目的: 分析不同檢測方法異同及其合理性有效性。方法: 采用現(xiàn)行GB/T 16292-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū)) 懸浮粒子的測試方法和ISO 14644-1: 2015 潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境分別對同一潔凈區(qū)進(jìn)行懸浮粒子監(jiān)測，針對得到的檢驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果: 潔凈實驗室采樣點數(shù)目不超過9個點的時候，使用ISO14644-1: 2015 對潔凈實驗區(qū)域監(jiān)測操作性更強(qiáng)，采樣數(shù)據(jù)處理簡單方便，結(jié)果判斷簡便，異常情況處理程序明顯減少。結(jié)論: ISO 14644-1: 2015 與GB /T 16292-2010 相比更為科學(xué)，采樣點數(shù)量的確定方法更具有統(tǒng)計學(xué)意義。
藥品潔凈實驗室環(huán)境監(jiān)測結(jié)果是否滿足微生物檢測需求，直接決定檢測結(jié)果的有效性準(zhǔn)確性，進(jìn)行藥品微生物檢測，必需對實驗環(huán)境進(jìn)行日常和定期監(jiān)測，其內(nèi)容包括非生物活性的空氣懸浮粒子數(shù)及有生物活性的微生物監(jiān)測［1］。由于活性微粒和非活性微粒物質(zhì)之間有密切關(guān)聯(lián)，微生物依附于懸浮在空氣中的粒子上，這些粒子不僅會污染產(chǎn)品，而且也是微生物的載體，因此潔凈室空氣中的懸浮粒子數(shù)量和分布情況與潔凈室的潔凈度有很大的關(guān)系，需有效的控制和準(zhǔn)確地監(jiān)測潔凈室中懸浮粒子的數(shù)量及其分布，實時掌握潔凈室的潔凈程度［2］。
1、懸浮粒子監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)分析
懸浮粒子監(jiān)測是保證潔凈實驗室潔凈度是否達(dá)標(biāo)的重要指標(biāo)之一。目前關(guān)于懸浮粒子監(jiān)測方法有:GB/T16292 －2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室( 區(qū)) 懸浮粒子的測試方法［3］、ISO 14644-1: 2015 潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境［4］，以下把兩個標(biāo)準(zhǔn)簡稱為: GB/T16292 － 2010和ISO 14644-1: 2015。
1.1GB/T16292－2010監(jiān)測方法解析
該標(biāo)準(zhǔn)做了這樣的假設(shè): 認(rèn)為潔凈環(huán)境中的粒子是均勻分布，并呈正態(tài)分布，并基于這個理論基礎(chǔ)對懸浮粒子采樣點進(jìn)行相關(guān)規(guī)定。標(biāo)準(zhǔn)中介紹兩種確定懸浮粒子最少采樣點數(shù)目的方法: 方法一: 按潔凈房間的面積開方來確定采樣點數(shù)目，計算公式:n = A0. 5，開方后的結(jié)果不是整數(shù)需進(jìn)位為整數(shù)。方法二: 由已知潔凈室面積和潔凈級別，通過查找該標(biāo)準(zhǔn)來獲得采樣點數(shù)目(表1) 。但采樣時兩個方法必須滿足: 任何小潔凈區(qū)，采樣點數(shù)均不得少于2個，總采樣次數(shù)不少于5次; 每個采樣點采樣次數(shù)可以是1次，不同采樣點采樣次數(shù)可以不同。
表1 最少采樣點數(shù)目
通過采用計數(shù)濃度法，測試潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含有大于或等于某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來評定潔凈室的懸浮粒子潔凈度級別; 基于假設(shè)，被采樣的潔凈實驗室所有采樣點懸浮粒子呈正態(tài)分布，采樣點數(shù)量在大于1 且小于等于9 的情況下，需計算95%( UCL) ， 95% 置信上限UCL 計算公式: 95%UCL = M + t × ( s /n) 0. 5 式中: M 為潔凈室的平均粒子濃度的總均值; s 為平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差; n為采樣點的總數(shù); t 為分布系數(shù)。大于9 則求所有采樣點結(jié)果的平均值; 最終結(jié)果與對應(yīng)潔凈級別相比較，從而得到該潔凈室是否符合規(guī)定(表2)。
表2 95%置信上限(UCL) 的分布系數(shù)(t)
1.2ISO 14644-1: 2015 監(jiān)測方法解析
該標(biāo)準(zhǔn)放棄了ISO 14644-1: 1999 里面粒子均勻分布，并呈正態(tài)分布的假設(shè)，認(rèn)為粒子是不均勻分布，對其采樣點做了規(guī)定，它把潔凈室或潔凈區(qū)被分成近乎面積相等的網(wǎng)格狀區(qū)域，取樣點設(shè)置在每個網(wǎng)格區(qū)域，可作為該網(wǎng)格區(qū)域的代表，通過已知潔凈室面積查找對應(yīng)的待測取樣點最少數(shù)量來獲得該潔凈室的采樣點數(shù)量。如果被檢測面積在表格里兩數(shù)值之間，取兩者之間的較大數(shù)值。采樣規(guī)定: 每個取樣點的取樣量至少為2 L，取樣時間最少為1 min。各取樣點的單次取樣量應(yīng)相同。檢測結(jié)果需要每個取樣點的單次取樣量的粒子濃度( 以每1 m3粒子數(shù)量來表示) 不可超過對應(yīng)潔凈級別的濃度限值。如果在某個取樣點多次獲得單次取樣量，其平均濃度且平均濃度不可超過對應(yīng)潔凈級別的濃度限值。
1.3GB/T16292－2010與ISO 14644-1: 2015最少采樣點數(shù)量區(qū)別
現(xiàn)行GMP 把潔凈區(qū)分為A、B、C、D 4 個級別，而在GB /T16292 － 2010 里只有“方法一”適合確定最少采樣點數(shù)量， ISO 14644-1: 2015 則通過查表獲得最少采樣點數(shù)量(表3) 。備注: GB /T16292－2010 面積開方后的結(jié)果不是整數(shù)需進(jìn)位為整數(shù);ISO 14644-1: 2015 面積處于兩數(shù)之間的，取兩者之間的較大數(shù)值。
表3 GB/T16292 － 2010 與ISO 14644-1: 2015 采樣點數(shù)量
1.4懸浮粒子監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)
各潔凈級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)見表4。
表4 各潔凈級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)
2、實驗方法及結(jié)果
2.1方法
選擇同一潔凈空調(diào)系統(tǒng)下，檢測狀態(tài)為靜態(tài)，潔凈級別為C 級的4 個潔凈房間，房間面積分別為: 3、6、10、23 m2，根據(jù)GB /T16292 － 2010 得到4 個房間的最少采樣點數(shù)目分別為: 2、3、4、5; 而根據(jù)ISO14644-1: 2015 得到的最少采樣點數(shù)目為: 2、3、5、6;為滿足懸浮粒子數(shù)檢測結(jié)果的可比性，需選擇相同潔凈室相同一時間段檢測出的數(shù)據(jù)，使用上述兩個標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，故這里需選擇最少采樣點數(shù)目為2、3、5、6 個。
2.2實驗結(jié)果
具體結(jié)果如表5。
表5 采樣點懸浮粒子數(shù)及計算結(jié)果
檢測最終結(jié)果與表4 相對應(yīng)靜態(tài)粒子限度作比較，按GB /T16292 － 2010 判定，潔凈房間1 中0. 5μm 粒徑的懸浮粒子數(shù)的95% 置信上限UCL 值9530 小于352 000; 而5. 0 μm 粒徑的懸浮粒子數(shù)的95% 置信上限UCL 值3 361 大于限度規(guī)定的2900，則判定該房間潔凈度不符合規(guī)定。潔凈房間2、3、4 所有粒徑的懸浮粒子數(shù)檢測結(jié)果均小于限度規(guī)定值，故判定3 個潔凈房間的潔凈度均符合規(guī)定。按ISO 14644-1: 2015 判定，潔凈房間1、2、3、4 各個檢測點所有粒徑的懸浮粒子檢測結(jié)果均小于限度規(guī)定值，故判定該4 個潔凈房間的潔凈度均符合規(guī)定。
3、討論
3.1理論基礎(chǔ)不同采樣點數(shù)量改變
由于GB /T16292 － 2010 的檢測理論基礎(chǔ)是認(rèn)為粒子均勻分布，并呈正態(tài)分布，在進(jìn)行檢測時，采樣點數(shù)都應(yīng)該服從正態(tài)分布，而采樣數(shù)越大越近似服從正態(tài)分布，反之，越小越不服從正態(tài)分布，差異也就越大［5］。ISO 14644-1: 2015 則認(rèn)為粒子不是均勻分布，它把潔凈室或潔凈區(qū)分成近乎面積相等的網(wǎng)格狀區(qū)域，取樣點設(shè)置在每個網(wǎng)格區(qū)域，可作為該網(wǎng)格區(qū)域的代表，采樣點數(shù)量越多，越接近實際值。ISO14644-1: 2015 與GB /T 16292-2010 懸浮粒子采樣點選擇的原則及理論基礎(chǔ)的不同點，即一個是認(rèn)為粒子分布是不均勻的，一個是認(rèn)為粒子分布是均勻的，很明顯ISO 14644-1: 2015 假設(shè)粒子分布是不均勻的理論基礎(chǔ)更加科學(xué)，這也正是新版ISO14644-1: 2015 修改懸浮粒子采樣點選擇的原則及數(shù)量的原因。
3.2懸浮粒子監(jiān)測結(jié)果處理
GB /T16292 － 2010 每個采樣點的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定級別限界，即M≤級別限界; 全部采樣點的懸浮粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定級別限界，即UCL≤級別限界。而ISO14644-1: 2015 中當(dāng)每個被考慮粒徑的每次取樣量與空氣潔凈度的相關(guān)ISO 等級匹配時，每次樣品測量結(jié)果將記錄粒子數(shù)量;當(dāng)一個取樣點發(fā)生兩次或多次取樣，求它們的平均值，以單份樣品粒子濃度的每個被考慮粒徑來計算和記錄每個點的平均粒子數(shù)量。針對兩個標(biāo)準(zhǔn)對處理檢測結(jié)果及判定比較，不難得出GB /T16292 － 2010 計算工作量明顯比ISO 14644-1:2015 大，也容易出錯; 有時候還可能出現(xiàn)兩種決然不一樣的結(jié)果: 如表5房間1中，懸浮粒子粒徑0. 5 μm: M = 2535，UCL = 9530; 懸浮粒子粒徑5 μm: M = 620，UCL = 3361。與潔凈級別C 級靜態(tài)的級別界限: 懸浮粒子粒徑0. 5 μm 為352000，懸浮粒子粒徑5 μm 為2900 相比較，如果按GB /T16292-2010 判定，潔凈室不符合C 級潔凈度要求; 按ISO14644-1: 2015 判定，該潔凈室符合C 級潔凈度要求。由于在計算95% UCL值時，采樣數(shù)n 與系數(shù)t 有關(guān)，采樣數(shù)越多即自由度越大，數(shù)值就越接近，反之采樣數(shù)越少，數(shù)值差異越大，結(jié)果也差異較大。
3.3監(jiān)測結(jié)果報告方式
當(dāng)采樣點數(shù)目n≤9 時，GB /T16292-2010 需報告各個粒徑全部采樣點測定結(jié)果平均值的95%UCL 即可; 采樣點數(shù)目n ＞ 9 時，GB /T16292-2010需報告各個粒徑全部采樣點測定結(jié)果的平均值即可; 而ISO 14644-2015 則需把所有采樣點各個粒徑的測定結(jié)果附上。GB /T16292-2010 報告方式較為簡潔明了，但不能詳細(xì)反應(yīng)各個采樣點懸浮粒子的濃度情況，當(dāng)出現(xiàn)超限值時，不便于潔凈實驗室監(jiān)控。而ISO14644-2015 的報告方式能反映各個采樣點懸浮粒子濃度情況，方便查詢。
3.4超標(biāo)結(jié)果處理
GB /T16292 － 2010: 如果是因為程序上的誤差或設(shè)備功能不良造成的測量差錯或由于空氣異常的潔凈而導(dǎo)致異常低的粒子濃度，而產(chǎn)生單個的、非隨機(jī)性的“界外值”，在符合下述條件的情況下，可以把該界外值排除不計:
(1) 包括所有其余采樣點的計算是重復(fù)進(jìn)行的;
(2) 計算中至少保留有3次測量值;
(3) 計算中至多只有1 個測量值排除在外;
(4) 有誤差的測量或粒子濃度低的推測原因由用戶和供應(yīng)商認(rèn)可，并以文件記錄下來。
而ISO14644-1:2015: 如發(fā)生計數(shù)超標(biāo)，應(yīng)安排調(diào)查。調(diào)查結(jié)果和矯正措施應(yīng)在測試報告里記錄。由于使用塵埃粒子計數(shù)儀按ISO14644-1: 2015 方法檢測出來的數(shù)據(jù)很直觀，不需要復(fù)雜的計算過程就可以得出結(jié)果，減少計算過程中的誤差甚至是錯誤，大大減少由于人為因素而影響檢驗結(jié)果，對超標(biāo)結(jié)果的處理相對簡單，可操作性強(qiáng)。
綜上所述我們可得出這樣的結(jié)論: ISO 14644-1: 2015 與GB /T 16292-2010 相比更為科學(xué)，采樣點數(shù)量的確定方法更具有統(tǒng)計學(xué)意義。
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