1.什么是逆向工程
自從我國從2015年開展仿制藥一致性評價以來，對仿制藥與參比制劑的處方一致性有一定要求。為了達(dá)到藥學(xué)、臨床效果上的一致性，需要全面了解參比制劑的屬性，以幫助仿制藥開發(fā)。逆向工程是指對目標(biāo)原研制劑進(jìn)行逆向分析，從而確定原研制劑原料藥晶型、處方、含量及制備工藝等關(guān)鍵質(zhì)量屬性，從而指導(dǎo)仿制藥開發(fā)，得到質(zhì)量和療效與原研制劑一致產(chǎn)品的方法。逆向工程的應(yīng)用有助于降低制劑開發(fā)的難度、減少處方開發(fā)的工作量、縮短研發(fā)的時間，提高仿制藥研發(fā)的成功率。
使用逆向工程技術(shù)，可以方便地確定目標(biāo)制劑產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，如處方中活性藥物成分（API）晶型、輔料的定量組成、處方的制備工藝等。逆向工程可以從文獻(xiàn)調(diào)研和物理化學(xué)方法兩個方面來進(jìn)行。
2.原研制劑文獻(xiàn)調(diào)研
文獻(xiàn)調(diào)研主要關(guān)注的是原研制劑的處方成分、單位重量、外觀、原料藥晶型、包衣材料、包裝材料、以及其臨床和藥代動力學(xué)參數(shù)。可以通過查詢相關(guān)的專利、專業(yè)的數(shù)據(jù)庫、藥監(jiān)局官網(wǎng)等調(diào)研以上相關(guān)參數(shù)。進(jìn)行調(diào)研需關(guān)注的主要文件有產(chǎn)品說明書、公開的評審信息、專利等。這些文件一般都可以在各上市國家的藥監(jiān)局網(wǎng)站查到，如FDA、EMA、PMDA以及俄羅斯、阿根廷、土耳其等國家的藥監(jiān)局網(wǎng)站；專利可以在FDA Orange Book、歐洲專利局、Google專利搜索、中國專利局、Soopat專利等搜索查詢。
美國FDA公開的信息，比如說明書label和評審綜述等，可獲得信息包括處方輔料組成、體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)、溶出方法、藥物相互作用、代謝途徑等。歐盟EMA評審報告，可獲得處方輔料組成、制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性數(shù)據(jù)等。日本PMDA公布的藥品說明書中一般會提供原料藥理化性質(zhì)，如：溶解性、引濕性、pKa、熔點、穩(wěn)定性等相關(guān)信息；同時對處方輔料組成，制劑形狀和重量、制劑穩(wěn)定性、溶出方法、體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)等一般也有比較詳細(xì)的描述。
NMPA關(guān)于奧拉帕利原料性質(zhì)的描述
3.物理化學(xué)方法
從查得的文獻(xiàn)中可以獲得大量的原研制劑信息，但是也有很多具體的信息，例如處方比例、工藝參數(shù)等描述并不準(zhǔn)確，因此需要通過物理化學(xué)的方法對參比制劑進(jìn)行分析，以獲得更加詳細(xì)的參數(shù)。使用逆向工程技術(shù)，可以方便地確定原研制劑中活性藥物成分信息、處方中輔料的定量組成以及處方的制備工藝。
3.1原料藥信息
雖然目前的法規(guī)并未要求仿制藥需與參比制劑的晶型一致，但是為了保證溶出度與穩(wěn)定性的相似，仿制藥采用的原料藥應(yīng)盡量與原研制劑原料藥一致。除了通過文獻(xiàn)專利獲得外，在實驗中可以利用多種方式確定晶型與粒徑。
晶型確定：可以使用X-射線粉末衍射（XRPD）、傅里葉變換紅外光譜（FTIR）、近紅外光譜（NIR）、拉曼光譜、差示掃描量熱法（DSC）、熱重分析（TGA）等分析技術(shù)對原料藥的固態(tài)性質(zhì)進(jìn)行表征。XRPD是目前鑒別晶型的最主要的方法（原料藥含量在5%以上比較有效）。在固體混合物中，每一種晶型都產(chǎn)生相互獨立的XRPD譜，因此混合物的XRPD譜就是各粉末衍射圖譜的累加。如果藥物與賦形劑的相互作用結(jié)果產(chǎn)生一種新的晶型或無定型，也會在混合物的XRPD譜中產(chǎn)生新峰或者駝峰。通過對比原料藥、原研制劑和自制劑在相同條件下的XRD圖譜，幫助確定原研制劑原料藥的晶型結(jié)構(gòu)。
粒徑分布：原料藥的粒徑分布直接影響生物利用度和溶出速率，了解原研制劑的原料藥粒度分布，有助于保證制劑的生物等效性。但是由于制劑中存在的其余輔料，所以基于光遮蔽和激光散射的常規(guī)化技術(shù)不適用測定原料藥粒度分布，目前唯一可行的技術(shù)就是顯微鏡技術(shù)。例如偏振光顯微鏡，在偏振光下，晶體藥物呈現(xiàn)雙折射模式，而許多輔料是非晶體的，因此不呈現(xiàn)雙折射模式，因此根據(jù)顆粒形狀和雙折射等特征來區(qū)分原料藥和輔料，從而大概了解原料藥的粒度范圍。
3.2輔料種類與用量
在大多數(shù)情況下，輔料的用量無法通過文獻(xiàn)獲得，采用逆向工程對原研制劑中的關(guān)鍵輔料進(jìn)行解析從而確定大概用量。常用的輔料含量剖析方法有元素分析法、色譜光譜法、質(zhì)量法等。質(zhì)量法適于定量用量較大的不溶性輔料，如微晶纖維素、丸芯。元素分析法適用與含金屬元素的輔料，如硬脂酸鎂、磷酸氫鈣、纖維素鈉、硬脂富馬酸鈉、羧甲淀粉鈉等。光譜、色譜法包括HPLC、GC-MS、LC-MS和UV等手段，可以測定多種輔料，如乳糖、蔗糖、羥丙纖維素等可采用HPLC法測定。
總結(jié)輔料含量測定常用方法如下：
3.3工藝
對與原研制劑的工藝，我們可以通過多個方面進(jìn)行判斷。①原料藥的理化特性：濕熱敏感的藥物一般不適用濕法制粒工藝，低劑量的藥物制劑一般會用使用混粉直壓。②顯微鏡直接觀察片劑的切面，一般混粉直壓的切面要細(xì)一些，而干法制?；驖穹ㄖ屏５钠瑒┣忻嬉植谝恍?，若顆粒較圓整，則采用濕法制粒的可能性較大。③肉眼或顯微鏡觀察藥片在介質(zhì)中的崩解，混粉直壓一般產(chǎn)生單個顆粒而干法制?；驖穹ㄖ屏９に囈话惝a(chǎn)生團(tuán)聚顆粒。④處方中輔料，干法制粒以及濕法制粒一般需要加入粘合劑，而一些混粉直壓處方中不含粘合劑，所以當(dāng)處方中不含粘合劑時，很可能使用了混粉直壓工藝。
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