有關(guān)物質(zhì)系藥品中除主成分以外的雜質(zhì)，它可能是原料藥合成過(guò)程中帶入的原料、中間體、試劑、分解物、副產(chǎn)物、聚合體、異構(gòu)體，以及不同晶體、旋光異構(gòu)的物質(zhì)，也可能是制劑生產(chǎn)過(guò)程或在貯藏、運(yùn)輸、使用過(guò)程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物等。由于有關(guān)物質(zhì)的含量較少，所以選擇專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好的檢測(cè)方法至關(guān)重要。目前常用的方法有HPLC法和TLC法，后法已有討論。本文主要闡述HPLC法的建立過(guò)程中供試品溶液濃度的確定。
供試品溶液濃度的確定也非常重要。雖然濃度越高越能反映被測(cè)物中雜質(zhì)存在的情況，但若設(shè)定過(guò)高，會(huì)產(chǎn)生主峰嚴(yán)重拖尾、裂峰、柱超載和檢測(cè)器超載等情況；若設(shè)定過(guò)低，則靈敏度不夠，無(wú)法檢測(cè)雜質(zhì)及其含量變化。
最低檢出濃度的測(cè)定可分為信噪比法和直接評(píng)價(jià)法兩種。后法是目前較為科學(xué)的做法，即將儀器的靈敏度調(diào)至較適宜的值(僅對(duì)靈敏度可調(diào)節(jié)的儀器而言，目前市場(chǎng)上主流品牌的液相色譜儀均已設(shè)定了一個(gè)恒定、較為靈敏的值)，然后將被測(cè)物溶液不斷稀釋后進(jìn)樣測(cè)定，直至被測(cè)物峰面積無(wú)法檢出為止，此時(shí)的濃度即為最低檢出濃度。
最大進(jìn)樣量則是采用不斷增加被測(cè)物溶液濃度，直至峰嚴(yán)重拖尾、裂峰、柱超載和檢測(cè)器超載等情況出現(xiàn)。
根據(jù)最低檢出濃度，采用“上推法”來(lái)確定供試品溶液濃度：如一般設(shè)定雜質(zhì)總量小于1.0％對(duì)照液，對(duì)照溶液的濃度至少應(yīng)為最低檢出濃度的20～50倍，供試品溶液濃度則應(yīng)是最低檢出濃度的2000～5000倍。
同時(shí)還應(yīng)考慮儀器、色譜柱等因素對(duì)最低檢出濃度和最大進(jìn)樣濃度的影響(即耐用性因素)，所以供試品溶液的濃度應(yīng)在保證小于最大進(jìn)樣量的情況下，適當(dāng)設(shè)定得高些，以保證該濃度在任何試驗(yàn)條件下，均有足夠的檢測(cè)靈敏度。
表1為最低檢出濃度、最大進(jìn)樣量、供試品溶液和對(duì)照溶液間的比例關(guān)系(進(jìn)樣量10μl，規(guī)定雜質(zhì)限度1.0％)。
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