1、測(cè)試方法
本測(cè)試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈室(區(qū))的潔凈度。
儀器
1.培養(yǎng)皿：一般采用φ90 mmX15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿。
2.培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)或沙氏培養(yǎng)基(SDA)或用戶認(rèn)可并經(jīng)驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。
3.恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。
4.高壓蒸汽滅菌器。
測(cè)試步驟
1.測(cè)試前培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。
2.將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點(diǎn)布置圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。
3.靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為不大于4h。
4.全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
5.采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基(SDA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。
6.每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。
菌落計(jì)數(shù)
1.用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
2.若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
注意事項(xiàng)
1.測(cè)試用具要作滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。
2.采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。
3.對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
4.由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落,并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5.采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
2、 測(cè)試規(guī)則
測(cè)試條件
在測(cè)試之前,要對(duì)潔凈室(區(qū))相關(guān)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測(cè)試，這類測(cè)試將會(huì)提供測(cè)試沉降菌的環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測(cè)試或可包括：
a)溫度和相對(duì)濕度的測(cè)試。潔凈室(區(qū))的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)(無特殊要求時(shí)，溫度在18℃~26℃，相對(duì)濕度在45%~65%為宜)，同時(shí)應(yīng)滿足測(cè)試儀器的使用范圍；
b)室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測(cè)試，或壓差的測(cè)試；
c)高效過濾器的泄漏測(cè)試。
測(cè)試狀態(tài)
靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測(cè)試。
靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。
沉降菌測(cè)試前，被測(cè)潔凈室(區(qū))由使用者決定是否需要預(yù)先消毒。
測(cè)試報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測(cè)試人員數(shù)。
測(cè)試時(shí)間
1.在空態(tài)或靜態(tài)a測(cè)試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室(區(qū))而言，測(cè)試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始。對(duì)非單向流潔凈室(區(qū))，測(cè)試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30 min 后開始。在靜態(tài)b測(cè)試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室(區(qū))，測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過10min自凈后開始；對(duì)非單向流潔凈室(區(qū))，測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過20min自凈后開始。
2.在動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開始的時(shí)間以及測(cè)試時(shí)間。
沉降菌菌落數(shù)計(jì)算
1.采樣點(diǎn)數(shù)量及其布置
（1）最少采樣點(diǎn)數(shù)目
沉降菌測(cè)試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目可參照GB/T 16292--2010。
（2）采樣點(diǎn)的位置
沉降菌的采樣點(diǎn)位置可參照GB/T 16292-2010。
a.工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)；
b.可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。
采樣點(diǎn)布置的規(guī)則見附錄A。
2.最少培養(yǎng)皿數(shù)
在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表1。
潔凈度級(jí)別 最少培養(yǎng)皿數(shù)（φ90mm）
|
潔凈度級(jí)別 |
最少培養(yǎng)皿數(shù)（φ90mm） |
|
100 |
14 |
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10 000 |
2 |
|
100 000 |
2 |
|
300 000 |
2 |
采樣次數(shù)
每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。
采樣注意事項(xiàng)
1.對(duì)于單向流潔凈室(區(qū))或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室(區(qū))，采樣口向上。
2.布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。
3.采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)。
4.應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。
5.培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿(TSA或SDA)一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長(zhǎng)。
記錄
測(cè)試報(bào)告應(yīng)包含以下內(nèi)容:
1.測(cè)試者的名稱和地址,測(cè)試日期；
2.測(cè)試依據(jù)；
3.被測(cè)潔凈室(區(qū))的平面位置(必要時(shí)標(biāo)注相鄰區(qū)域的平面位置)；
4.有關(guān)測(cè)試儀器及其測(cè)試方法的描述：包括測(cè)試環(huán)境條件，采樣點(diǎn)數(shù)目以及布置圖，測(cè)試次數(shù)，或可能存在的測(cè)試方法的變更，測(cè)試儀器的檢定證書等；若為動(dòng)態(tài)測(cè)試，則還應(yīng)記錄現(xiàn)場(chǎng)操作。
5.人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場(chǎng)設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)量及位置等。
6.測(cè)試結(jié)果，包括所有統(tǒng)計(jì)計(jì)算資料。
結(jié)果計(jì)算
1.用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
2.每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)的計(jì)算,見式(1)。
結(jié)果評(píng)定
1.每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。
2.在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為符合。
日常監(jiān)控
對(duì)于沉降菌的監(jiān)控，宜設(shè)定糾偏限度和警戒限度，以保證潔凈室(區(qū))的微生物濃度受到控制。應(yīng)定期檢測(cè)以檢查微生物負(fù)荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。
對(duì)于沉降菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應(yīng)考慮修改，在評(píng)估以下情況后,也應(yīng)確定其他項(xiàng)目的檢測(cè)頻次：
1.連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；
2.停工時(shí)間比預(yù)計(jì)延長(zhǎng)；
3.關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；
4.在生產(chǎn)期間,空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修；
5.日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；
6.消毒規(guī)程的改變；
7.引起生物污染的事故等；
8.當(dāng)生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時(shí)；
9.當(dāng)潔凈室(區(qū))結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)時(shí)。
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