峰形異常（包括峰拖尾，前延和裂分等）是高效液相色譜中最常見的問題之一，因此在絕大多數(shù)系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)中都包括峰形的測(cè)定，量化的峰形也可以隨時(shí)被追蹤到。
不好的峰形會(huì)減少鄰近洗脫出來的峰的分離度（如圖1），降低測(cè)定的峰面積的精確度和準(zhǔn)確度；同時(shí)，峰形的變化也是色譜柱開始失效的信號(hào)之一。對(duì)于色譜分析人員來說，快速找到異常背后的原因并針對(duì)性地解決也是一項(xiàng)重要的專業(yè)能力。
圖1 峰型異常
一、出現(xiàn)相同類型的拖尾峰
色譜圖中所有峰拖尾或峰變形通常是由物理作用導(dǎo)致的，而非化學(xué)作用。
如果色譜圖中的峰形均表現(xiàn)相同類型的變形（圖2），主要問題發(fā)生在分析物在色譜柱中遷移之前。
圖2. 由于色譜柱篩板部分堵塞或色譜柱塌陷，色譜圖中所有峰形均出現(xiàn)了變形
1、原因剖析：
玻璃料或柱頭的空隙部分堵塞，此類峰變形最常見的原因是篩板部分堵塞或色譜柱頭塌陷。
除非在推薦的pH范圍之外使用色譜柱，否則現(xiàn)在的柱子基本不會(huì)受到空隙的影響。
但是，篩板堵塞仍然是一個(gè)普遍存在的問題。對(duì)于5μm的色譜柱，入口端的篩板通常具有2.0μm的孔隙度；對(duì)于3μm的色譜柱，具有0.5μm的孔隙度。
如果顆粒物來自于樣品，或磨損的泵密封圈或者流動(dòng)相顆粒物進(jìn)入色譜，它們通常會(huì)聚集在篩板上。
這些顆粒會(huì)影響樣品在色譜柱入口端的分流，使得部分樣品通過不同的流動(dòng)路徑到達(dá)色譜柱，因此會(huì)晚于另一部分樣品。
由于此時(shí)或此位置未發(fā)生分離，因此所有分析物會(huì)以相同的方式被擾亂，進(jìn)而色譜圖顯示所有峰均具有相似的峰拖尾或變形。
2、解決辦法：
為了防止這一問題的發(fā)生，如果流動(dòng)相可能含有顆粒（如緩沖沉淀物或灰塵），應(yīng)對(duì)其進(jìn)行過濾，并在泵密封嚴(yán)重磨損之前更換新的密封圈。
如果樣品含有顆粒碎片，應(yīng)用0.5μm微孔濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過濾或?qū)悠愤M(jìn)行5min左右的短暫離心，以去除顆粒。
強(qiáng)烈建議在自動(dòng)進(jìn)樣器下游安裝0.5μm孔隙度的串聯(lián)過濾器，以過濾任何意外進(jìn)入HPLC系統(tǒng)的顆粒物。如果串聯(lián)過濾器濾片發(fā)生堵塞，系統(tǒng)背壓會(huì)升高；而更換濾片十分簡(jiǎn)單、快速和經(jīng)濟(jì)。采用串聯(lián)過濾器可顯著延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，而且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。
二、裂峰或雙峰
如果峰形解析不正確或是未完全分離的重疊峰，可能會(huì)被誤認(rèn)為色譜柱或緩沖液的問題。
如果僅部分解析兩個(gè)峰形，則可能會(huì)認(rèn)為其是裂峰或雙峰。如圖3顯示的情形。
圖3. 由于存在第二個(gè)組分而產(chǎn)生分裂峰。（a）25ng / mL，和（b）等離子體中10ng/ mL的藥物（第二個(gè)峰）（10 ng/mL血漿中的藥物（第二個(gè)峰））
在圖3(a)中，可觀察到與圖2極為類似的峰變形，其表明篩板堵塞。
更換色譜柱不能解決此問題，所以篩板堵塞并非導(dǎo)致這一現(xiàn)象的原因。如果減少色譜柱上樣品，如圖3(b)，峰形看起來更像是兩個(gè)峰，而不是一個(gè)肩形峰。
由此進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，證實(shí)了存在第二個(gè)峰。調(diào)整方法的條件后，兩個(gè)峰完全分離。
三、伸舌峰
由于目前的色譜柱性能優(yōu)良，伸舌峰的現(xiàn)象已相當(dāng)少見。
伸舌峰一般是色譜柱內(nèi)發(fā)生溝流或色譜柱結(jié)構(gòu)的坍塌導(dǎo)致的。
如果在制造商推薦的條件下使用色譜柱，這種情況則很少發(fā)生。
大多數(shù)硅膠柱在pH2-8的范圍內(nèi)可以保持穩(wěn)定。
pH低于2時(shí)，鍵合相會(huì)發(fā)生水解；pH高于8時(shí)，硅膠會(huì)溶解。
如果您需要在此pH范圍以外使用操作HPLC系統(tǒng)，請(qǐng)確保選擇在選定條件下會(huì)保持穩(wěn)定的色譜柱。
圖4顯示了因柱過載（色譜柱發(fā)生溝流）導(dǎo)致的伸舌峰。
圖4. 過載導(dǎo)致的伸舌峰。（a）正常的峰形；（b）伸舌峰。
圖4a中顯示了正常的峰形；在約500次進(jìn)樣后，觀察到伸舌峰（圖4b）。
這種改變是該方法所特有，經(jīng)常在前一次分析結(jié)束后，下一次分析開始時(shí)突然發(fā)生。
出現(xiàn)伸舌峰后，唯一有效的解決辦法就是更換色譜柱。
該柱內(nèi)徑為100x2.1mm，柱內(nèi)填充5μm 粒徑的C18填料 。流動(dòng)相A是10mM碳酸氫銨（pH9.0） ；B是甲醇（MeOH）。
該方法包括5％B等度洗脫段，然后用80%B淋洗。
這種特殊的色譜柱可專門用于高達(dá)100％的水流動(dòng)相，且無封端。
當(dāng)流動(dòng)相pH值升高時(shí)，封端可保護(hù)硅膠免于溶解。
在這種情況下，所使用的色譜柱流動(dòng)相pH應(yīng)遠(yuǎn)高于推薦的范圍，并且無需保護(hù)性封端。硅膠在pH為9時(shí)會(huì)逐漸溶解，直到柱床結(jié)構(gòu)不再穩(wěn)定，并且柱床會(huì)發(fā)生移動(dòng)，產(chǎn)生塌陷或通道，而這又會(huì)導(dǎo)致圖4b伸舌峰的形成。
可以使用較低的流動(dòng)相pH或采用在較高pH下能夠保持穩(wěn)定狀態(tài)的色譜柱，以避免這一問題。
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