答：SDA不是選擇性培養(yǎng)基，而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基，pH范圍5.4-5.8，某些細(xì)菌是可以在SDA上生長(zhǎng)的，霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)時(shí)SDA上生長(zhǎng)的菌均應(yīng)計(jì)入霉菌和酵母菌總數(shù)；或者可以經(jīng)過(guò)評(píng)估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。
問(wèn)：瓊脂培養(yǎng)基為什么需要倒置培養(yǎng)？
答：在進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)，若正置培養(yǎng)，瓊脂培養(yǎng)基中的水分易蒸發(fā)使平板干裂，不利于微生物的生長(zhǎng)；同時(shí)水蒸汽會(huì)在平皿蓋上形成冷凝水，若回落在培養(yǎng)基表面，會(huì)使菌落蔓延生長(zhǎng)，無(wú)法計(jì)數(shù)，若冷凝水太多會(huì)使培養(yǎng)基與平皿分離，容易滑動(dòng)倒置培養(yǎng)可減少培養(yǎng)基表面的空氣流動(dòng)，減慢培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)的速度，充分維持彈性，有利于菌株的生長(zhǎng)和繁殖，防止空氣中雜菌對(duì)培養(yǎng)基及培養(yǎng)物造成污染；也會(huì)由于重力作用在一定程度上使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)沉積到培養(yǎng)基表面，有利于微生物利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；倒置的平板方便拿取，避免環(huán)境中雜菌的污染。中國(guó)藥典2015版1105中關(guān)于平皿法（傾注法）有明確要求。
需要注意的是，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB4789.15-2016）是要求正置培養(yǎng)，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影響計(jì)數(shù)結(jié)果。
問(wèn)：中國(guó)藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計(jì)數(shù)時(shí)培養(yǎng)5-7天，那么培養(yǎng)5天可以么？
答：微生物限度檢查中霉菌和酵母菌培養(yǎng)時(shí)間5-7天，因不同的霉菌酵母菌生長(zhǎng)特性不同，所以具體培養(yǎng)時(shí)間，由企業(yè)根據(jù)各自情況（基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估）自行確定。
問(wèn)：中國(guó)藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計(jì)數(shù)時(shí)培養(yǎng)5-7天，該如何計(jì)數(shù)？
答：但是在實(shí)際操作中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)如果樣品中存在霉菌，培養(yǎng)到第5-7天時(shí)，可能菌落之間已經(jīng)融合，并蔓延生長(zhǎng)至整個(gè)平皿，此時(shí)的霉菌已經(jīng)無(wú)法計(jì)數(shù)。建議霉菌和酵母菌檢測(cè)時(shí)，第三天計(jì)一次數(shù)，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)計(jì)一次數(shù)，比較兩組數(shù)據(jù)，以多者為最終結(jié)果。
霉菌和酵母菌檢測(cè)培養(yǎng)過(guò)程中，避免頻繁取拿觀(guān)察，盡量避免振動(dòng)等，防止孢子擴(kuò)散。
問(wèn)：藥企的環(huán)境檢測(cè)應(yīng)該依據(jù)那個(gè)標(biāo)準(zhǔn)？
答：關(guān)于環(huán)境檢測(cè)，2015版《中國(guó)藥典》的9205和GB/T16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》都有規(guī)定，且一些細(xì)節(jié)略有差別。其中國(guó)標(biāo)的規(guī)定更為具體，建議實(shí)際操作中以國(guó)標(biāo)為準(zhǔn)，藥典可以做為參考。
問(wèn)：一些不常用的培養(yǎng)基開(kāi)瓶后在效期內(nèi)較長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)有用完，那么這些開(kāi)瓶后的培養(yǎng)基需要進(jìn)行復(fù)驗(yàn)嗎？
答：開(kāi)瓶后的培養(yǎng)基，如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，還在效期內(nèi)，建議開(kāi)瓶后間隔1年進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。如果出現(xiàn)結(jié)塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購(gòu)買(mǎi)量較多，一年內(nèi)未使用完，也建議進(jìn)行復(fù)檢。
問(wèn)：薄膜過(guò)濾法，濾膜邊緣長(zhǎng)了一圈菌，原因有哪些？
答：出現(xiàn)這個(gè)現(xiàn)象，可能的原因（常見(jiàn)）包括以下三個(gè)方面：
（1）濾杯：無(wú)論是一次性的濾杯還是反復(fù)滅菌的濾杯，理論上都是無(wú)菌的，但是不排除濾杯滅菌不徹底和使用時(shí)操作人員與濾杯底部接觸，污染濾杯的可能。
（2）微限儀的濾頭：微限儀濾頭如果在更換濾膜的過(guò)程中滅菌不徹底，上一個(gè)樣品可能會(huì)污染下一批濾膜，如果微限儀長(zhǎng)時(shí)間不滅菌，或使用的濾膜破損，都可能使微限儀內(nèi)部管道帶菌，在泵開(kāi)啟的瞬間形成氣溶膠，污染濾頭。
（3）轉(zhuǎn)移過(guò)程中被污染：在濾膜由濾頭轉(zhuǎn)移至平皿的過(guò)程中，鑷子滅菌不徹底，操作者手不穩(wěn)使濾膜和儀器，臺(tái)面，平皿，身體發(fā)生過(guò)接觸。
具體問(wèn)題具體分析，如果出現(xiàn)這樣的問(wèn)題，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況具體分析。
問(wèn)：控制菌檢查法中用到的培養(yǎng)基，在做培養(yǎng)基適用性的時(shí)候，其中有“指示特性”的表述，那么“指示特性”是指的什么意思？
答：培養(yǎng)基指示特性包括菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況（菌落顏色變化）等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上桃紅色菌落有沉淀環(huán)、乙型副傷寒沙門(mén)菌在XLD有黑心等。
問(wèn)：無(wú)菌檢查法用到的培養(yǎng)基（FTM和TSB）進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查的時(shí)候需不需要使用對(duì)照培養(yǎng)基？
答：在2015版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法通則1101中，并沒(méi)有強(qiáng)制規(guī)定靈敏度檢查需要使用對(duì)照培養(yǎng)基，所以不使用對(duì)照培養(yǎng)基也是可以的。但是國(guó)家有FTM和TSB的對(duì)照培養(yǎng)基，建議在做FTM和TSB的培養(yǎng)基適用性時(shí)，使用對(duì)照培養(yǎng)基進(jìn)行參比。
問(wèn)：生孢梭菌如何計(jì)數(shù)？
答：（1）使用用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)16-18小時(shí)這個(gè)時(shí)間進(jìn)行觀(guān)察，計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)前不要搖晃，培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)，培養(yǎng)基將渾濁，點(diǎn)計(jì)不清；
（2） 使用哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，澆注或涂布后，置厭氧罐（袋）里，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。
問(wèn)：無(wú)菌檢查法中，為什么培養(yǎng)基靈敏度檢查用了銅綠假單胞菌，而方法適用性以大腸埃希菌為驗(yàn)證菌株？
答：我國(guó)是抗生素及注射劑生產(chǎn)使用大國(guó)，銅綠假單胞菌為假單胞菌屬菌種，對(duì)很多抗生素都天然耐藥，藥物敏感度不高，不適合做方法適用性。但假單胞菌屬的細(xì)菌對(duì)培養(yǎng)體系的營(yíng)養(yǎng)要求高，所以適合做培養(yǎng)基適用性檢查。
問(wèn)：什么是不可接受微生物？
答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的，存在足夠的數(shù)量，通過(guò)產(chǎn)品的給藥途徑可能導(dǎo)致患者不可接受風(fēng)險(xiǎn)的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的，需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，包括微生物負(fù)載量、微生物特性、產(chǎn)品特性、給藥途徑、對(duì)患者潛在影響等。
問(wèn)： 培養(yǎng)基滅菌沒(méi)有按照廠(chǎng)家提供的滅菌參數(shù)進(jìn)行，是否可行？
答：可以。廠(chǎng)家產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用，使用單位也可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，在相關(guān)法規(guī)要求內(nèi)，使用自己驗(yàn)證過(guò)的滅菌參數(shù)來(lái)執(zhí)行。
【法規(guī)來(lái)源：中國(guó)藥典2015版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 ……培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行……】
問(wèn)：草酸鉀兔血漿和兔血漿的用途分別是什么？
答：草酸鉀兔血漿用于溶血性鏈球菌鏈激酶試驗(yàn)，致病性乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶)，此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，使生成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。此實(shí)驗(yàn)乙型溶血性鏈球菌陽(yáng)性，金黃色葡萄球菌陰性。
兔血漿用于金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗(yàn)。細(xì)菌生成血漿凝固酶后釋放于血漿中，稱(chēng)為游離凝固酶，不直接作用到血漿纖維蛋白原上，而是被血漿中的致活劑（即凝固酶致活因子）激活后變成耐熱的凝固酶樣物質(zhì)，此物質(zhì)纖維蛋白原變?yōu)楣虘B(tài)纖維蛋白，血漿因而凝固。致病性葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，例金黃色葡萄球菌陽(yáng)性，表皮葡萄球菌陰性。
問(wèn)：革蘭氏染色有哪些注意事項(xiàng)？
答：（1）最好挑選18-24h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,培養(yǎng)時(shí)間過(guò)久的的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可能會(huì)被染成紅色而造成假陰性。
（2）挑取適量的菌，不宜過(guò)多,均勻涂開(kāi)。
（3）乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會(huì)造成假陽(yáng)性,脫色過(guò)度可能會(huì)造成假陰性。
問(wèn)：如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制備斜面？
答：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，擺放斜面一般有三種形式：
（1）長(zhǎng)斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。
（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長(zhǎng)度約2cm；如三糖鐵高層斜面。
（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。
問(wèn)：三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么？
答：該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，分解葡萄糖產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類(lèi)不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
問(wèn)：如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色，中間有黑色且產(chǎn)氣，能否判定為沙門(mén)菌？
答：不能。某些非沙門(mén)菌也能在三糖鐵上呈現(xiàn)和沙門(mén)菌一樣的顏色變化，例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化，需要進(jìn)一步的進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為沙門(mén)菌。
如果采用傳統(tǒng)的生化鑒定，可參考GB 4789.4-2016中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)的方法。
問(wèn)：按照中國(guó)藥典2015版1106控制菌檢查法檢測(cè)大腸埃希氏菌，如果麥康凱瓊脂上有疑似菌，如何用傳統(tǒng)方法確證？
答：挑選疑似菌分離、純化。
（1）革蘭氏染色：革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌；
（2）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；
（3）IMVIC試驗(yàn)結(jié)果：++--或-+--； 判定檢出大腸埃希氏菌。
問(wèn)：按照中國(guó)藥典2015版1106控制菌檢查法檢測(cè)銅綠假單胞菌時(shí)，溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基中加入甘油的作用是什么？
答：作為碳源補(bǔ)充，有利于綠膿菌素的生成。
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