當遇到限度要求很低（ppm）的方法開發(fā)，而常規(guī)HPLC達不到要求的時候，怎么辦呢？也許LC-MS是個很好的辦法，那么怎么進行LC-MS定量方法開發(fā)呢?本文總結下日常LC-MS定量方法開發(fā)步驟。
1、前處理：尋找合適的稀釋劑
找稀釋劑，主物質濃度至少1mg/ml能溶解，雜質對照品至少0.1mg/ml濃度能溶解。
情況一：主物質能溶解，雜質不能溶解。
解決方法：需更換稀釋劑
情況二：雜質能溶解，主物質不能溶解。
解決方法：找到一個能溶解主物質的稀釋劑，然后用能溶解雜質的稀釋劑進行二級稀釋，過濾取樣。
理想情況：找到主物質和雜質均能溶解的稀釋劑
關鍵：主物質需要有溶清過程，雜質需全部溶解
稀釋劑后續(xù)需考察：是否有溶劑效應，溶液穩(wěn)定性
2、找目標峰：結合HPLC確認目標峰分子量
先HPLC設置一個勻速洗脫梯度，找到目標峰
根據(jù)結構式確認MS分子量并確認基峰，記住MS的分量看精確分子量不是摩爾分子量
3、提取離子流：讓目標峰在合適的響應范圍內
走一針溶液，獲取盡可能多的信息，可以有效提升方法開發(fā)的效率。
根據(jù)限度配制限度濃度的溶液，看看靈敏度是否符合要求。
若MS離子流響應不夠，先設置序列表找最優(yōu)Frag值，然后在這基礎上調整其他參數(shù)。
4、方法優(yōu)化：調整梯度讓主物質和雜質分離完全
調整梯度
LC可以實現(xiàn)第一步的分離，若LC分離不好，MS可以實現(xiàn)第二步的分離。
該例子，利用LC的方法就解決了分離，在MS中也就自然完全分開了。
確認至此，方法已大致開發(fā)好，后期考察溶液穩(wěn)定性，準確度等相應參數(shù)。
實戰(zhàn)案例
掃描頻率參數(shù)，結果大不相同
Scan/Dwell time (ms): 200
Scan/Dwell time (ms): 1000
掃描頻率是在質譜儀中進行設置的，不同的掃描頻率將通過以不同的速率和精度檢測樣本中存在的化合物。由于不同頻率獲得的數(shù)據(jù)不同，因此結果也會不同。選用特定的掃描模式取決于化合物的類型和目的，因此建議了解每種掃描模式的優(yōu)缺點和適用范圍。
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