定量。α-三聯(lián)噻吩的質(zhì)量濃度在5～200 ng/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 9，方法的檢出限為10 ng/g。以霜類、乳液類、水劑類及液態(tài)油基類4種空白基質(zhì)進行加標(biāo)回收試驗，在3種不同加標(biāo)水平下，回收率為94.6%～98.6%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～2.2%（n=6）。該方法樣品處理簡便、快捷，分析靈敏度高，可用于化妝品中α-三聯(lián)噻吩的檢測。
α-三聯(lián)噻吩(又稱為α-T)是一種光敏化合物，廣泛存在于菊科植物如萬壽菊、小萬壽菊及孔雀草等，其相關(guān)提取物或作為香精成分運用于香水及其它化妝品中。因為其中含有α-三聯(lián)噻吩，其相關(guān)提取物/油作為化妝品原料可能產(chǎn)生光毒性的安全問題。
通過文獻調(diào)研，我國目前尚無化妝品中α-三聯(lián)噻吩法定測定方法和限值標(biāo)準(zhǔn)，化妝品中α-三聯(lián)噻吩的檢測方法鮮有文獻報道。目前植物中α-三聯(lián)噻吩的含量檢測方法包括熒光分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等?！吨腥A人民共和國藥典(2020年版)》一部收載了禹州漏蘆中α-三聯(lián)噻吩含量的測定方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1%乙酸溶液為流動相，使用紫外檢測器檢測α-三聯(lián)噻吩含量。α-三聯(lián)噻吩本身具有熒光特性，在一定波長的光照下可以發(fā)出黃綠色熒光。α-三聯(lián)噻吩在植物中含量較低，一般植物提取物添加到化妝品含量也很低，所以對α-三聯(lián)噻吩檢測方法要求靈敏度高，能夠檢測化妝品中痕量水平的α-三聯(lián)噻吩。
廣東省藥品檢驗所陳桂琴課題組采用超聲萃取-高效液相色譜法測定化妝品中α-三聯(lián)噻吩，用熒光檢測器測定，該方法樣品處理簡單、快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
1、 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
超高效液相色譜儀：SHIMADZU LC-20AT型，配熒光檢測器、二極管陣列檢測器，日本島津儀器有限公司。
超聲波清洗器：S300H型，德國Elma公司。
超純水發(fā)生器：Milli Q Reference型，美國密理博公司。
電子天平：XS205DU型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。
α-三聯(lián)噻吩對照品：質(zhì)量分數(shù)為99.0%，源葉生物科技有限公司。
乙腈、甲醇：均為色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易(上海)有限公司。
正己烷、丙酮、冰乙酸：均為分析純，廣州化學(xué)試劑廠。
化妝品樣品：萬壽菊精油小滾珠18號、野生埃及萬壽菊單方精油、萬壽菊祛痘凝膠，市售。
1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
準(zhǔn)確稱取α-三聯(lián)噻吩對照品10 mg (精確至0. 01 mg)，置于20 mL 棕色容量瓶中，用少量丙酮溶解，甲醇定容至標(biāo)線，搖勻，配制成α-三聯(lián)噻吩標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。
用甲醇將α-三聯(lián)噻吩標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為5、10、20、50、100、200 ng/mL 的α-三聯(lián)噻吩系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.3 色譜條件
色譜柱：Phenomenex Titank C18柱(250 mm×4.6 mm，5 µm，美國菲羅門公司)；流動相：乙腈–水(85∶15，體積比，下同)，流量為1.0 mL/min；熒光檢測波長：激發(fā)波長為352 nm，發(fā)射波長為428 nm；柱溫：30 ℃；進樣體積：5 μL。
1.4 樣品處理
稱取化妝品樣品0.5 g (精確到0.1 mg)，置于10 mL具塞比色管中，加入3 mL 甲醇，渦旋30 s，使樣品分散均勻，用甲醇定容至標(biāo)線，超聲提取20 min，靜置至室溫，用0.22 μm尼龍66 濾膜過濾后，濾液作為樣品溶液備用。
2、 主要結(jié)果與討論
2.1 色譜條件的選擇
2.1.1 檢測器的選擇
《中華人民共和國藥典(2020年版)》一部收載了禹州漏蘆中α-三聯(lián)噻吩含量的測定方法，使用紫外檢測器，檢測波長為352 nm。α-三聯(lián)噻吩具有熒光特性，在一定波長的光照下可發(fā)出黃綠色熒光。王玉健等利用熒光分光光度法測定α-三聯(lián)噻吩，最大激發(fā)波長為352 nm，最大熒光發(fā)射波長為428 nm。本實驗采用高效液相色譜法，配置熒光檢測器及二極管陣列檢測器，在同等色譜條件下測定α-三聯(lián)噻吩，其中熒光檢測器設(shè)置激發(fā)波長352 nm，發(fā)射波長428 nm，二極管陣列檢測器設(shè)置檢測波長為352 nm。結(jié)果表明，使用熒光檢測器獲取的α-三聯(lián)噻吩方法檢出限為0.5 ng/mL，使用二極管陣列檢測器獲取的方法檢出限為為100 ng/mL，可見熒光法檢出限更低，靈敏度高，可用于檢測樣品中的痕量α-三聯(lián)噻吩。由于熒光檢測法同時設(shè)定了特征的激發(fā)波長和發(fā)射波長，能夠有效排除其它物質(zhì)的干擾，選擇性好，準(zhǔn)確度高。綜上所述，本實驗選擇熒光檢測器作為檢測器。
2.1.2 流動相選擇
分別選擇甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%乙酸溶液、甲醇-0.1%乙酸溶液4種流動相，考察其對色譜分離的影響。結(jié)果表明，4種流動相下的色譜峰形均良好。本實驗選擇乙腈-水作為流動相，目標(biāo)物峰形良好，基線平穩(wěn)，拖尾因子較小，且保留時間適中。
2.1.3 色譜柱及柱溫的選擇
為了考察不同色譜柱的α-三聯(lián)噻吩出峰情況，分別選取了Phenomenex Titank C18 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK C18 MGⅡ柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK C18 UG120柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)三種型號色譜柱對α-三聯(lián)噻吩標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液和樣品溶液進行測定。結(jié)果表明，Phenomenex Titank C18 柱的色譜峰形對稱、尖銳，保留時間適中，因此選擇該型號色譜柱。
分別考察25、30、35、40 ℃柱溫條件下α-三聯(lián)噻吩的色譜行為，結(jié)果表明：當(dāng)柱溫升高時，α-三聯(lián)噻吩保留時間逐漸前移，其它無顯著變化。為了保護色譜柱和方便溫度控制，選擇實驗柱溫為30 ℃。
圖1 α-三聯(lián)噻吩標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
2.2 樣品提取溶劑的選擇
α-三聯(lián)噻吩不溶于水，可溶于甲醇、丙酮等溶劑。分別選擇甲醇、丙酮、甲醇-丙酮(體積比為4∶1)混合溶液作為提取溶劑進行試驗，結(jié)果表明用丙酮處理液態(tài)油基基質(zhì)、乳劑基質(zhì)、霜劑基質(zhì)得到的樣品溶液比較澄清，用甲醇處理得到的樣品溶液比較渾濁。通過比較空白基質(zhì)加標(biāo)回收率，發(fā)現(xiàn)幾種提取溶液的回收率在90%～100%之間，提取效果均能滿足分析要求?？紤]到丙酮揮發(fā)性較強，最終選擇甲醇作為提取溶劑。
引用本文： 陳桂琴，張小媚 . 高效液相色譜-熒光檢測法測定化妝品中α-三聯(lián)噻吩［J］. 化學(xué)分析計量，2023，32（3）：34. (CHEN Guiqin, ZHANG Xiaomei. Determination of α-terthiophene in cosmetics by HPLC with fluorescence detector[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2023, 32(3): 34.)
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