原料藥的分析方法開(kāi)發(fā)一般分為兩大部分：一、起始物料的分析方法開(kāi)發(fā)；二、中間體及API的分析方法開(kāi)發(fā)。按照正常的邏輯順序，應(yīng)該是起始物料的分析方法開(kāi)發(fā)先行，但是一般在實(shí)際操作過(guò)程中，往往是中間體及API的分析方法先行開(kāi)發(fā)。主要是因?yàn)?，在打通工藝路線時(shí)期或者是文獻(xiàn)調(diào)研的階段，主要是針對(duì)中間體及API的分析方法的工作。只有在工藝優(yōu)化的中期或者中后期，對(duì)起始物料廠家基本選定時(shí)才會(huì)有針對(duì)性的啟動(dòng)起始物料的分析方法開(kāi)發(fā)工作。雖然如此，考慮到邏輯順序，還是按照起始物料、中間體、API這樣的順序進(jìn)行逐一介紹。
1、起始物料
合成路線的獲取
在啟動(dòng)分析方法開(kāi)發(fā)工作之前，一定要獲得起始物料廠家提供的合成路線，需要包括以下幾點(diǎn)：起始物料、中間體、反應(yīng)溶劑、后處理溶劑及關(guān)鍵催化劑等。如果廠家提供反應(yīng)步驟過(guò)長(zhǎng)，一般選擇3-5步即可。
雜質(zhì)分析
結(jié)合起始物料廠家提供的工藝路線，對(duì)可能存在或者產(chǎn)生的各種雜質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)的分析，為分析方法開(kāi)發(fā)的方向奠定一個(gè)基礎(chǔ)，也好對(duì)所需要的儀器耗材有提前的準(zhǔn)備。一般涉及雜質(zhì)如下：
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雜質(zhì)種類(lèi)
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雜質(zhì)主要來(lái)源
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一般檢測(cè)手段
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一般所需耗材
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普通雜質(zhì)
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起始物料、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物
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HPLC
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普通C18柱、氨基柱
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手性雜質(zhì)
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含有手性中心的化合物，引入手性的反應(yīng)
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HPLC、旋光儀
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手性柱
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GTI
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起始物料、中間體、副產(chǎn)物
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HPLC、LC-MS、
GC-MS
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普通C18柱、毛細(xì)管柱
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重金屬
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催化劑
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原子吸收、ICP-MS、藥典通用方法
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空心陰極燈、鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液
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溶劑殘留
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反應(yīng)溶劑、后處理溶劑、副產(chǎn)物
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GC
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毛細(xì)管柱
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無(wú)機(jī)鹽
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縛酸劑、干燥劑、調(diào)節(jié)pH值的試劑
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比濁法、熾灼殘?jiān)?、比色?/span>
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相應(yīng)的分析溶劑
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分析方法的開(kāi)發(fā)
根據(jù)起始物料路線中所涉及的雜質(zhì)種類(lèi)，進(jìn)行對(duì)應(yīng)分析方法的開(kāi)發(fā)。以廠家COA及提供的分析方法為基礎(chǔ)，結(jié)合自身工藝對(duì)起始物料質(zhì)量的要求，建立適合自己的起始物料內(nèi)控方法。
分析方法的驗(yàn)證
在API工藝進(jìn)行逐級(jí)放大前，取得起始物料供應(yīng)商提供的不小于3批的中試生產(chǎn)批量樣品，使用一批次進(jìn)行分析方法驗(yàn)證工作，其余批次進(jìn)行分析方法重現(xiàn)工作，同時(shí)也是為了驗(yàn)證廠家提供起始物料質(zhì)量的穩(wěn)定和可控。
雜質(zhì)限度制定的依據(jù)
根據(jù)多批次起始物料的檢測(cè)結(jié)果，以及API雜質(zhì)限度的要求，結(jié)合工藝路線對(duì)雜質(zhì)的清除能力，制定起始物料中雜質(zhì)的限度。需重點(diǎn)關(guān)注基因毒性雜質(zhì)及毒性較大的試劑溶劑。
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物料名稱(chēng)
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制定依據(jù)
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起始物料
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1、結(jié)合自身工藝対雜質(zhì)的清除效率
2、結(jié)合自身工藝所涉及溶劑
3、相關(guān)起始物料所涉及GTI及手性雜質(zhì)的引入
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中間體
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1、結(jié)合自身工藝対雜質(zhì)的清除效率
2、結(jié)合之后反應(yīng)對(duì)水分及溶劑殘留的要求
3、GTI及手性雜質(zhì)的引入
4、API中關(guān)鍵雜質(zhì)的要求
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API
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1、結(jié)合反應(yīng)體系中較大雜質(zhì)和清除率較低的雜質(zhì)情況
2、結(jié)合指導(dǎo)原則要求
3、結(jié)合所涉及溶劑及催化劑的情況
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2、中間體
中間體分為過(guò)程控制及質(zhì)量控制，過(guò)程控制主要監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)行的程度，質(zhì)量控制是制定中間體的中控標(biāo)準(zhǔn)。
過(guò)程控制方法
過(guò)程控制方法的開(kāi)發(fā)
根究反應(yīng)液的具體情況以及涉及物料自身的性質(zhì)，中間體的過(guò)程控制方法可以選擇TLC或者HPLC的手段進(jìn)行控制。一般在反應(yīng)過(guò)程中主要關(guān)心的是原料的剩余及產(chǎn)物的生成情況，所以確保在原料及產(chǎn)物峰周?chē)鷽](méi)有干擾。如果有需要特殊關(guān)注的雜質(zhì)，也需確保雜質(zhì)的分離度、峰純度等。
過(guò)程控制方法的驗(yàn)證
如果過(guò)程控制的方法只是定性的檢測(cè)，在方法驗(yàn)證時(shí)一般只需進(jìn)行：專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、耐用性等方面的驗(yàn)證工作。如果涉及定量檢測(cè)的方法，則需要進(jìn)行全面的分析方法驗(yàn)證工作。
質(zhì)量控制方法
質(zhì)量控制方法的開(kāi)發(fā)
對(duì)中間體的質(zhì)量控制，一方面根據(jù)工藝優(yōu)化的結(jié)果制定質(zhì)量控制的限度，另一方面需要根據(jù)API質(zhì)量的要求對(duì)中間體所涉及雜質(zhì)的限度進(jìn)行定量的控制。當(dāng)然，質(zhì)量控制方面不只是雜質(zhì)限度的控制，如果接下來(lái)的反應(yīng)是無(wú)水反應(yīng)，上一步的中間體依然需要對(duì)水分的限度進(jìn)行嚴(yán)格的控制。
中間體的制備過(guò)程中，也會(huì)涉及GTI、手性雜質(zhì)及重金屬等雜質(zhì)的研究。一般情況，此類(lèi)雜質(zhì)最好放在中間體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行，如果控制有難度或者在之后的反應(yīng)過(guò)程中仍然會(huì)又引入及生成，放在之后的步驟控制或者API控制均可。
質(zhì)量控制方法的驗(yàn)證
一般情況下，中間體的質(zhì)量控制均會(huì)涉及雜質(zhì)的定量檢測(cè)，因此中間體質(zhì)控方法的驗(yàn)證均需要按照定量檢測(cè)的方法進(jìn)行全面的分析方法驗(yàn)證工作。
3、API
同起始物料分析方法開(kāi)發(fā)基本一致，在API分析方法的開(kāi)發(fā)前期，首先需要進(jìn)行有關(guān)化合物或者相似化合物分析方法的調(diào)研工作，其次進(jìn)行雜質(zhì)的分析工作。針對(duì)不同類(lèi)型的雜質(zhì)選擇有針對(duì)性的文獻(xiàn)報(bào)道的方法為方法開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)，結(jié)合工藝本身，對(duì)分析方法進(jìn)行逐步的優(yōu)化。有關(guān)物質(zhì)的制定，可以根據(jù)靠近終反應(yīng)步驟的雜質(zhì)譜以及最后一步反應(yīng)的雜質(zhì)體系進(jìn)行制定。
溶劑殘留的制定需要結(jié)合起始物料所涉及的溶劑，如果有與起始物料有差異的溶劑，那么差異溶劑需要在起始物料中進(jìn)行控制；若能包含起始物料所涉及溶劑，可以將所用溶劑在終產(chǎn)品中進(jìn)行控制，起始物料中只需進(jìn)行干燥失重的檢測(cè)。同時(shí)，還需要關(guān)注一些潛在的溶劑，例如：反應(yīng)中涉及苯的衍生物，也需要關(guān)注苯的殘留控制等。
分析方法的開(kāi)發(fā)
根據(jù)不同的雜質(zhì)種類(lèi)，API的分析方法涉及到普通雜質(zhì)、手性雜質(zhì)、殘留溶劑、基因毒性雜質(zhì)、重金屬等。
普通雜質(zhì)：一般采用HPLC法，在進(jìn)行分析方法開(kāi)發(fā)之前，首先要進(jìn)行充分的文獻(xiàn)調(diào)研工作，查詢(xún)各國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)、專(zhuān)利中是否收載了相同或同類(lèi)化合物，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行分析方法的開(kāi)發(fā)，結(jié)合API的理化性質(zhì)以及對(duì)各步反應(yīng)機(jī)理的分析，進(jìn)行分析方法的逐步優(yōu)化。在分析方法優(yōu)化過(guò)程中，應(yīng)同時(shí)對(duì)API進(jìn)行強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)，評(píng)估分析方法對(duì)潛在降解產(chǎn)物的分離能力。
手性雜質(zhì)：采用HPLC法，選用手性色譜柱或手性流動(dòng)相。對(duì)有多個(gè)手性中心的，對(duì)映異構(gòu)體需采用手性色譜進(jìn)行分析，非對(duì)映異構(gòu)體，一般可與普通雜質(zhì)采用同一方法進(jìn)行控制。
殘留溶劑：殘留溶劑采用GC法，根據(jù)溶劑的種類(lèi)，選擇不同極性的色譜柱進(jìn)行分離。除要關(guān)注合成工藝中使用的溶劑外，還需要關(guān)注潛在的殘留溶劑，如使用了甲苯，需要對(duì)苯進(jìn)行檢測(cè)與控制，使用了甲基叔丁基醚，需要關(guān)注叔丁醇的殘留，酯鍵斷裂過(guò)程中產(chǎn)生的醇類(lèi)等。
基因毒性雜質(zhì)：由于基因毒性雜質(zhì)的限度較低，對(duì)方法的靈敏度要求較高，一般要用到HPLC-MS或GC-MS，在分析方法開(kāi)發(fā)中，需重點(diǎn)關(guān)注檢測(cè)限是否能滿足質(zhì)量控制的要求。
重金屬：對(duì)于一般的重金屬，采用藥典通則的檢測(cè)方法即可，對(duì)于pd等重金屬需要特殊研究。
分析方法的驗(yàn)證
在進(jìn)行分析方法驗(yàn)證前，需要對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所涉及的分析方法進(jìn)行一個(gè)匯總，合理安排驗(yàn)證工作，以免進(jìn)行重復(fù)的工作，例如：含量和有關(guān)物質(zhì)方法一致，有些重復(fù)的驗(yàn)證項(xiàng)目就只進(jìn)行一次驗(yàn)證即可。
一般API需要進(jìn)行驗(yàn)證的方法有：有關(guān)物質(zhì)（包括異構(gòu)體、分別控制的有關(guān)物質(zhì)）方法、含量方法、溶劑殘留方法等。
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