目的: 確認(rèn)潔凈區(qū)環(huán)境的空氣微生物指標(biāo)經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器的預(yù)設(shè)參數(shù)滅菌處理后達(dá)到預(yù)期的滅菌效果，符合潔凈區(qū)的微生物限度要求。
方法: 過氧化氫干霧滅菌器把過氧化氫液體形態(tài)變成純正的霧形態(tài)，使其彌漫至整個滅菌的空間進(jìn)行熏蒸滅菌，滅菌過程結(jié)束后，通過測試滅菌潔凈區(qū)的過氧化氫氣體滅菌濃度分布均勻性、過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑實(shí)驗(yàn)確認(rèn)、潔凈區(qū)的沉降菌監(jiān)測、潔凈區(qū)的浮游菌監(jiān)測、空氣中過氧化氫殘留監(jiān)測等五項(xiàng)指標(biāo)來驗(yàn)證干霧滅菌器對潔凈區(qū)環(huán)境的滅菌效果。
結(jié)論: 經(jīng)過過氧化氫熏蒸滅菌后，潔凈區(qū)域環(huán)境的微生物被有效殺滅，過氧化氫殘留符合要求，對潔凈區(qū)環(huán)境無影響，經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器的滅菌處理后，潔凈區(qū)的微生物限度指標(biāo)達(dá)到預(yù)期要求。
過氧化氫干霧滅菌技術(shù)是利用特殊的噴霧設(shè)備將過氧化氫消毒液霧化為粒徑＜10 μm 的小顆粒，這些小顆粒在空中可在短時間內(nèi)將其水分迅速揮發(fā)為干顆粒，研究表明，過氧化氫的霧化粒子越小，在空氣中懸浮的時間越長，就越有機(jī)會與空氣中的細(xì)菌充分接觸而達(dá)到滅菌的目的。
過氧化氫干霧的性質(zhì)主要包括有: (1) 過氧化氫干霧在空氣中進(jìn)行無規(guī)則運(yùn)動，遵循布朗運(yùn)動原理并且不會沉降; (2) 過氧化氫干霧不會聚集在一起或者產(chǎn)生大的液滴; (3) 過氧化氫干霧在表面接觸后會反彈，從而不會破裂而濕潤表面［1］。過氧化氫干霧的這些性質(zhì)讓其具備良好的擴(kuò)散效果和表面接觸效果，非常適合應(yīng)用于接觸熏蒸式滅菌。過氧化氫干霧滅菌與其他氣霧滅菌技術(shù)的比較見表1［2］。
表1 過氧化氫干霧滅菌與其他氣霧滅菌技術(shù)的比較
過氧化氫滅菌器能夠把過氧化氫液體形態(tài)變成純正的干霧形態(tài)，以使其彌漫到整個待滅菌空間完成熏蒸滅菌的處理過程。過氧化氫干霧滅菌技術(shù)可以對潔凈車間內(nèi)空氣及區(qū)域內(nèi)設(shè)備物品的外表面滅菌，使滅菌空間的微生物負(fù)載得以有效消除。該技術(shù)目前被廣泛用于制藥、生物技術(shù)醫(yī)學(xué)產(chǎn)品、化妝品以及保健品的生產(chǎn)?？砂踩糜诓讳P鋼、塑料、玻璃、地板、墻壁等各種表面和空間消毒。過氧化氫干霧滅菌設(shè)備所用過氧化氫消毒液的濃度一般在5% ～ 10%，滅菌的成本較低; 干霧滅菌器系統(tǒng)使用少量的殺孢子劑就能完成高效的殺菌效果，由于用量少，具備較好的材料兼容性，對設(shè)備及其附件、墻壁、地面及輔助工具沒有任何腐蝕性，是新一代的生態(tài)環(huán)保型滅菌技術(shù)［2］。本文對潔凈區(qū)環(huán)境采用過氧化氫干霧滅菌器的滅菌效果及過氧化氫殘留情況進(jìn)行驗(yàn)證研究。
1、材料與方法
1.1驗(yàn)證用設(shè)備
歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器，供應(yīng)商法國歐菲姆。
1.2驗(yàn)證用的試劑材料
過氧化氫殺孢子劑、嗜熱脂肪芽孢生物指示劑(ATCC7953) 、化學(xué)指示劑、恒溫培養(yǎng)箱、浮游菌采樣器、胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基、德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀。
1.3實(shí)驗(yàn)方法
過氧化氫滅菌器干霧滅菌效果的驗(yàn)證操作過程應(yīng)制定詳細(xì)的驗(yàn)證方案，大致的操作過程見文獻(xiàn)［2］。
1．3．1 過氧化氫干霧分布均勻性確認(rèn)方法
將歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器放置在指定位置，并準(zhǔn)備好適量的過氧化氫。滅菌前關(guān)閉潔凈區(qū)空調(diào)系統(tǒng)新風(fēng)進(jìn)口閥門及排風(fēng)閥門，潔凈區(qū)內(nèi)設(shè)備保持正常工作狀態(tài)。
將化學(xué)指示劑分別放置在過氧化氫滅菌器所在房間的四周墻角(墻角放置分上下兩層，下層離地10 cm，指示劑編號為1～4，上層離天花板10 cm，指示劑編號為5 ～ 8) 及設(shè)備關(guān)鍵位置(指示劑編號為9～ 32) 。
按照經(jīng)計(jì)算的殺孢子劑用量調(diào)試好對應(yīng)設(shè)備的用量，按下設(shè)備上的啟動按鈕，設(shè)備進(jìn)行60 s 倒計(jì)時后，設(shè)備自行啟動，開始噴霧，人員撤離出潔凈區(qū)。
達(dá)到設(shè)定噴霧量時，設(shè)備自行停機(jī)，開始滅菌計(jì)時，滅菌保持120 min 后結(jié)束，然后開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)并置換新風(fēng)30 min，操作人員方可進(jìn)入潔凈區(qū)檢查化學(xué)指示劑，觀察指示劑變色情況。
1．3．2 滅菌效果確認(rèn)方法［3］
過氧化氫干霧分布均勻性測試合格后再進(jìn)行滅菌效果確認(rèn)，將生物指示劑( 嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC 7953) 分別放置在房間的四周墻角及設(shè)備關(guān)鍵位置。使用生物指示劑對滅菌房間及設(shè)備進(jìn)行監(jiān)測。
將歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器放置在遠(yuǎn)離設(shè)備及墻壁的地方，噴嘴口離設(shè)備或墻壁的距離不少于3．0 m。
每個潔凈房間內(nèi)使用1 臺過氧化氫滅菌器，按照經(jīng)計(jì)算的過氧化氫殺孢子劑用量分別對四臺歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器進(jìn)行用量設(shè)置，四臺歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器A1、A2、A3、A4 號設(shè)備用量依次設(shè)定為: 630，650，650，700 mL。潔凈房間(過氧化氫滅菌器) 使用的生物指示劑編號依次為1－4、5－8、9－12、13－17。
關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)排風(fēng)。按設(shè)備上的啟動按鈕，開啟歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器，過氧化氫干霧通過噴頭注入車間內(nèi)。達(dá)到設(shè)定噴霧量時，設(shè)備自行停機(jī)，開始滅菌計(jì)時，滅菌保持120 min 后結(jié)束。
將經(jīng)過氧化氫干霧滅菌后的生物指示劑全部放置于56 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)，恒溫培養(yǎng)48 h，另取未經(jīng)過氧化氫干霧滅菌的生物指示劑同時同步以同種方式接種培養(yǎng)，作為陽性對照。將對照管及滅菌后的生物指示劑進(jìn)行對比觀察。以確認(rèn)過氧化氫干霧器在設(shè)定參數(shù)下的滅菌效果。
1．3．3 沉降菌監(jiān)測方法
取胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基80個，根據(jù)潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測的取樣計(jì)劃，擺放在經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器滅菌后房間及設(shè)備表面，每個取樣位點(diǎn)的沉降菌平皿暴露采樣4 h，同時取3 個培養(yǎng)基作空白對照，采集完的培養(yǎng)基及空白對照培養(yǎng)基倒置于30～ 35 ℃培養(yǎng)箱中連續(xù)恒溫培養(yǎng)5d，記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并與潔凈區(qū)沉降菌的指標(biāo)對比分析。
1．3．4 浮游菌監(jiān)測方法
浮游菌監(jiān)測的取樣點(diǎn)為過氧化氫干霧滅菌器滅菌后房間，根據(jù)潔凈區(qū)浮游菌監(jiān)測的取樣計(jì)劃，使用胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基，放置在浮游菌采樣器上，進(jìn)行空氣浮游菌的取樣，各個取樣點(diǎn)的取樣量設(shè)為1000 L，同時取3 個培養(yǎng)基作空白對照，采集浮游菌樣品的培養(yǎng)基及空白對照培養(yǎng)基倒置于30 ～ 35 ℃培養(yǎng)箱中連續(xù)恒溫培養(yǎng)5 d，記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并與潔凈區(qū)浮游菌的指標(biāo)對比分析。
1．3．5 空氣中過氧化氫殘留監(jiān)測方法
通過空調(diào)以及排風(fēng)系統(tǒng)的全排風(fēng)和過氧化氫自身分解成水和氧氣，房間內(nèi)部過氧化氫殘留一般在30 min 內(nèi)能降到職業(yè)健康允許暴露水平值(1×10-6) 以下( 依據(jù)“美國職業(yè)安全與人體健康”標(biāo)準(zhǔn): 當(dāng)環(huán)境中過氧化氫濃度小于1×10-6時，對人體健康是安全的)。
過氧化氫干霧滅菌結(jié)束，開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)30 min 后，參照“過氧化氫干霧分布均勻性”的測試位點(diǎn)設(shè)計(jì)方案，用德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀對4 個潔凈房間內(nèi)的過氧化氫殘留濃度進(jìn)行測試。
2、結(jié)果及分析
2.1過氧化氫干霧分布均勻性確認(rèn)結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn): 指示劑的過氧化氫反應(yīng)區(qū)域應(yīng)由紫色變成紅色。待滅菌潔凈區(qū)內(nèi)過氧化氫干霧滅菌的過氧化氫化學(xué)指示劑的測試確認(rèn)情況見表2。
表2 待滅菌潔凈區(qū)內(nèi)過氧化氫滅菌化學(xué)指示劑的測試結(jié)果
2.2滅菌效果確認(rèn)結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn): 對照管應(yīng)為陽性即變色( 呈黃色) ，滅菌后生物指示劑的菌管不變色( 呈紫色) 表示生物指示劑試驗(yàn)通過。
過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑測試情況見表3。
表3 四個潔凈房間過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑測試情況
結(jié)果表明: 經(jīng)過56 ℃培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)48 h，對照管明顯變色(呈黃色) ，結(jié)果判斷為陽性，有微生物生長; 經(jīng)滅菌處理的過氧化氫干霧滅菌效果測試用的17 支生物指示劑的菌管不變色(呈紫色) ，結(jié)果為陰性，判定為無微生物生長。由此確認(rèn)設(shè)定參數(shù)條件下，歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器在潔凈區(qū)使用的滅菌效果合格。
2.3沉降菌監(jiān)測結(jié)果
根據(jù)潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測的取樣計(jì)劃，過氧化氫干霧滅菌的沉降菌培養(yǎng)結(jié)果為各采樣點(diǎn)的沉降菌菌落數(shù)及空白對照均為Ocfu/皿，表明歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器滅菌后的潔凈區(qū)環(huán)境達(dá)到A 級潔凈度下沉降菌標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，符合潔凈區(qū)沉降菌限度的要求。
2.4浮游菌監(jiān)測結(jié)果
根據(jù)潔凈區(qū)浮游菌監(jiān)測的取樣計(jì)劃，過氧化氫干霧滅菌的浮游菌培養(yǎng)結(jié)果顯示各采樣點(diǎn)的浮游菌菌落數(shù)及空白對照均為Ocfu/皿，表明歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器滅菌后的潔凈區(qū)環(huán)境達(dá)到A 級潔凈度下浮游菌標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，符合潔凈區(qū)浮游菌限度的要求。
2.5過氧化氫殘留濃度量監(jiān)測結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn): B+A 潔凈區(qū)內(nèi)空氣中的過氧化氫殘留濃度量: ≤1 mg /L。經(jīng)過凈化處理后，歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器滅菌后空氣中過氧化氫殘留量監(jiān)測情況見表4。
表4 過氧化氫滅菌器滅菌后空氣中過氧化氫殘留量監(jiān)測結(jié)果( 單位: ×10-6 )
結(jié)果表明: 過氧化氫干霧滅菌結(jié)束經(jīng)30 min 排風(fēng)后，用德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀對潔凈車間進(jìn)行過氧化氫殘留測試，測試結(jié)果表明，潔凈區(qū)空氣中的過氧化氫殘留濃度量均≤1×10－6-6，過氧化氫殘留測試符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，不會對人體造成危害。
3、結(jié)語
本文通過使用化學(xué)指示劑對過氧化氫干霧均勻性進(jìn)行監(jiān)測，確認(rèn)了如下結(jié)果: (1) 歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器干霧滅菌，潔凈房間內(nèi)的過氧化氫分布均勻; (2) 通過使用生物指示劑對歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器干霧滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測，確認(rèn)了過氧化氫干霧達(dá)到有效的滅菌效果; (3) 通過對過氧化氫干霧滅菌的房間及房間設(shè)備進(jìn)行沉降菌監(jiān)測、浮游菌監(jiān)測，確認(rèn)了使用歐菲姆OXY－30000 過氧化氫滅菌器干霧滅菌后的潔凈區(qū)域及設(shè)備微生物水平能達(dá)到A 級潔凈級別要求；(4) 通過使用過氧化氫殘留濃度監(jiān)測儀對車間進(jìn)行過氧化氫殘留測試，過氧化氫殘留濃度量均≤1×10-6，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，表明過氧化氫殘留不會對人體造成危害。潔凈區(qū)域經(jīng)過過氧化氫熏蒸消毒滅菌后，潔凈區(qū)域環(huán)境的微生物被殺滅，過氧化氫殘留對潔凈區(qū)環(huán)境無影響，干霧滅菌器的滅菌效果達(dá)到預(yù)期要求。
干霧滅菌器是一種將液體消毒液霧化然后進(jìn)行消毒的設(shè)備。設(shè)備利用超聲霧化器產(chǎn)生電子高頻振蕩(振蕩頻率為1．7 MHz或2．4 MHz。超過人聽覺范圍，對人體及動物無傷害)以及通過陶瓷霧化片產(chǎn)生的高頻諧振，來實(shí)現(xiàn)將液態(tài)水分子結(jié)構(gòu)打散而產(chǎn)生自然飄逸的水霧，在霧化過程中將釋放大量的負(fù)離子，其與空氣中漂浮的煙霧、粉塵等產(chǎn)生靜電式反應(yīng)，使其沉淀。該干霧產(chǎn)生的過程不需加熱或使用化學(xué)試劑。與加熱霧化方式比較，能源節(jié)省了90%。還能有效去除甲醛、一氧化碳、細(xì)菌等有害物質(zhì)，使空氣得到凈化，減少疾病的發(fā)生。通過本文的驗(yàn)證測試，確認(rèn)了藥品生產(chǎn)潔凈區(qū)內(nèi)使用過氧化氫滅菌器干霧滅菌的有效性和安全性。在指定區(qū)域的藥品生產(chǎn)過程中，可以將過氧化氫干霧滅菌技術(shù)投入生產(chǎn)使用以便更有效地控制潔凈區(qū)的微生物限度，保障藥品生產(chǎn)的微生物控制能力和無菌保障水平。
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本文作者張黃梅、劉興、王正會，國藥集團(tuán)貴州血液制品有限公司，來源于山東化工，僅供交流學(xué)習(xí)。
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