摘 要
非口服途徑給藥制劑開展制劑安全性試驗對評估藥物的臨床用藥風險具有重要的意義。盡管國內(nèi)外相關(guān)指導原則對如何開展制劑安全性試驗進行了詳細的介紹，但在審評中發(fā)現(xiàn)仍有部分產(chǎn)品的申報資料存在缺陷，影響了藥物的研發(fā)效率。本文對近年來國內(nèi)外藥物制劑安全性相關(guān)指導原則信息進行了梳理，并結(jié)合具體審評案例對常見的問題進行闡述，以期為相關(guān)工作提供參考。
藥物的制劑安全性是指藥物經(jīng)皮膚、腔道、黏膜、血管等非口服途徑給藥后，對用藥局部產(chǎn)生的毒性和/或?qū)θ硐到y(tǒng)產(chǎn)生的毒性，屬于藥物非臨床安全性評價的組成部分，主要包括藥物溶血性、過敏性和刺激性試驗。藥物的原形、代謝產(chǎn)物、雜質(zhì)、輔料、溶媒以及理化性質(zhì)（如pH值、滲透壓等）均可能引起藥物制劑安全性風險，研究制劑在給藥部位引起的局部和/或全身毒性，有助于提示其在臨床應用時可能出現(xiàn)的藥物不良反應，因此采用能充分代表臨床試驗用樣品（處方和工藝均已確定）的藥物制劑開展制劑安全性試驗具有重要意義。
盡管有關(guān)技術(shù)指導原則對如何開展制劑安全性試驗進行了相關(guān)規(guī)定，但在審評工作中發(fā)現(xiàn)，有些產(chǎn)品會因為制劑安全性試驗方法錯誤、試驗設(shè)計不合理或試驗項目缺項等原因?qū)е掳踩匝芯咳毕?，影響了藥物的研發(fā)進程。本文對近年來國內(nèi)外藥物制劑安全性相關(guān)指導原則信息進行了綜述，并根據(jù)國內(nèi)相關(guān)指導原則要求，對常見的問題進行梳理分析，提出有關(guān)建議和思考，以期為相關(guān)工作提供參考。
1、近年來國內(nèi)外指導原則情況介紹
1.1 國內(nèi)指導原則情況
2014年原國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）發(fā)布了《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》，該指導原則是目前國內(nèi)針對藥物制劑安全性試驗的主要參考指導原則，是在2005年CFDA發(fā)布的《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導原則》基礎(chǔ)上的合并修訂版，同時參考了美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）、歐洲藥品管理局（EMA）、美國環(huán)境保護署（EPA）、國際標準化組織（ISO）、經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）及日本厚生省等機構(gòu)的相關(guān)指導原則。在該指導原則基礎(chǔ)內(nèi)容中詳細列舉了受試物、實驗動物、溶血性試驗、過敏性試驗、刺激性試驗、光毒性試驗、結(jié)果分析及常見問題處理，并收載了常用的試驗方法，對于指導藥品研發(fā)單位及注冊申請人開展相關(guān)研究具有重要參考價值。
1.2 歐盟指導原則情況
2016年EMA針對藥物局部耐受性試驗發(fā)布了《Guideline on non-clinical local tolerance testing of medicinal products》，替代了其2001年發(fā)布的《Note for Guideline on non-clinical local tolerance testing of medicinal products》。根據(jù)歐盟官方的說明，修訂原因主要是基于新的給藥途徑制劑如透皮給藥制劑的興起，以及監(jiān)管機構(gòu)逐步認可采用科學有效的體外試驗方法作為藥物制劑安全性綜合評價的方法之一，以及國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceutical for Human Use, ICH) M3(R2)指導原則的全面實施，而ICH M3(R2)中涉及了藥物局部耐受性試驗相關(guān)信息。在該指南中，具體介紹了局部耐受性試驗的一般考慮，采用證據(jù)權(quán)重法分析體外耐受性試驗的可行性，體內(nèi)局部耐受性試驗的關(guān)注要點如藥物給藥頻率和周期、毒性可逆性、受試藥臨床代表性、劑量選擇、動物福利、給藥途徑、對試驗設(shè)計和試驗結(jié)果的分析，以及針對不同給藥途徑的藥物包括眼部給藥、經(jīng)皮給藥、注射給藥或其他給藥途徑的藥物如何開展制劑安全性試驗給出了相應的建議。
1.3 美國指導原則情況
FDA目前尚無針對藥物制劑安全性評價專門制定的指導原則，但在部分指導原則中對制劑安全性相關(guān)內(nèi)容有一定涉及。
2015年FDA發(fā)布了《Nonclinical Safety Evaluation of Reformulated Drug Products and Products Intended for Administration by an Alternate Route》，指出已批準上市的藥物改變處方工藝或改變給藥途徑時，應當采用臨床擬用途徑開展單次和/或重復給藥毒性試驗，同時考慮進行全面的組織病理學檢查；給藥周期應當遵循ICH M3（R2）或ICH S9的要求，但對于僅改變處方工藝但不改變給藥途徑的藥物給藥周期可適當短于ICH M3（R2）的要求。在該指導原則中，分別對不同給藥途徑藥物如口服給藥、皮膚給藥（包括貼劑）、靜脈給藥、皮下或肌肉給藥、眼部給藥、耳部給藥、吸入給藥、鼻內(nèi)給藥、陰道給藥、口腔內(nèi)（包括頰、舌或牙周）給藥、海綿體內(nèi)或尿道內(nèi)給藥、鞘內(nèi)或硬膜外給藥制劑或緩釋制劑等，應開展哪些非臨床安全性研究（包括溶血性、過敏性和刺激性試驗信息）進行了闡述。
2023年6月美國針對藥物免疫毒性發(fā)布了《Nonclinical Evaluation of the Immunotoxic Potential of Pharmaceuticals》，指出局部給藥制劑應當對皮膚致敏性進行評估。此外，F(xiàn)DA也接受采用臨床擬用制劑開展豚鼠最大化實驗對藥物皮膚致敏潛力進行評估。
2、需考慮開展制劑安全性試驗的常見情況
非口服途徑給藥的藥物制劑往往需開展符合非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）的制劑安全性試驗，包括創(chuàng)新藥、改良型藥物、仿制藥以及藥物上市后變更等。由于不同類別的藥物自身特點不同，非臨床制劑安全性試驗應結(jié)合受試藥自身特點進行合理設(shè)計，遵循具體問題具體分析原則。
生物制品開展制劑安全性試驗時可參考ICH S6（R1）指導原則。
對于非口服途徑給藥的創(chuàng)新藥物，除需全面評估藥物的系統(tǒng)性毒性風險外，還需評估其制劑安全性風險。部分制劑安全性試驗可結(jié)合在一般毒理學試驗中進行，但供試品應能代表臨床擬用樣品或模擬臨床實際用藥情況，試驗設(shè)計應能支持擬定的臨床試驗方案（包括給藥部位、給藥途徑、給藥劑量等）。
對于非口服途徑給藥的改良型藥物，如口服制劑改注射劑、普通注射劑改特殊注射劑（如脂質(zhì)體、微球、微乳等）等，與原有制劑比較，此類藥物處方工藝和/或給藥途徑可能發(fā)生改變，需考慮開展制劑安全性研究。
對于非口服給藥途徑的仿制藥，包括涉及處方工藝變更的已上市仿制藥申請一致性評價品種，如注射劑、吸入制劑、滴眼液、陰道給藥制劑等，是目前要求開展制劑安全性研究最常見的注冊類型。仿制藥一般具有與原研藥或參比制劑相同的活性成分、劑型、規(guī)格、適應證、給藥途徑和用法用量等，但兩者藥學特性、生產(chǎn)工藝、輔料、雜質(zhì)等可能存在一定的差異，為確保仿制藥與原研藥/參比制劑質(zhì)量和療效的一致性，應開展與原研藥/參比制劑對比的制劑安全性試驗，以評估兩者制劑安全性風險差異。
對于生物制品的制劑安全性評價思路與化藥相似，但也有一定的特殊性。根據(jù)ICH S6（R1），很多治療用人用生物制品對動物具有免疫原性，因此這類產(chǎn)品應在開展重復給藥毒性研究時檢測抗體水平以提示藥物的免疫原性并幫助解釋研究結(jié)果。但在動物中誘導了抗體形成并不能預示在人體可能產(chǎn)生抗體，如重組蛋白在人體中罕見出現(xiàn)嚴重過敏反應，對蛋白產(chǎn)品呈陽性的豚鼠過敏實驗并不能預測人體反應，因此針對此類產(chǎn)品一般不需開展豚鼠過敏實驗。此外，對于臨床期間或上市后變更的生物制品，根據(jù)《已上市生物制品藥學變更研究技術(shù)指導原則（試行）》中分類屬于重大變更的，一般需提供制劑安全性試驗數(shù)據(jù)；對于中等或微小變更的，應基于生物制品藥學可比性研究結(jié)果綜合分析。
對于進口注冊產(chǎn)品，如果境外上市時已進行了規(guī)范的動物制劑安全性實驗和/或在規(guī)范的臨床試驗中對局部耐受性進行了研究，則可根據(jù)上述數(shù)據(jù)進行評價。
此外，部分藥物由于藥學質(zhì)控簡單，一般不需要提供制劑安全性資料，如注射用水、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液或甘露醇注射液等。
3、制劑安全性試驗關(guān)注要點
3.1 刺激性試驗
刺激性是指非口服給藥制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥反應。刺激性試驗是觀察動物的血管、肌肉、皮膚、黏膜等部位接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應。一般應選擇與臨床用藥相似的部位，與臨床用藥途徑一致，給藥濃度應至少包含臨床擬用最高濃度，給藥頻率和周期應結(jié)合臨床用法用量，給藥體積不應過小，同時還應注意給藥次數(shù)、速度等對試驗結(jié)果的影響。刺激性試驗方法包括血管刺激性試驗、肌肉刺激性試驗、皮膚刺激性試驗、黏膜刺激性試驗、眼刺激性試驗、滴鼻和吸入刺激性試驗、陰道刺激性試驗、直腸刺激性試驗、口腔用藥及滴耳劑等刺激性試驗等，常見的試驗動物種屬包括兔、大鼠、小型豬等。值得注意的是，在藥物刺激性試驗中需特別重視組織病理學檢查和結(jié)果分析，并提供規(guī)范完整的組織病理學檢查報告。部分特殊的刺激性試驗如眼用制劑一般要求開展裂縫燈檢查。對于臨床可能存在皮損情況的皮膚給藥制劑，除完整皮膚外，尚需考察對破損皮膚的刺激性。在藥物刺激性試驗中應注意操作的規(guī)范性，并注意區(qū)分藥物的刺激性與給藥造成的物理反應，如藥物注射造成的局部創(chuàng)傷。
3.2 過敏性試驗
過敏性反應又稱超敏反應，指機體受同一抗原再刺激后產(chǎn)生的一種表現(xiàn)為組織損傷或生理功能紊亂的特異性免疫反應。過敏性試驗是觀察動物接觸受試物后的全身或局部過敏反應。給藥劑量應包括臨床擬用最大劑量或濃度。通常局部給藥發(fā)揮全身作用的藥物（如注射劑和透皮吸收劑等）需考察Ⅰ型過敏反應，如注射劑需進行豚鼠主動全身過敏試驗，皮膚給藥制劑需進行豚鼠主動皮膚過敏試驗。吸入途徑藥物應采用豚鼠吸入誘導和刺激試驗。黏膜給藥應結(jié)合受試物的特點參照經(jīng)皮給藥過敏性試驗方法進行。Ⅱ和Ⅲ型過敏反應可結(jié)合在重復給藥毒性試驗中觀察。經(jīng)皮給藥制劑（包括透皮劑）應進行Ⅳ型過敏反應試驗，包括豚鼠最大化試驗（GPMT）和豚鼠封閉斑貼試驗（BT）或其他合理的試驗方法如小鼠局部淋巴結(jié)試驗（LLNA）等。在藥物致敏性試驗中應注意區(qū)分藥物的過敏反應和藥物的藥理作用放大導致的毒性或類過敏反應。在這種情況下可另外設(shè)置單獨組別動物僅致敏給藥觀察動物的毒性反應，以更好地區(qū)分藥物的過敏反應和類過敏反應。
3.3 溶血性試驗
溶血性是指藥物制劑引起的溶血和紅細胞凝聚等反應。溶血性反應包括免疫性溶血與非免疫性溶血。凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應的其他局部用藥制劑均應進行溶血性試驗。免疫性溶血是指通過免疫反應產(chǎn)生抗體而引起的溶血反應，包括由免疫球蛋白G（IgG）介導的Ⅱ型過敏反應以及由IgG和免疫球蛋白M（IgM）介導的Ⅲ型過敏反應。非免疫性溶血包括由于藥源性的氧化性溶血以及因血液穩(wěn)態(tài)的改變而出現(xiàn)的溶血和紅細胞凝聚等。溶血性試驗包括體外試驗和體內(nèi)試驗，常規(guī)采用體外試管法評價藥物溶血性。一般采用人血或兔血紅細胞懸液試驗體系，受試藥濃度應采用臨床擬用最高濃度。如果仿制藥出現(xiàn)溶血性陽性結(jié)果，一般應與參比制劑開展體外溶血性對比研究，若受試藥溶血性強于參比制劑，應當分析原因，在排除相關(guān)因素后重新開展試驗，應保證仿制藥溶血性風險不高于參比制劑。如果新藥出現(xiàn)體外溶血性陽性結(jié)果，一般需考慮進行動物體內(nèi)溶血性試驗或結(jié)合重復給藥毒性試驗開展評估藥物的體內(nèi)溶血性，對溶血機制進一步探索，并推斷與人體的相關(guān)性，以提示臨床試驗風險，如因Ⅱ型和Ⅲ型過敏反應引起的溶血通常需結(jié)合重復給藥毒性試驗中免疫病理改變進行綜合評價分析。
4、制劑安全性試驗常見問題探討
非口服途徑給藥制劑在開展制劑安全性試驗時，存在試驗設(shè)計等原因?qū)е碌纳陥筚Y料不規(guī)范，影響藥物研發(fā)進程。常見問題梳理如下：
4.1 仿制藥制劑安全性研究未設(shè)置參比制劑對比
研究非口服仿制藥非臨床制劑安全性研究的目的主要是為了考察仿制藥和參比制劑在制劑安全性方面的一致性。因此，對于仿制藥注冊申報或者變更處方工藝的仿制藥一致性評價研究，均應設(shè)置參比制劑進行對比研究，同時應當確保供試品的制劑安全性風險不高于參比制劑。
案例1 某地佐辛注射制劑仿制藥，全身主動過敏試驗、被動皮膚過敏試驗、血管刺激性試驗、肌肉刺激性試驗結(jié)果均為陰性，但體外溶血性試驗中部分濃度下出現(xiàn)溶血，而未設(shè)置參比制劑對照組，不能說明與參比制劑的一致性。建議補充與參比制劑對比的溶血試驗以提示一致性，并進一步分析出現(xiàn)溶血的可能原因。
4.2 試驗設(shè)計和試驗方法不合理
良好的試驗設(shè)計可減少非藥物性因素對試驗結(jié)果的影響，符合規(guī)范的試驗設(shè)計是保證試驗結(jié)果的科學可靠的重要手段。在開展藥物制劑安全性試驗中，建議遵循相關(guān)指導原則要求，尤其需重點關(guān)注試驗樣品的臨床代表性，藥物給藥劑量、給藥濃度、給藥周期、給藥方法設(shè)計以及組織病理學檢查結(jié)果的分析等，充分暴露藥物的毒性風險并對藥物風險進行科學評估，以供臨床風險控制參考。
案例2 某帕瑞昔布鈉注射制劑仿制藥，體外溶血性試驗、豚鼠全身主動及被動皮膚過敏試驗、兔肌肉和血管刺激性試驗結(jié)果均為陰性，但部分試驗設(shè)計存在一些問題，如肌肉刺激性試驗采用單次注射給藥，而臨床為多次給藥；兔肌肉和血管刺激性試驗均未提供組織病理學檢查報告。建議參考相關(guān)指導原則，補充規(guī)范的制劑安全性試驗。
4.3 黏膜給藥或吸入途徑藥物未開展過敏性試驗
有些黏膜給藥及吸入途徑的藥物未提供過敏性試驗資料。對于此類藥物，雖然動物過敏性試驗結(jié)果和臨床相關(guān)性不是特別明顯，但仍有一定的參考意義，建議開展過敏性試驗以全面評估藥物的制劑安全性風險。吸入途徑藥物建議采用豚鼠吸入誘導和刺激試驗，黏膜給藥建議結(jié)合受試物的特點參照經(jīng)皮給藥過敏性試驗方法進行。
4.4 處方工藝變更品種未開展制劑安全性試驗
對于處方工藝變更品種，如已上市仿制藥申請一致性評價，藥物輔料、雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物及理化性質(zhì)均有可能引起刺激性和/或過敏性和/或溶血性的發(fā)生。因此，對于此類藥物，無論處方工藝與參比制劑是否一致，通常均應開展非臨床制劑安全性試驗以評估藥物的制劑安全性風險。
案例3 某胞二磷膽堿注射制劑仿制藥申請一致性評價，僅提供了部分胞二磷膽堿注射液的藥理毒理綜述資料，申報資料中說明其與參比制劑處方一致，除有效成分外僅含pH緩沖劑，無其他輔料及特殊溶劑，因此不再進行刺激性、過敏性和溶血性試驗。建議根據(jù)相關(guān)指導原則，補充相應的制劑安全性試驗資料。
4.5 實驗動物選擇及實驗結(jié)果分析不合理
非臨床制劑安全性試驗一般應遵循隨機、對照原則，排除非藥物性因素對試驗結(jié)果的干擾，當陰性對照組也出現(xiàn)陽性結(jié)果時，應客觀分析原因，若因動物自身健康問題所致，應考慮重新開展規(guī)范的動物實驗。同時，動物數(shù)量的確定應以實驗結(jié)果可評價為基礎(chǔ)，充分考慮“3R”原則，減少不必要的動物資源浪費。
4.6 試驗質(zhì)量問題
藥物制劑安全性試驗應當在經(jīng)過藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范認證的機構(gòu)開展并遵守藥物非臨床研究管理規(guī)范，確保試驗質(zhì)量；申報資料內(nèi)容應當清晰、準確、完整、前后信息對應，對試驗結(jié)果進行科學分析，確保試驗資料的可評價性，避免因各種問題通過不同方式反復與申請者溝通確認，以提高藥物研發(fā)的質(zhì)量和效率。常見的問題包括實驗動物質(zhì)量差，實驗操作不規(guī)范，實驗報告數(shù)據(jù)欠完善等。
5、討 論
非口服途徑給藥的藥物開展制劑安全性試驗對評估藥物的臨床用藥風險具有重要意義。研究過程中參考相關(guān)技術(shù)指南，遵循具體問題具體分析原則，結(jié)合受試藥物的特點合理設(shè)計試驗，在闡明其研究方法或技術(shù)科學合理的前提下進行規(guī)范性操作，申報資料應對試驗結(jié)果進行全面分析，以科學評估藥物的臨床制劑安全性風險。
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