溶出度是指藥物從片劑、膠囊劑等固體制劑，在規(guī)定溶出介質(zhì)中的溶出的速度和程度，是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的內(nèi)在指標(biāo)之一，是一種模擬口服固體制劑在腸胃道中的崩解和溶出的體外實(shí)驗(yàn)法。
對(duì)于任何劑性的溶出實(shí)驗(yàn)，藥物溶出量必須通過(guò)適宜的分析方法檢測(cè)，通常稱為終點(diǎn)分析，然后結(jié)合實(shí)際取樣方法以及在取樣后是否補(bǔ)液，將所得的各個(gè)樣品的濃度通過(guò)一定算法轉(zhuǎn)化為藥物釋放量。
盡管可以使用任何對(duì)藥物濃度敏感的分析方法，但最常用的方法是紫外可見(jiàn)分光光度法和帶紫外檢測(cè)器的高效液相色譜法。每項(xiàng)檢測(cè)方法都有其各自的優(yōu)勢(shì)。
在紫外或可見(jiàn)波段監(jiān)測(cè)吸收度，只需最少或不需樣品樣品制備。這種快速檢測(cè)方法有助于進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)或者在較密的取樣點(diǎn)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。隨著光纖傳感器的應(yīng)用，可以不需取樣直接通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)探針來(lái)測(cè)定吸收度。這些探針可以在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量數(shù)據(jù)，這對(duì)于那些能夠迅速溶解的制劑是非常有利的。
采用分光光度法測(cè)定的缺陷，是輔料若在測(cè)定波長(zhǎng)處存在吸收或者未溶的輔料，會(huì)對(duì)光線產(chǎn)生散射，從而影響測(cè)定結(jié)果。高效液相色譜法由于具備色譜分離能力因此可以避免干擾，增強(qiáng)檢測(cè)方法的專屬性。
第一幕：溶出度測(cè)定方法
那么高效液相色譜法是如何準(zhǔn)確地標(biāo)定藥物溶出度呢？其實(shí)是有三種方法：自身對(duì)照發(fā)法、對(duì)照品對(duì)照法和吸收系數(shù)法。
本案例使用的是對(duì)照品對(duì)照法。
對(duì)照品對(duì)照法又分為標(biāo)準(zhǔn)曲線法和單點(diǎn)外標(biāo)法。
標(biāo)準(zhǔn)曲線法準(zhǔn)確度較單點(diǎn)外標(biāo)法高，但是標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制過(guò)程比較麻煩，往往要多次稀釋，這很考驗(yàn)實(shí)驗(yàn)員移液的準(zhǔn)確性。有一種方法可以不用人為去稀釋對(duì)照品溶液，那就是用儀器進(jìn)不同體積的對(duì)照品溶液，也就是用儀器來(lái)代替人稀釋對(duì)照品，以下簡(jiǎn)稱儀器稀釋法。
舉例：溶出樣品進(jìn)樣量為10微升，全溶溶出為0.1毫克/毫升，而對(duì)照品溶液的濃度為0.2毫克/毫升，那么對(duì)照品的進(jìn)樣量可以設(shè)為3、4、5、6、7微升，也可以為其他進(jìn)樣體積，前提是對(duì)照品的進(jìn)樣濃度范圍要涵蓋溶出樣品的溶出濃度范圍。
用儀器稀釋法最重要的一個(gè)前提，是儀器對(duì)高濃度樣品的響應(yīng)和對(duì)低濃度樣品的響應(yīng)沒(méi)有明顯差異，這里指的是進(jìn)10微升0.1毫克/毫升的對(duì)照品與5微升0.2毫克/毫升的對(duì)照品，儀器響應(yīng)沒(méi)有明顯差異。
第二幕：對(duì)照品配制注意事項(xiàng)
下面我們來(lái)講講在對(duì)照品溶液配制過(guò)程中的注意事項(xiàng)：
（1）單點(diǎn)外標(biāo)法
在配置對(duì)照品溶液前，要確定天平經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)、稱量準(zhǔn)確、誤差在允許范圍內(nèi)，確保對(duì)照品在稀釋劑中完全溶解、定容準(zhǔn)確、搖勻。建議平行配制兩份溶液，一份做對(duì)照品一份為復(fù)核對(duì)照品。
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線法
當(dāng)樣品的規(guī)格特別小時(shí)，對(duì)照品很難一步配到目標(biāo)濃度，需稀釋。無(wú)需稀釋時(shí)，對(duì)照品溶液配制的注意事項(xiàng)同單點(diǎn)外標(biāo)法。
第三幕：稀釋對(duì)照品注意事項(xiàng)
按照以下步驟稀釋對(duì)照品：
（1）檢查
使用前，先檢查移液器是否已校準(zhǔn)，不要使用未校準(zhǔn)的移液器；其次，檢查噴嘴是否堵塞，如果堵塞，則不能使用。
（2）潤(rùn)洗
在吸取液體之前，必須進(jìn)行潤(rùn)濕和洗滌。潤(rùn)濕和洗滌過(guò)程不應(yīng)對(duì)被吸取的液體造成污染。特別是管壁有水滴時(shí)，吸取速度要快，以保證被吸液體不回流，避免管內(nèi)液體對(duì)被吸液體的稀釋。
（3）吸取
吸液時(shí)，移液管插入的液面不宜過(guò)深或過(guò)淺。過(guò)淺可能造成吸空，吸空不僅會(huì)污染洗耳球，如果吸入的是強(qiáng)酸強(qiáng)堿等有毒試劑，還會(huì)非常危險(xiǎn)；過(guò)深會(huì)造成管壁外粘有更多的液體，影響測(cè)定精度。
（4）放出
釋放液體時(shí)，用食指控制流出速度，使液體均勻流出。
（5）注意移液器本體是否標(biāo)有“吹”字
如果有則需要用洗耳球?qū)娮焯幍臍堃捍党觥Ｈ绻麤](méi)有則不要吹出噴嘴內(nèi)殘留溶液，否則會(huì)導(dǎo)致實(shí)際量比理論量偏多。
第四幕：溶出結(jié)果異常案例分享
（1）溶出條件
標(biāo)定方法為標(biāo)準(zhǔn)曲線法，溶出介質(zhì)pH6.8+0.05%Tween 80、稀釋劑pH7.4緩沖鹽。
（2）介質(zhì)配制
準(zhǔn)確稱取20.00 mg左右的對(duì)照品置100 mL容量瓶中，用稀釋劑（pH7.4緩沖鹽）定容，超聲使溶解，準(zhǔn)確移取此溶液1.0 mL置100 mL的容量瓶中，用稀釋劑定容搖勻。配制平行樣，檢查系統(tǒng)適用性合格。
檢測(cè)結(jié)果溶出度為110%左右，看到這種結(jié)果你會(huì)有什么想法呢？
下面我把我自己的想法一步一步列出來(lái)，看看大家想的是否和我想的一樣！
首先對(duì)于專業(yè)從事分析研究的我來(lái)說(shuō)，幾年的工作經(jīng)驗(yàn)，我不認(rèn)為自己會(huì)在移液這一步出現(xiàn)問(wèn)題，再說(shuō)這個(gè)片是沒(méi)有檢測(cè)過(guò)含量直接檢的溶出，所以我首先懷疑這個(gè)結(jié)果偏高的原因是片的原料藥含量本來(lái)就是110%。那溶出出現(xiàn)110%的結(jié)果不是正常的嗎?
于是我用檢測(cè)溶出的方法同樣檢測(cè)了樣品的含量，結(jié)果樣品的含量正常100%左右。那就不是片子本身的原因了，肯定是定量不準(zhǔn)確引起的。
（3）對(duì)照品配制
準(zhǔn)確稱取20 mg的對(duì)照品置200 mL的容量瓶中，加入稀釋劑定容，超聲使溶解，搖勻。平行配制復(fù)核對(duì)照品溶液。
（4）含量樣品溶液的配制
隨機(jī)取1片此樣品片置10毫升的容量瓶中，加入稀釋劑定容，超聲30分鐘（可以保證完全提?。瑢悠防鋮s置室溫、搖勻，取適量過(guò)濾進(jìn)樣。平行配制10份。
含量檢測(cè)結(jié)果為正常值100%左右。
那為什么溶出度就是110%呢？其實(shí)我將樣品以及對(duì)照品的配制過(guò)程寫出來(lái)就是為了讓大家來(lái)對(duì)比，思考。
引起溶出度異常有沒(méi)有配液的原因？溶出的對(duì)照品稀釋了200倍，在稀釋倍數(shù)特別大的情況下引進(jìn)的誤差也會(huì)很大，你是否也想到了這點(diǎn)呢？
于是，為了排除因稀釋倍數(shù)過(guò)大造成溶出度異常，我采用了逐步稀釋法：
準(zhǔn)確稱取20.00 mg左右的對(duì)照品置100 mL的容量瓶中，用稀釋劑定容搖勻，超聲使其溶解，用移液管精密移取5.0 mL的此溶液置50 mL的容量瓶中，用稀釋劑定容搖勻，再用移液管精密移取5.0 mL的此溶液置50 mL的容量瓶中，加入稀釋劑定容搖勻。配制平行樣檢測(cè)系統(tǒng)適用性合格。
檢測(cè)溶出樣品，結(jié)果依然令人悲傷，還是110%。
在這種情況下我開(kāi)始懷疑是不是自己移液真的不準(zhǔn)。于是我用上述對(duì)照品作為母液以其濃度的1%、20%、50%、80%、100%、120%、150%稀釋為不同水平的線性溶液，考察線性相關(guān)系數(shù)，R=0.99999，截距特別小，基本過(guò)原點(diǎn)，這就足以說(shuō)明我的移液操作沒(méi)有問(wèn)題。
那是什么原因?qū)е碌娜艹銎吣兀?/span>
換種說(shuō)法，片子本身含量為100%左右，而標(biāo)定的溶出結(jié)果偏大，那就是說(shuō)明對(duì)照品溶液的實(shí)際濃度比理論濃度低了，所以導(dǎo)致結(jié)果偏大。那又是什么原因?qū)е聦?duì)照品溶液的實(shí)際濃度變低了呢？
“吸附”！
生物藥的蛋白分子和化藥不一樣，特別容易被吸附，在濃度比較低時(shí)吸附現(xiàn)象更加突出，聰明的你是否也想到了這一點(diǎn)呢？
于是我用溶出介質(zhì)代替稀釋劑配制對(duì)照品溶液，無(wú)論是100倍稀釋還是逐步稀釋都得到了正常的結(jié)果。那為什么使用溶出介質(zhì)就能有效降低或避免吸附呢？原因是溶出介質(zhì)中的表面活性劑有降低或避免吸附的作用，這是來(lái)自前人的經(jīng)驗(yàn)哦！
第五幕：案例結(jié)論
通過(guò)這個(gè)案例我們需要總結(jié)出以下幾點(diǎn)：
a. 配制溶出樣品的對(duì)照品溶液時(shí)，最好用溶出介質(zhì)去配，前提要保證對(duì)照品在溶出介質(zhì)中能全溶。
b. 雖然本案例導(dǎo)致溶出度結(jié)果異常的原因不是高倍數(shù)稀釋對(duì)照品溶液，但是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中也最好不要高倍數(shù)稀釋，如有需要，可以逐步稀釋。
c. 有時(shí)候即使溶出度有較大程度的偏離，在含量沒(méi)有檢測(cè)的前提下不能視為結(jié)果異常，如果時(shí)間允許應(yīng)先檢測(cè)含量，再檢測(cè)溶出。
d. 最后一點(diǎn)，也是最重要的一點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，我們要首先學(xué)會(huì)檢查自身的原因，回憶分析自己的操作過(guò)程，在確定操作無(wú)誤的條件下再去考慮樣品、儀器等的原因。
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