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揭秘ELSD檢測器使用的流動相及注意事項(xiàng)

嘉峪檢測網(wǎng)        2023-10-10 18:01

ELSD檢測器作為一種通用型檢測器,對于無紫外吸收的樣品,應(yīng)用非常廣泛,如碳水化合物、脂類、表面活性劑以及合成聚合物等,幾乎所有的液相色譜實(shí)驗(yàn)室中都會標(biāo)配幾臺ELSD,使用ELSD時(shí)要注意哪些問題你知道嗎?一起來了解下吧。
 
一、用于ELSD的流動相都有哪些
 
所有在 LC/MS 中使用的揮發(fā)性溶劑均可在 ELSD 中使用。其中包括:酸(甲酸,乙酸,三氟乙酸等),堿(氨,三乙胺等),緩沖劑(甲酸銨,乙酸銨,碳酸銨等),離子對試劑(五氟丙酸,七氟丁酸等),這些化合物可以方便地修飾流動相以分離復(fù)雜樣品。
 
而非揮發(fā)性添加劑(如磷酸鈉或磷酸鉀或硫酸鉀)與 ELSD 不相容,不可使用。它們可能會污染甚至嚴(yán)重?fù)p壞探測器的某些部分,這些添加劑可以容易地被相應(yīng)的揮發(fā)性添加劑替代。
 
二、ELSD檢測器的特點(diǎn)
 
蒸發(fā)光散射檢測器用于液相色譜系統(tǒng),分析任何揮發(fā)性低于流動相的化合物。ELSD的應(yīng)用范圍包括:碳水化合物,藥物,脂類,甘油三脂,未衍生的脂肪酸和氨基酸,聚合物,表面活化劑,營養(yǎng)滋補(bǔ)品,及組合分子庫等。蒸發(fā)光散射檢測器消除了常見于其他HPLC檢測器的問題。示差檢測受溶劑前沿峰的干擾使得分析復(fù)雜化,并且由于對溫度其敏感使得基線不穩(wěn)定,與梯度洗脫不相容。另外,示差檢測器的響應(yīng)不如ELSD靈敏。而低波長紫外檢測器在急變梯度條件下受基線漂移的困擾,并要求被分析化合物帶有發(fā)色團(tuán)。ELSD則不受這些限制。不同于這些檢測器,ELSD能在多溶劑梯度的情況下獲得穩(wěn)定的基線,使得分辨率較好、分離速度更快。另外,因?yàn)镋LSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性,所以ELSD檢測時(shí)樣品不要求帶有發(fā)色團(tuán)或熒光基團(tuán)。
 
蒸發(fā)光散射檢測器的檢測是基于當(dāng)分析物顆粒傳過多色光束時(shí)引起光子的散射的性質(zhì)。HLPC中的液體洗脫液首被霧化,形成的含有被分析物的氣溶膠,然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā),zui后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。檢測信號的弱與物質(zhì)的質(zhì)量多少成正比,物質(zhì)無需擁有任何發(fā)色團(tuán)、熒光團(tuán)或電活性。所以任何可以被HPLC分離的化合物均可被蒸發(fā)光檢測器檢測。蒸發(fā)光散射檢測器是質(zhì)量靈敏型檢測器,其響應(yīng)度直接和被分析物在樣品中的質(zhì)量成正比,不受官能團(tuán)或發(fā)光團(tuán)的限制,化合物的相對數(shù)量可以容易地被計(jì)算出來??蓹z測任何非揮發(fā)性分析物,并可以使用梯度洗脫化分離效果??梢耘c質(zhì)譜聯(lián)用完成被分析物的整體分析。
 
三、ELSD的參數(shù)如何優(yōu)化
 
蒸發(fā)溫度是ELSD更重要的參數(shù)。溫度依據(jù)流動相的沸點(diǎn)。
 
對于非揮發(fā)性化合物,選擇高蒸發(fā)溫度(例如50-60°C)以完全蒸發(fā)流動相,從而更小化基線噪音并獲得更高靈敏度。
 
ELSD檢測器在蒸發(fā)溫度上不斷進(jìn)行改進(jìn),低溫蒸發(fā)型ELSD優(yōu)勢使半揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定化合物具有更高的靈敏度。實(shí)際上,僅將溫度設(shè)定在25-30℃范圍內(nèi)也可為這些化合物提供較高信號,同時(shí)不會影響流動相的蒸發(fā)。
 
四、蒸發(fā)光散射檢測器使用中的注意事項(xiàng)
 
對每個(gè)色譜工作者來說蒸發(fā)光散射檢測器是一種*的一起,它可以檢測到?jīng)]有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì),它在色譜工作中起到舉足輕重的檢測作用,蒸發(fā)光散射檢測器的特點(diǎn)以及使用注意事項(xiàng):
 
1、洗脫液需要霧化,所以霧化氣流的純度和壓力會影響檢測器的信噪比。
 
2、流動相要蒸發(fā)掉,所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來調(diào)節(jié)流動相的pH值??梢酝ㄟ^蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來使比被測物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測物質(zhì)蒸發(fā)的前提下,溫度越,流動相蒸發(fā)越*,色譜圖基線越好、信號比就越。如果被測物質(zhì)沸點(diǎn)接近或低于流動相的蒸發(fā)溫度,則無法檢測,沸點(diǎn)比水低的有機(jī)物質(zhì)*可以用氣相色譜儀進(jìn)行分離檢測了。由于流動相和溶劑都蒸發(fā)了,使用ELSD檢測器收集的色譜圖一般沒有溶劑峰;而且梯度洗脫沒有折光視差效應(yīng),一般不會出現(xiàn)基線漂移。而用ELSD的檢測方法消除了傳統(tǒng)HPLC的檢測方法中的難點(diǎn),它的響應(yīng)不依賴于樣品的特性,ELSD的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比,因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物。
 
3、檢測光散射變化,進(jìn)入到散射池的物質(zhì)都可被檢測,而且響應(yīng)值只與物質(zhì)的量也就是物質(zhì)的質(zhì)量有關(guān)。
 
4、濃度跟峰面積不成線性,分別取自然對數(shù)后成線性。
 
蒸發(fā)光散射檢測器的原理和檢測方法:
 
在色譜儀洗脫液進(jìn)入檢測器中之后,首經(jīng)過壓氣流霧化,霧化之后形成的小液滴進(jìn)入蒸發(fā)階段,蒸發(fā)之后剩下的小液滴進(jìn)入散射池,光束經(jīng)過散射池時(shí),散射光波被光電管接受之后會形成一種電信號,而電信號通過電路的模擬,放大,轉(zhuǎn)換之后成為了色譜工作站的數(shù)字信號,也就是色譜圖。
 
蒸發(fā)光散射檢測器檢測只要分為三個(gè)步驟:
 
 ?。?)用惰性氣體霧化脫洗液
 
  (2)流動相在加熱管(漂移管)中蒸發(fā)
 
 ?。?)樣品顆粒散射光后得到檢測
 
 

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來源:北京藥研匯

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