1. 介紹
影響因素和降解研究，對于分析人員來說并不陌生，但這兩者間到底有什么異同，許多實(shí)驗(yàn)員還分不清楚，本文將對兩者的目的和實(shí)驗(yàn)方式進(jìn)行闡述，更詳細(xì)透徹的理解兩者。
2. 兩者目的
影響因素為中國特有，即主要目的用于產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究，按照中國藥典，其目的是探討藥物的固有穩(wěn)定性、了解影響其穩(wěn)定性的因素及可能的降解研究途徑與降解產(chǎn)物，為制劑生產(chǎn)工藝、包裝、貯存條件和建立降解產(chǎn)物分析方法提供科學(xué)依據(jù)。我們可以將其理解為加速穩(wěn)定性研究的加強(qiáng)版，所以影響因素有固定的樣品放置條件，并不強(qiáng)求一定對樣品造成破壞，更側(cè)重于為制劑生產(chǎn)工藝，包裝和貯存做參考，這與降解研究是有本質(zhì)區(qū)別的。
而降解研究則各個國家均有要求，其主要目的是使樣品降解到一定程度，一般為5%-15%之間，用檢測方法測定降解樣品，證明分析方法具有穩(wěn)定性指示功能，即可以對穩(wěn)定性期間的樣品進(jìn)行有效分析檢測，所降解研究應(yīng)盡肯能使樣品發(fā)生降解，其更側(cè)重于指導(dǎo)具有穩(wěn)定性指示功能方法的開發(fā)。降解研究需要根據(jù)樣品的性質(zhì)對放置條件進(jìn)行調(diào)整，以使獲得合適樣品進(jìn)行分析。
3.研究過程
參照中國藥典9001<原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則>，影響因素試驗(yàn)包含了高溫、高濕和強(qiáng)光照射試驗(yàn)，必要時可設(shè)計(jì)酸、堿、氧化以及其他條件的試驗(yàn)。
高溫試驗(yàn)一般要比加速試驗(yàn)高10℃以上，通常情況下按照60℃設(shè)計(jì)，分別放置0天，5天，10天和30天，進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)，含量等關(guān)鍵項(xiàng)目的檢測。高濕試驗(yàn)放在25℃，相對濕度為90%±5%條件（硝酸鉀飽和溶液）下放置5天和10天，如果吸濕增重超過5%，應(yīng)在相對濕度為75%±5%條件（氯化鈉飽和溶液）下重新研究。強(qiáng)光照射試驗(yàn)應(yīng)使光源總照度不低于1.2×106lux ? hr，近紫外燈能量不低于200W? hr/m2。
降解研究在中國藥典9101<分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則>和ICH Q2中的專屬性部分進(jìn)行了闡述，但并沒有規(guī)定降解的條件，所以需要參照降解的程度5-15%以及藥物本身的性質(zhì)進(jìn)行摸索，如果影響因素的條件可以滿足降解程度，可以直接引用，需要注意的是降解研究需要考察純度，而影響因素不要求，所以在影響因素研究的時候，需要使用PDA檢測器檢測以獲得純度。
如果影響因素的結(jié)果并不能適用，則需要對條件進(jìn)行調(diào)整，因?yàn)橛绊懸蛩貤l件相對降解研究來說較為溫度，高溫可以改成水浴或者烘箱105℃，放置不同的時間點(diǎn)考察，以獲得合適的條件。雖然強(qiáng)制降解的條件比較劇烈，但某些藥物并不能在所有條件下都會發(fā)生降解，如果條件已經(jīng)非常劇烈了，例如105℃放置10天，藥物并不發(fā)生降解，說明藥物在該條件下非常穩(wěn)定，藥物也不會在如此劇烈條件下暴露，所以不建議繼續(xù)進(jìn)行研究。
強(qiáng)光照射試驗(yàn)，應(yīng)需要制備強(qiáng)光照射的參照樣品，即用鋁箔包裹的樣品和暴露的樣品同時放置，避免因?yàn)閺?qiáng)光導(dǎo)致的溫度使樣品發(fā)生降解，因此盡量放置在可控溫的光照設(shè)備中。如果強(qiáng)光降解條件過于劇烈，可以適當(dāng)降低總照度和紫外能量，以避免發(fā)生二次降解，也可以同時放置內(nèi)包裝，甚至外包裝進(jìn)行研究。
高溫和強(qiáng)光照射試驗(yàn)可以使用固體或液體（可以用水或者其他適宜的溶劑）進(jìn)行研究，可根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行選擇或都進(jìn)行。
酸、堿和氧化試驗(yàn)通常使用鹽酸溶液，氫氧化鈉溶液以及過氧化氫溶液進(jìn)行降解，酸堿可以使用1N濃度的溶液，氧化可以使用3%濃度進(jìn)行不同時間的室溫放置，如1小時，4小時，8小時和24小時，根據(jù)初步研究的結(jié)果，進(jìn)行調(diào)整，降解過于劇烈可以降低濃度或者時間，如果未降解可以，增加濃度或者加熱加速降解，盡量使降解的時間超過10分鐘以上，時間過短不利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)，即使酸堿降解時間到達(dá)后要進(jìn)行中和，中和后的pH值也有可能不是藥物的最穩(wěn)定條件，所以應(yīng)盡快完成進(jìn)樣分析，而氧化條件因?yàn)榻到獠荒鼙唤K止，只能通過溶劑的稀釋降低過氧化氫的濃度，所以更需要盡快進(jìn)樣檢測。
酸、堿和氧化降解條件下，有的色譜條件下會出現(xiàn)氯離子和過氧化氫峰，需要制備相應(yīng)的空白溶液進(jìn)行扣除。
如果為制劑降解研究，還需要考察輔料的降解，以識別輔料的降解峰位置，仿制藥申報還需要對參比制劑進(jìn)行考察，尤其是處方存在差異時，可能與自研產(chǎn)品的雜質(zhì)譜存在差異，需要進(jìn)行著重研究分析，以應(yīng)對注冊申報。
4. 總結(jié)
影響因素作為加速穩(wěn)定性研究的加強(qiáng)版，也應(yīng)盡可能的滿足擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如條件劇烈也可適當(dāng)調(diào)整。降解研究需要保證主峰純度，并與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，降解雜質(zhì)峰的分離度也盡可能滿足大于1.5的要求，如確實(shí)存在難度，也可適當(dāng)降低標(biāo)準(zhǔn)，但要保證雜質(zhì)的結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度，降解研究還需要著重關(guān)注物料的平衡問題，因?yàn)樵S多藥物帶有結(jié)晶水以及酸基，堿基以及一些離子在降解過程中，以上物質(zhì)也會在藥物分子上發(fā)生脫落，但檢測時僅能檢測到有機(jī)物質(zhì)，所以在計(jì)算物料守恒的時候需要注意該問題，尤其是占比較大時。本文為筆者的經(jīng)驗(yàn)之談，如有不當(dāng)之處，還請各位同仁予以指正。
參考文獻(xiàn)
1. 中國藥典9101<分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則>
2. ICH Q2分析方法驗(yàn)證知道原則
3. 中國藥典9001<原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則>
4. 馬駿威等，強(qiáng)制降解試驗(yàn)在藥物研發(fā)中的應(yīng)用，中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué).2020(14)
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