1. 背景介紹
方法驗(yàn)證的目的是驗(yàn)證方法可以符合預(yù)期使用的目的。溶出度方法驗(yàn)證，即驗(yàn)證該溶出度方法可以準(zhǔn)確有效的對(duì)固體制劑如片劑、膠囊劑、緩釋制劑或者透皮貼劑等溶出情況進(jìn)行檢測和定量。按照ICH Q2（R1）分析方法論證：正文和方法學(xué)和中國藥典9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，溶出度方法驗(yàn)證需要對(duì)以下指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證：專屬性，線性，范圍、準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度）、定量限（緩釋制劑和控釋制劑可能使用）、耐用性和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。以上驗(yàn)證指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)均滿足要求則方法驗(yàn)證通過，也就是符合預(yù)期使用的目的。那標(biāo)準(zhǔn)如何設(shè)定？本文將對(duì)各指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)制定進(jìn)行討論，本文內(nèi)容為筆者經(jīng)驗(yàn)之談，如有不正確的地方，還請(qǐng)各位同仁予以指正。
2. 溶出度方法驗(yàn)證指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的制定
2.1. 耐用性
耐用性的研究更有助于判斷對(duì)檢測結(jié)果存在影響的關(guān)鍵條件，在方法開發(fā)中應(yīng)盡可能多的積累相關(guān)的知識(shí)。
溶出度方法的耐用性可以分為兩個(gè)部分，分別是溶出儀和HPLC。溶出儀可能需要研究的參數(shù)包括轉(zhuǎn)速，溶出介質(zhì)的體積，組成以及pH，溫度，取樣時(shí)間，取樣方式等。HPLC可能需要研究的參數(shù)包括，流速，柱溫，流動(dòng)相組成以及pH等條件。
其中對(duì)于取樣方式需要進(jìn)行強(qiáng)調(diào)，因?yàn)樽詣?dòng)取樣涉及到管路的潤洗，還可能存在在線過濾，所以與手動(dòng)取樣還是存在較大的區(qū)別，因此一樣要進(jìn)行研究，如果結(jié)果不一致，應(yīng)當(dāng)在文件中進(jìn)行規(guī)定使用哪種方式進(jìn)行取樣。取樣時(shí)還涉及到樣品溶液的過濾，對(duì)不同類型的濾膜進(jìn)行篩選，已確定合適的濾膜沒有明顯的吸附，尤其對(duì)于規(guī)格較小的產(chǎn)品。與正常樣品相比較，耐用性樣品的結(jié)果的差異應(yīng)不超過2%。
溶出度樣品的檢測可能使用HPLC或者UV，因?yàn)閁V相對(duì)較簡單，此處不再進(jìn)行闡述。對(duì)于HPLC，因?yàn)槿艹龆葍H含有主成分，所以檢測溶出度HPLC方法的系統(tǒng)適用性相對(duì)較為簡單，可直接參照含量測定，拖尾因子應(yīng)在0.8-1.8之間，以限制拖尾或者前延的情況對(duì)定量造成影響。
耐用性還應(yīng)進(jìn)行溶液穩(wěn)定性研究，因?yàn)槠腆w制劑存在多規(guī)格的情況，所以需要對(duì)高低濃度的對(duì)照溶液和樣品溶液分別進(jìn)行研究，與初始的峰面積差異應(yīng)不超過2%。因?yàn)槿艹龆仍囼?yàn)量非常巨大，強(qiáng)烈建議把對(duì)照溶液的穩(wěn)定性時(shí)間做的長一些，每次不用再重新制備對(duì)照溶液，還能節(jié)省很多對(duì)照品。
2.2. 過濾研究
固體制劑在溶出介質(zhì)釋放過程中，可能會(huì)存在部分沒有完全溶解的原料藥顆粒，取樣后會(huì)繼續(xù)溶解，導(dǎo)致該樣品的結(jié)果偏高，為了避免該問題的發(fā)生，所以應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行過濾處理，建議采用在線過濾的方式，相較于在線過濾，離線過濾具有滯后性，如果未能及時(shí)進(jìn)行過濾，仍可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。因?yàn)樵诓煌瑫r(shí)間從同一溶出杯中取出的樣品，溶出度結(jié)果可能存在微量的差異，所以過濾研究的時(shí)候，我們應(yīng)盡可能一次性的多取出一些樣品，例如50ml或者100ml，混勻后，用適合的濾膜進(jìn)行過濾，如果濾膜存在較強(qiáng)的吸附，尤其是低規(guī)格的制劑，此時(shí)則應(yīng)考察不同材質(zhì)的濾膜，以尋找到適宜的濾膜。
2.3. 專屬性
專屬性考察稀釋劑和輔料溶液的干擾，要求溶出介質(zhì)，輔料溶液不存在干擾。膠囊應(yīng)注意增加膠囊殼的研究，腸溶制劑應(yīng)當(dāng)進(jìn)行酸堿兩個(gè)階段輔料溶液的干擾情況。
2.4. 定量限
定量限為當(dāng)下方法能夠滿足定量的最低限度，因?yàn)榫忈屩苿┖涂蒯屩苿┑牡谝粋€(gè)時(shí)間的結(jié)果通常比較低，所以該時(shí)間點(diǎn)的溶出度可以被準(zhǔn)備定量，建議對(duì)方法的定量限進(jìn)行研究，尤其是在規(guī)格較小的情況下。定量限要求信噪比不低于10。定量限并不是所有類型的固體制劑都需要研究，僅在初始時(shí)間點(diǎn)溶出度較低的情況下，為了證明方法具有足夠的靈敏度，可以準(zhǔn)確定量時(shí)進(jìn)行考察。
2.5. 線性與范圍
溶出度的研究范圍應(yīng)從定量限或者最小規(guī)格的第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出度至最大規(guī)格的最后一個(gè)時(shí)間點(diǎn)溶出度+30%或者更高，要求相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.995，y軸截距不大于100%濃度水平峰面積的2%。如果不同規(guī)格之間對(duì)照溶液濃度不同，需要選擇對(duì)應(yīng)的100%濃度水平峰面積計(jì)算y軸偏差%。線性貯備溶液制備溶液時(shí)，可以添加適量的有機(jī)溶劑，但要保證最終的線性溶液中有機(jī)溶劑的占比不超過5%。
2.6. 精密度
對(duì)于普通固體制劑之間，不同溶出杯之間的溶出度差異相對(duì)較小，可以評(píng)估6杯溶出度的RSD%，但對(duì)于緩控釋制劑來說，不同杯之間結(jié)果相差較大，建議對(duì)同一杯中最后時(shí)間點(diǎn)取6份，測定RSD%，應(yīng)不大于2.0%。中間精密度應(yīng)當(dāng)考察不同的人員，在不同時(shí)間，不同溶出儀（最好是不同品牌）以及不同HPLC進(jìn)行考察，要求可以考察f2，不小于50，如果為單點(diǎn)，重復(fù)性與中間精密度的差異應(yīng)不大于5%。
2.7. 準(zhǔn)確度
溶出度的準(zhǔn)確度研究，可以選擇在溶出儀或者容量瓶超聲中進(jìn)行研究。最終的目的是保證在有輔料存在的情況下，主成分可以完全溶解到固定量的溶出介質(zhì)中，即主成分可以被準(zhǔn)確的回收回來。準(zhǔn)確度研究要分為低，中和高3個(gè)水平，以保證溶出度在各水平測得結(jié)果的有效性。低水平應(yīng)當(dāng)?shù)陀诘谝粋€(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出量，高水平應(yīng)高于最終時(shí)間點(diǎn)的溶出量。對(duì)于存在多種介質(zhì)的情況，應(yīng)當(dāng)對(duì)不同介質(zhì)分別進(jìn)行準(zhǔn)確度研究。準(zhǔn)確度應(yīng)在95-105%之間。如果部分輔料存在抱團(tuán)現(xiàn)象，可以加入一定量的有機(jī)溶劑使其分散，但應(yīng)保證有機(jī)溶劑在最終溶出介質(zhì)中占比不超過5%。
3. 結(jié)論
從CDE審評(píng)尺度來看，不僅要進(jìn)行主介質(zhì)的溶出度方法驗(yàn)證，對(duì)于不同pH值溶出曲線的方法也要進(jìn)行適當(dāng)?shù)尿?yàn)證，根據(jù)筆者的經(jīng)驗(yàn)不同pH值溶出方法的驗(yàn)證可以適當(dāng)縮減，例如可以不再進(jìn)行耐用性的研究，而對(duì)于國外市場并不要求不同pH值溶出方法的驗(yàn)證。溶出度方法的驗(yàn)證相對(duì)來說，較為簡單，難點(diǎn)主要在于輔料對(duì)準(zhǔn)確度的影響，低規(guī)格樣品的濾膜的篩選，在方法開發(fā)的時(shí)候，應(yīng)盡可能對(duì)這兩方面進(jìn)行著重的研究。在不同pH值溶出曲線中可能還會(huì)遇到以下情形：樣品再某種介質(zhì)中可能不穩(wěn)定，可以考慮對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行折算的方式進(jìn)行溶出度考察。溶出樣品取樣后從37℃放到室溫會(huì)存在析出，可以將HPLC樣品倉控制為37℃，取樣后盡快轉(zhuǎn)移至樣品倉中。最后，望本文對(duì)您有所幫助。
參考文獻(xiàn)：
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京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
