1. 背景介紹
隨著制藥行業(yè)知識的迭代更新，監(jiān)管機構在審計時，對藥企的各方面要求越來越嚴格，尤其針對質(zhì)量控制實驗的數(shù)據(jù)完整性，俗話說打鐵需要自身硬，所以我們需要時刻補充我們的知識，使我們的體系能夠滿足當下的要求，并順利通過每一次審計。本文將對質(zhì)量控制實驗室產(chǎn)生的檢測色譜圖的合理正確積分方式進行討論，以期對各位同仁能有所幫助?；谀壳扒闆r，相較于含量以及其他單個組分檢測來說，有關物質(zhì)的正確合理積分的難度更大，并且當前的審評對產(chǎn)品中有關物質(zhì)的研究非常重視，也是必查內(nèi)容，所以本文主要針對有關物質(zhì)的正確合理積分進行討論。
2. 色譜圖積分的影響
有關物質(zhì)方法研究的雜質(zhì)需要結合各國藥典、原料藥工藝和制劑工藝，數(shù)目也越來越多，十幾個雜質(zhì)都是非常常見的情況，這對色譜圖的合理積分已然是一個不小的挑戰(zhàn)，但為保證各個雜質(zhì)之間能夠有效分離，通常會采用梯度洗脫方式，而梯度洗脫方法的基線通常會存在上下波動以及雜質(zhì)和梯度洗脫峰相近的情況，再次加大了色譜圖合理積分的難度，如果等度洗脫，則可能存在洗脫時間長，保留時間較大的色譜峰展寬嚴重，容易導致積分不會。如果積分存在不合理的話，輕則對檢測的結果會造成影響，重則可能會誤判產(chǎn)品的質(zhì)量情況，這將是非常危險的事情。
3. 正確合理的積分
正確合理的積分，需要在合適的標尺下進行，例如圖1，標尺設置的過大，我們并不能觀察到積分是否合理，如果我們將標尺放大后，圖2，我們可以觀察到主峰中含有一個雜質(zhì)峰，但錯誤的和主峰積分為一個峰而被遺漏，還有兩個峰的積分的落點落在了色譜峰上，這兩種的積分方式都會導致檢測到的雜質(zhì)偏小或未檢測到雜質(zhì)，而這種情形是最危險的，可能存在雜質(zhì)超標的風險。
圖1 不合適的標尺下，不能顯示出積分的合理性
圖2 將標尺放大后，發(fā)現(xiàn)存在漏積分雜質(zhì)，以及積分不合理的情況。
如何正確合理的進行疾風，參考PDA第80號技術報告《制藥實驗室數(shù)據(jù)完整性管理體系》，分別對正常峰，“M”型峰以及“h”型峰的合理的積分方式和不合理的積分方式給出了圖示，見圖3。
圖3 PDA TR80中列舉的不合理和合理積分
相對而言，PDA TR80報告中給出的舉例比較簡單，如果是如圖4的情況，我們?nèi)绾芜M行合理的積分？
圖4 含雜質(zhì)較多的樣品色譜圖
雖然圖4中的雜質(zhì)非常多，但是要正確合理的積分，那么把所有的峰都按照正確的積分方式積分上就是合理嗎？其實不然，因為有些方法的靈敏度相對較高，檢測能力較強，在色譜圖中體現(xiàn)出的色譜峰的個數(shù)就會很多，但是這些雜質(zhì)的含量并不高，按照ICH Q3A和Q3B指導原則，根據(jù)每日最大劑量，可以對方法設置報告限度，低于報告限度的雜質(zhì)，不存在安全性的問題，可以不再進行報告。所以這些雜質(zhì)不需要進行積分，但是因為有一些雜質(zhì)在報告限度的附近，為避免誤判的風險，可以設置相應的積分方式對報告限度水平一半的雜質(zhì)不進行積分。這樣既能保證積分的合理性和正確性，又能提高工作的效率。
為保證不同的分析師可以采用相同的積分方式進行積分，需要在SOP中進行詳細的說明，并對分析師進行嚴格的培訓和考核。還需要在SOP中，對空白溶劑，輔料或者其他的我們非關注的峰，如果不進行積分，則應在SOP中明確。此外，如果單個方法中存在在特殊情況，一定要在方法中以高亮的方式體現(xiàn)，以確保每個分析師都可以清楚明了。
現(xiàn)在實驗室的工作都非常繁重，分析師的壓力很大，在這種環(huán)境下還要進行細致入微的觀察，很難沒有疏漏，所以實驗室應當建立合理的體系去協(xié)助分析師避免這種問題，要中試對電子數(shù)據(jù)的復核，而不是僅在辦公位上對紙質(zhì)的圖進行核對。
4. 如何進行手動積分
軟件中的主要積分參數(shù)包括閾值，峰寬，最小峰面積和最小峰高。建議在建立積分方法的時候，盡量對這幾個積分參數(shù)進行積分的調(diào)整，如果參與的積分參數(shù)過多，后面調(diào)整單個峰的難度就會越大，越容易出現(xiàn)積分不合理的情況。
積分的方式分為自動積分和手動積分，通常一個序列應使用一個積分方法對整個序列進行批處理積分，如果自動積分的參數(shù)經(jīng)過了一系列的調(diào)整，包括了高級的積分參數(shù)仍不能正確合理的對色譜圖進行積分，則需要進行手動積分。手動積分一定要有SOP支持，并在手動積分之前，一定需要被相關部門批準，并在積分時詳細的記錄重新積分的原因，并保留自動積分的圖譜做備用。
產(chǎn)生手動積分的根本原因，可能還是在檢測方法上，有可能是方法的基線波動，或者是分離度不是很好所導致，因此方法開發(fā)的時候，應當以分離度大于2.0為準，為日后的檢測放行，以及穩(wěn)定性檢測等工作留有更多的可操作空間。
5. 總結
上述內(nèi)容主要針對有關物質(zhì)的積分方式，但對于含量，殘留溶劑等我們經(jīng)常采用默認的積分參數(shù)，但如果把標尺放大到基線水平，你會驚奇的發(fā)現(xiàn)，積分的落點并不在色譜峰的尾巴上，因此除有關物質(zhì)外，其他的檢測方法在積分的時候也應當將標尺放大到基線水平觀察積分的合理性。如果實驗室對正確合理的積分進行足夠的重視，既能增加實驗室對自己檢測結果的自信心，也能更加從容的面對每一次審計，這將是一勞永逸的事情，最后，期望本文對您能有所幫助。
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