【問】污染調(diào)查時(shí)，該如何開展微生物鑒定工作?
【答】對(duì)產(chǎn)品失敗相關(guān)的微生物進(jìn)行鑒定是實(shí)驗(yàn)室調(diào)查及之后生產(chǎn)調(diào)查中的關(guān)鍵步驟，知道微生物來源可能有助于確定微生物污染產(chǎn)品的途徑。溯源分析是通過對(duì)污染微生物和相關(guān)環(huán)節(jié)監(jiān)控微生物進(jìn)行比對(duì)，以同源性的差異程度為依據(jù)，確認(rèn)污染來源的過程
同一地點(diǎn)的同種菌，其表型特征和基因型特征是基本一致的不同地點(diǎn)的同種菌，表型特征可能基本一致，但保守及可變區(qū)域的定為主，表型特征鑒定為輔。為了確證微生物為同種中的兩個(gè)相同株，需比對(duì)更多的基因序列和特征基因片段，甚至是全基因組序列的比對(duì)，實(shí)現(xiàn)既鑒定又溯源的目的，同時(shí)保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。建議采用多項(xiàng)鑒別方法對(duì)微生物進(jìn)行分類。也就是說，獲取分子的、生理的、形態(tài)的、血清學(xué)的或生態(tài)來源等多層次信息來對(duì)微生物分類和鑒別。雖然使用儀器進(jìn)行鑒定的方式越來越普及，但不建議放棄初篩步驟，如形態(tài)觀察、染色鏡檢、重要的生化反應(yīng)，因?yàn)殍b定通常需要根據(jù)所有可用信息來證實(shí)。例如，傷寒沙門菌不太可能從潔凈室中分離出來，但這種病原體可能存在于動(dòng)物源性成分中。微生物鑒定通常需要考慮的點(diǎn)如表1所示。
表1 微生物鑒定通常需要考慮的點(diǎn)
對(duì)潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔫b定，掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。實(shí)際工作中無菌試驗(yàn)陽性結(jié)果中分離出的微生物，經(jīng)對(duì)其溯源分析，確認(rèn)污染歸因于無菌試驗(yàn)過程中所使的差錯(cuò)，該試驗(yàn)可判無效元末十文則判該產(chǎn)品不符合要求。表2為PDA期刊“POINTS TO CONSIDERFOR ASEPTIC PROCESSING PARTIJANUARY2015”中的舉例給出了分離的微生物鑒定的程度。
表2分離菌微生物鑒定的程度。
對(duì)于中間產(chǎn)品(如除菌過濾前取樣檢測微生物限度)微生物結(jié)果出現(xiàn)異常趨勢或超標(biāo)時(shí)，建議在調(diào)查時(shí)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)程度采取相適應(yīng)的方法進(jìn)行鑒定分析。
來源:綜合整理自2023年藥品GMP指南-質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室與物料系統(tǒng)P331-332
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