2024年1月，歐盟更新了《GMP和GDP問答》的無菌附錄部分，新增了3個問答，更新了1個，刪除了5個，有2個問答保持不變。
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本次更新主要內(nèi)容包括：
1. 2022版附錄1發(fā)布后，內(nèi)容已經(jīng)涵蓋部分原有問答，對這些問答進(jìn)行了刪除；
2. 部分問答參考的指南內(nèi)容有變化，更新了這部分問答；
3. 對2022版附錄1的部分新條款進(jìn)行了解釋。
新增問答
1. Is rapid method valid for the detection of microorganism within grade A and B? 快速方法是否對A/B級區(qū)內(nèi)微生物的檢出有效？
回答：滿足附錄1中9.28、9.30和9.31要求時，快速方法是可加快微生物檢出的替代監(jiān)測系統(tǒng)之一。
相關(guān)條款主要內(nèi)容：
9.28要求快速和自動化的微生物監(jiān)測方法應(yīng)經(jīng)過驗證并證明等同或優(yōu)于已建立的方法；
9.30給出了微生物污染的行動限，并提示可以使用其它方法，只要這些方法滿足相同目的；如果采用不同的或新的技術(shù)并且結(jié)果不以CFU的方式呈現(xiàn)時，應(yīng)科學(xué)地論證其限度，并盡可能將其與CFU相關(guān)聯(lián)；
9.31對A/B級區(qū)檢出微生物的鑒定和潛在影響評估進(jìn)行了要求，并提示應(yīng)考慮C/D級區(qū)檢出微生物的鑒定；
拓展閱讀：
適用于環(huán)境監(jiān)測的快速方法基于多種科學(xué)原理。有些方法仍然需要使用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法；然而，如果使用新的檢測技術(shù)，檢測和計數(shù)可能會更快，例如：
微菌落的數(shù)字成像和自體熒光；
熒光染色和激光激發(fā)微菌落；
快速檢測二氧化碳（CO2）；
在短暫的微生物富集期后檢測三磷酸腺苷（ATP）。
其他快速方法在檢測或計數(shù)之前不需要微生物生長，因此，結(jié)果的時間可以是瞬時的或接近實時的。實現(xiàn)這些結(jié)果的快速技術(shù)包括：
使用活性染色和激光檢測系統(tǒng)的流式和固相細(xì)胞術(shù)；
ATP生物發(fā)光，由于樣品中的微生物濃度而不需要富集；
空氣或水中微生物的固有熒光和光學(xué)光譜檢測；
拉曼光譜與活性染色相結(jié)合；
核酸擴(kuò)增技術(shù)。
更多內(nèi)容可參考：藥品GMP指南（第2版）無菌制劑分冊 第14章 環(huán)境監(jiān)測，該章節(jié)對快速微生物方法進(jìn)行了系統(tǒng)介紹，包括：科學(xué)原理、方法優(yōu)點、方法和設(shè)備的驗證等。
2. Is an isolator considered as a “closed isolator” if the semi-continuous ingress and/or egress of materials during operations is conducted via reproducible bio-decontamination steps (active VPHP material airlock)? 對于操作過程中物料的半連續(xù)進(jìn)出是通過可重復(fù)的生物去污染步驟（如采用主動式VPHP的物料氣鎖）進(jìn)行的隔離器，是否被視為“封閉式隔離器”？
回答：
附錄1區(qū)分了兩種類型的隔離器：
封閉式隔離器系統(tǒng)通過與輔助設(shè)備的無菌連接而非通向周圍環(huán)境的開口來完成物料轉(zhuǎn)移，從而防止隔離器內(nèi)部受到外部污染。封閉系統(tǒng)在整個操作過程中保持密封；
開放式隔離器系統(tǒng)設(shè)計為允許物料在操作過程中通過一個或多個開口連續(xù)或半連續(xù)進(jìn)出。開口經(jīng)過設(shè)計（例如使用連續(xù)正壓）以防止外部污染物進(jìn)入隔離器。
根據(jù)附錄1術(shù)語表定義，設(shè)計與使用可重復(fù)生物去污染步驟（主動VPHP去污染）的物料轉(zhuǎn)移氣鎖相接的隔離器可能被視為封閉式隔離器，前提是根據(jù)確認(rèn)/驗證研究和監(jiān)測數(shù)據(jù)的文件證據(jù)，可以證明接口構(gòu)成了阻隔周圍環(huán)境的有效屏障。
例如，只要VPHP循環(huán)得到驗證，并且在裝載過程中氣鎖完整性被打破時，灌裝間環(huán)境受到密封門（作為屏障）的保護(hù)，接著進(jìn)行去污染循環(huán)，然后再打開屏障，這時可能視為封閉式隔離器。應(yīng)考慮附錄1中4.10、4.11和4.12的要求。
需要指出的是，應(yīng)與相應(yīng)的監(jiān)管機構(gòu)討論這些要素。
解讀（Ian Thrussell）：
This means that an isolator with one or more airlock that has two sealed doors (one to the working enclosure and one to the surrounding room) can be considered a closed isolator if the airlock is gassed using a validated cycle each time it is used.
這是指，如果每次使用氣鎖時都使用經(jīng)過驗證的VPHP循環(huán)對氣鎖進(jìn)行充氣，則具有一個或多個氣鎖且具有兩個密封門（一個通向工作區(qū)域，一個通向周圍房間）的隔離器可被視為封閉式隔離器。
相關(guān)條款主要內(nèi)容：
4.10要求任何有可能損害潔凈室或關(guān)鍵區(qū)域潔凈度的活動都應(yīng)進(jìn)行評估，如果不能取消這些活動，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)目刂拼胧?/span>
4.11對物料、設(shè)備和組件轉(zhuǎn)移至A/B級區(qū)以及從A/B級區(qū)移出物品的要求進(jìn)行了說明；
4.12對氣鎖設(shè)計進(jìn)行了說明，包括人員氣鎖和物料氣鎖；
拓展閱讀：
無菌傳遞是指在生產(chǎn)工藝過程中，產(chǎn)品藥液、包材、設(shè)備配件、工具、環(huán)境監(jiān)測設(shè)備和耗材等生產(chǎn)要素從外部傳遞進(jìn)入無菌生產(chǎn)核心區(qū)域（這里主要指RABS或隔離器內(nèi)部）的過程。
在傳遞過程中，不能有任何污染被傳遞到RABS和隔離器內(nèi)部。物品傳遞進(jìn)入屏障系統(tǒng)前，通常根據(jù)與產(chǎn)品接觸的程度（直接接觸、間接接觸和不接觸）進(jìn)行相應(yīng)的消毒/滅菌等處理，通過傳遞艙、氣鎖、RTP等設(shè)備設(shè)施進(jìn)行傳遞。
常見的帶滅菌/去污染功能的傳遞設(shè)備設(shè)施有以下3種。
去熱原隧道烘箱，應(yīng)用于散裝西林瓶等包材連續(xù)的滅菌/去熱原，與灌裝設(shè)備對接，進(jìn)入A級環(huán)境。
電子束滅菌系統(tǒng)（E-Beam）、脈沖強光滅菌系統(tǒng)，應(yīng)用于對不耐受高溫的物品表面進(jìn)行連續(xù)的滅菌，如預(yù)填充的巢盒包裝表面進(jìn)行滅菌，與后續(xù)的脫內(nèi)包裝設(shè)備對接。
汽化過氧化氫去污染傳遞艙，應(yīng)用于對表面光滑、規(guī)則的不接觸產(chǎn)品的部件或經(jīng)過滅菌處理的帶包裝的物料的表面去除污染后傳遞進(jìn)入核心區(qū)域。此類傳遞艙一般與核心區(qū)域?qū)印?/span>
更多內(nèi)容可參考：藥品GMP指南（第2版）無菌制劑分冊 第17章 屏障技術(shù)，該章節(jié)對RABS、隔離器進(jìn)行了系統(tǒng)介紹，并對VPHP去污染的方法開發(fā)進(jìn)行了詳細(xì)介紹。
3. What are the requirements for the bioburden sampling to support parametric release? 用以支持參數(shù)放行的生物負(fù)載取樣的要求是什么？
回答：
附錄1的10.4規(guī)定，對于許可進(jìn)行參數(shù)放行的產(chǎn)品，應(yīng)制定一個在滅菌循環(huán)開始之前針對灌裝產(chǎn)品的支持性滅菌前生物負(fù)載監(jiān)測計劃，并對每批（亞批）進(jìn)行生物負(fù)載分析。滅菌前灌裝單元的取樣位置應(yīng)基于最差條件，并具有批次代表性。應(yīng)鑒別生物負(fù)載檢測過程中發(fā)現(xiàn)的任何微生物，并確定其對滅菌工藝有效性的影響。在適當(dāng)?shù)那闆r下，應(yīng)監(jiān)測細(xì)菌內(nèi)毒素/熱原的水平。
附錄17的4.9規(guī)定，應(yīng)制定產(chǎn)品和組件的滅菌前生物負(fù)載監(jiān)測計劃，以支持參數(shù)放行。應(yīng)對每批進(jìn)行生物負(fù)載監(jiān)測。滅菌前灌裝單元的取樣位置應(yīng)基于最差條件，并具有批次代表性。在生物負(fù)載檢測過程中發(fā)現(xiàn)的任何微生物都應(yīng)進(jìn)行鑒別，以確認(rèn)它們不是對滅菌工藝可能更具抵抗力的產(chǎn)孢子微生物。
企業(yè)應(yīng)根據(jù)待滅菌的批次或亞批考慮生物負(fù)載。
應(yīng)特別考慮取樣、滅菌和檢測之間的時間。
任何替代方法都應(yīng)完全證明合理性，并應(yīng)考慮：
所涉及的物料，包括包材；
不同亞批中生物負(fù)載的均勻性；
微生物的存在；
取樣和滅菌之間的時間。
拓展閱讀：
目前國內(nèi)無菌附錄無參數(shù)放行相關(guān)內(nèi)容，可供參考的內(nèi)容包括：
PIC/S GMP Annex 17 Real Time Release Testing and Parametric Release - 2023/08/25
PIC/S PI 005-3 GUIDANCE ON PARAMETRIC RELEASE - 2007/09/25
EU GMP Annex 17: Real Time Release Testing and Parametric Release - 2018/06/26
EMA Guideline on real-time release testing - 2012/03/29
FDA Guidance for Industry Submission of Documentation in Applications for Parametric Release of Human and Veterinary Drug Products Terminally Sterilized by Moist Heat Processes - 2010/02
FDA CPG Sec. 490.200 Parametric Release – Parenteral Drug Products Terminally Sterilized by Moist Heat – 2012/07/16
PDA TR 30 Parametric Release of Pharmaceuticals and Medical Device Products Terminally Sterilized by Moist Heat – 2012/05
中國醫(yī)藥質(zhì)量管理協(xié)會 團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn) 濕熱滅菌無菌產(chǎn)品參數(shù)放行要求 – 2020/07/01
更新問答
1. What is the maximum acceptable bioburden level? H+V May 2013 生物負(fù)載的最大可接受水平是多少？
回答：
2019年1月更新：本問答已被Guideline on the sterilisation of the medicinal product, active substance, excipient and primary container取代，請參考該指南。
生物負(fù)載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)不超過10 CFU/100ml，與上述指南保持一致。
在安裝了預(yù)過濾器的情況下，除非另有正當(dāng)理由，原則上可以在第一次過濾前達(dá)到10 CFU/100 ml的生物負(fù)載限度，并且這從GMP的角度是強烈建議的。兩個連續(xù)的除菌過濾器的能力強并不能用于證明更高的生物負(fù)載限度是合理的。
然而，當(dāng)提交了適當(dāng)?shù)睦碛桑ㄉ婕鞍l(fā)酵或其他生物或植物成分的工藝，眼科制劑使用純化水等）時，預(yù)過濾前高于10 CFU/100 ml的生物負(fù)載限度可能是可以接受的。在這種情況下，應(yīng)證明第一個過濾器有能力在最后一次過濾前控制生物負(fù)載不超過10 CFU/100ml。
變化說明：
僅參考的指南版本變化，生物負(fù)載限度均為10 CFU/100 ml，其他說明無變化。
已刪除問答
1. How should the integrity of sterilising filters be verified? H+V June 2007
如何確認(rèn)除菌過濾器的完整性？
說明：原問答僅提及使用前和使用后的完整性測試，而2022版附錄1對過濾器完整性測試提出了新的要求，如PUPSIT，詳情可參考附錄1最新內(nèi)容。
2. What are the key changes in the 2008 revision of annex 1 of the EU GMP? H+V January 2010
EU GMP附錄1 2008版有什么主要變化？
說明：2022版正式版已發(fā)布。
3. The new revision to the annex includes a number of revised requirements. What steps are being taken by EU authorities to assure the consistent interpretation of the requirements of the revised annex by EU GMP inspectors during inspections? H+V January 2010
新的修訂稿有很多修訂要求，歐盟將采取什么措施，以確保歐盟GMP檢查員在檢查過程中對這些要求解釋的一致性？
說明：原問答引用了PIC/S發(fā)布的文件：PI 032-2 Technical Interpretation of Revised Annex 1 to PIC/S GMP Guide - 2010/01/08，PIC/S官網(wǎng)現(xiàn)已撤銷。
4. For an aseptically produced product, where should bioburden monitoring take place? H+V May 2013
對于無菌生產(chǎn)產(chǎn)品，應(yīng)在哪里進(jìn)行生物負(fù)載監(jiān)測？
說明：2022版附錄1 8.93條對該問題進(jìn)行了解答：8.93 生物負(fù)載樣品應(yīng)取自待灌裝/分裝產(chǎn)品，并在最終除菌過濾前即時取樣。如果使用冗余過濾裝置，應(yīng)在第一個過濾器之前進(jìn)行取樣。取樣系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過設(shè)計不引入污染。
5. Do I need to follow the requirements of the updated ISO 14644 part 1 standard?
是否需要遵循ISO 14644 第1部分更新后的要求？
說明：2022版附錄1 4.25條指出，潔凈室和潔凈空氣設(shè)備的確認(rèn)可參考ISO 14644系列標(biāo)準(zhǔn)，8.28條指出，對于潔凈室的分級，采樣點的最小數(shù)量及其位置可參見ISO 14644第1部分。
未變化的問答
1. What are the sampling requirements for sterility testing when a finished product batch of a terminally sterilised medicinal product is made up of more than one steriliser load? H+V October 2008
當(dāng)一批最終滅菌產(chǎn)品有多個滅菌裝載時，成品無菌檢驗取樣的要求是什么？
2. Water for injection by reverse osmosis
反滲透法制備的注射用水（WFI）
京公網(wǎng)安備11010802046783號
