摘 要: 嚙齒類動(dòng)物致癌性試驗(yàn)是新藥研發(fā)中非臨床安全性評(píng)價(jià)的重要組成部分。致癌性試驗(yàn)周期較長、數(shù)據(jù)量大，其統(tǒng) 計(jì)學(xué)方法選用的合理性、科學(xué)性將可能影響試驗(yàn)結(jié)果的結(jié)論。首先介紹了目前致癌性試驗(yàn)常用的生存分析和腫瘤發(fā)生率統(tǒng)計(jì)方法; 其次，匯總了生存分析和腫瘤發(fā)生率統(tǒng)計(jì)方法的選用情況; 最后，通過比較申報(bào)方、美國食品藥品監(jiān)督管理局審評(píng)方和美國國家毒理學(xué)項(xiàng)目中心在統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選用的差異，分析和討論了這些差異的來源和影響，并總結(jié)了致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析設(shè)計(jì)思路。希望通過對(duì)以上內(nèi)容的匯總和分析，能夠?yàn)樾滤幏桥R床致癌性試驗(yàn)提供參考。
致癌性試驗(yàn)的目的是在動(dòng)物體內(nèi)中識(shí)別某種物質(zhì)的潛在致癌作用，從而評(píng)價(jià)人體中的相關(guān)風(fēng) 險(xiǎn)，藥物致癌性試驗(yàn)也是藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)的重要組成部分。相較于一般毒性試驗(yàn)而言，致癌性試驗(yàn)周期較長，試驗(yàn)內(nèi)容多，數(shù)據(jù)量大，而對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法的選擇將直接影響試驗(yàn)結(jié)果的結(jié)論。在 1 項(xiàng)致癌性試驗(yàn)中，會(huì)記錄體質(zhì)量變化、攝食量變化、臨床癥狀、生存狀況、大體解剖觀察結(jié) 果、鏡下腫瘤或非腫瘤病變等，而對(duì)以上諸多內(nèi)容 的總結(jié)與統(tǒng)計(jì)中，生存分析和腫瘤發(fā)生率分析是試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果的核心部分。
美國食品藥品監(jiān)督管理 局(FDA)的藥品評(píng)價(jià)與研究中心(CDER)還會(huì)對(duì)申報(bào)上來的致癌性試驗(yàn)生存分析和腫瘤發(fā)生率分析部分進(jìn)行單獨(dú)的統(tǒng)計(jì)學(xué)審評(píng)，可見合理使用統(tǒng)計(jì)分析方法是致癌性試驗(yàn)結(jié)果結(jié)論科學(xué)性的關(guān)鍵保證。 基于此，本文將從致癌性試驗(yàn)各類統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的概念出發(fā)，并通過具有代表性的 FDA 統(tǒng)計(jì)學(xué)審評(píng)報(bào)告和美國國家毒理學(xué)項(xiàng)目中心(NTP)的致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，剖析嚙齒類動(dòng)物致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的使用現(xiàn)狀。
1、 致癌性試驗(yàn)常用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
如前文所述，生存分析和腫瘤發(fā)生率分析是致癌性試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果的核心部分。因此，致癌性試驗(yàn) 常用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法包括生存分析和腫瘤數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法。生存分析模型有 Kaplan-Meier 乘積極限 估計(jì)、壽命表和 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型。Kaplan-Meier 乘積極限估計(jì)(又稱 PL 估計(jì))是致癌性試驗(yàn)中廣泛 使用的生存分析方法，其依據(jù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的每個(gè)個(gè) 體確切的生存狀態(tài)來評(píng)估各時(shí)間點(diǎn)的生存率，根據(jù)該方法繪制的 K-M 曲線圖也常被用來直觀地比較 組間生存情況差異，其常用的數(shù)據(jù)檢驗(yàn)方法有 Log rank 檢驗(yàn)、Wilcoxon 檢驗(yàn)、Tarone 檢驗(yàn)和 Peto 檢驗(yàn)。壽命表方法是歷史悠久的 生存分析方法 ，其采用分時(shí)間段的方式分析生存變化情，也可以用來繪制生存率曲線圖，但在動(dòng)物試驗(yàn)這類可以全 程充分跟蹤生存狀態(tài)的試驗(yàn)中使用率較低，該模型 常用檢驗(yàn)方法為 Gehan-Breslow 檢驗(yàn)。Cox 比例風(fēng) 險(xiǎn)模型(又稱 Cox 回歸)是一種半?yún)?shù)模型，能夠兼 容任何生分布的特點(diǎn)使其被廣泛使用，該模型常用檢驗(yàn)方法是似然比檢驗(yàn)。
在腫瘤數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)上，由于腫瘤的發(fā)生需要物質(zhì)暴露時(shí)間的積累，生存時(shí)間更久的試驗(yàn)動(dòng)物比較早 死亡的動(dòng)物更易罹患腫瘤，所以藥物致癌性試驗(yàn)?zāi)[ 瘤發(fā)生率數(shù)據(jù)的分析必須考慮各組動(dòng)物的生存情 況 ，并 進(jìn) 行 適 當(dāng) 調(diào) 整。 現(xiàn) 行 的 藥 物 致 癌 性 試 驗(yàn) 腫 瘤發(fā)生率統(tǒng)計(jì)分析的指導(dǎo)原則仍是 FDA-CDER 于 2001年發(fā)布的行業(yè)指南草案《長期嚙齒類動(dòng)物藥物 致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的設(shè)計(jì)、分析和解釋》，該指南認(rèn)為采用 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)或 Poly-k 檢驗(yàn)可以較為準(zhǔn) 確地分析腫瘤發(fā)生率。
Peto 分時(shí)檢驗(yàn)需要病理學(xué)家對(duì)腫瘤是否會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物死亡進(jìn)行分析分類，可 將腫瘤分為偶發(fā)性、致死性和不致死(可觀察到)， 然后對(duì)以上 3 類腫瘤分別采用患病率法、死亡率法 和發(fā)生率法進(jìn)行腫瘤數(shù)據(jù)分析。Peto 分時(shí)檢驗(yàn) 理論上能夠很好的調(diào)整生存時(shí)間對(duì)腫瘤發(fā)生的影 響，但實(shí)踐過程中很受病理專家在病理診斷上主觀性的影響，這也導(dǎo)致該方法引起了廣泛爭(zhēng)議，美國毒性病理學(xué)會(huì)(STP)也曾發(fā)文呼吁探索不需要考慮腫瘤是否致死的替代方法。
Poly-k 檢驗(yàn)是不需要考慮腫瘤是否致死性腫瘤發(fā)生率分析方法，其調(diào)整生存對(duì)腫瘤發(fā)生影響的原理是對(duì)未發(fā)生腫瘤卻提前死亡的動(dòng)物個(gè)體進(jìn)行一定的參數(shù)加權(quán)，以得出1 個(gè)該動(dòng)物若能夠生存到試驗(yàn)終點(diǎn)所能罹患腫瘤的期望值，這個(gè)期望值與 k 值呈負(fù)相關(guān)，目前普遍認(rèn)為k=3 是最適合用于嚙齒類動(dòng)物致癌性試驗(yàn)的。
FDA-CDER 發(fā) 布 的 指 南 中 介 紹 了 Bailer-Portierpoly-3 檢驗(yàn)和 Bieler-Williams poly-3 檢驗(yàn)，并認(rèn)為后者能夠更準(zhǔn)確地分析腫瘤發(fā)生率結(jié)果，Bieler-Williams poly-3 檢驗(yàn)也是目前選用 Poly-k 方法的普遍選擇。
上述提到的 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)和 Poly-k 檢驗(yàn)方法都 是近似檢驗(yàn)方法，在各給藥組的腫瘤發(fā)生總數(shù)較少 時(shí)，往往需要使用精確排列法進(jìn)行檢驗(yàn)[5]。選用 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)仍然可以根據(jù)腫瘤與動(dòng)物死亡 的相關(guān)性來選擇相應(yīng)的精確排列檢驗(yàn)，而選用 Poly- k 檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)則只能將發(fā)生總數(shù)較少的腫瘤全部視為偶發(fā)性腫瘤再進(jìn)行精確排列法進(jìn)行檢驗(yàn)。
值得注意的是，來自 FDA 的 Lin 和 Rahman 已 經(jīng)于 2018 年更新了 P 值閾值，F(xiàn)DA-CDER 審評(píng)方已 經(jīng)不再使用 2001 年指南中的閾值。更新的 P 值閾 值主要在于短期致癌性試驗(yàn)的調(diào)整上，短期致癌性 試驗(yàn)?zāi)[瘤發(fā)生率分析顯著性水平從原來的常見腫 瘤 0.01 和罕見腫瘤 0.05 調(diào)整為常見腫瘤和罕見腫 瘤均為 0.05，趨勢(shì)檢驗(yàn)和配對(duì)檢驗(yàn)均為此標(biāo)準(zhǔn)。另 外，長期致癌性試驗(yàn)?zāi)[瘤發(fā)生率分析顯著性水平仍 是在趨勢(shì)檢驗(yàn)下常見腫瘤 0.005 和罕見腫瘤 0.025， 配對(duì)檢驗(yàn)下常見腫瘤 0.01 和罕見腫瘤 0.05。
2、 FDA-CDER 審評(píng)報(bào)告中統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
從 2015 年開始，F(xiàn)DA-CDER 將每年獲批的新藥匯總整理出 1 篇年鑒，并在其官網(wǎng)上將這 1 年獲批 的新藥信息一一羅列出來。從2015年到2022年， 共有 360 種新藥被 FDA-CDER 審批通過，通過對(duì)這 些獲批的新藥進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)有 68 款新藥在公示的 審評(píng)文件中均附有致癌性試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)審評(píng)報(bào)告。 在這 68 篇統(tǒng)計(jì)學(xué)審計(jì)報(bào)告中，共涉及 121 項(xiàng)致癌性 試驗(yàn)，以下內(nèi)容即是根據(jù)這 121 項(xiàng)致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì) 學(xué)審評(píng)報(bào)告的統(tǒng)計(jì)匯總
2.1 申報(bào)方生存分析方法
所有的 121 項(xiàng)試驗(yàn)都使用了 Kaplan-Meier 乘積極限估計(jì)，并出示了K-M生存曲線圖。有23項(xiàng)試驗(yàn)在方法描述中提到其使用了壽命表(life table)，有 14 項(xiàng)試驗(yàn)在方法描述中提到其使用了 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型。在生存數(shù)據(jù)檢驗(yàn)方法的選擇上，有 100 項(xiàng)試驗(yàn)選擇了根據(jù) Kaplan-Meier 乘積極限估計(jì)數(shù)據(jù)的檢驗(yàn)方法，并有 96 項(xiàng)試驗(yàn)選擇了完全根據(jù) Kaplan-Meier 乘積極限估計(jì)數(shù)據(jù)的檢驗(yàn)方法。其中，有 94 項(xiàng)試驗(yàn) 提到了其使用了 Log rank 檢驗(yàn)，并有 46 項(xiàng)試驗(yàn)只使 用了 Log rank 檢驗(yàn)這 1 種試驗(yàn)方法;有 41 項(xiàng)試驗(yàn)提到了其使用了 Wilcoxon 檢驗(yàn)，并有 6 項(xiàng)試驗(yàn)只使用了Wilcoxon檢驗(yàn)這種試驗(yàn)方法;有8項(xiàng)試驗(yàn)提到了其使用了 Peto 檢驗(yàn);有 8 項(xiàng)試驗(yàn)提到了其使用了 Tarone 檢驗(yàn)。有 12 項(xiàng)試驗(yàn)選擇了根據(jù)壽命表數(shù)據(jù)的檢驗(yàn)方法，其中有10項(xiàng)試驗(yàn)提到了其使用了 Gehan-Breslow 檢驗(yàn)，有 2 項(xiàng)試驗(yàn)未注明使用了何種檢驗(yàn)方法。
有 14 項(xiàng)試驗(yàn)提到其使用了 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型或 Cox 回歸分析，但均未注明使用了何種檢 驗(yàn)方法。有6項(xiàng)試驗(yàn)提到其使用了非生存分析類檢 驗(yàn)方法，包括 Fisher 精確檢驗(yàn)和 Kruskal-Wallis 非參 數(shù)檢驗(yàn)(基于生存天數(shù)或周數(shù))，并有4項(xiàng)試驗(yàn)僅使 用了非生存分析類檢驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。另外，有 5 項(xiàng)試驗(yàn)未注明使用了何種檢驗(yàn)方法。在生存分析檢驗(yàn)方式和方法的選擇上，有 119項(xiàng)試驗(yàn)使用了配對(duì)檢驗(yàn)，其中有54項(xiàng)僅使用Logrank 檢驗(yàn)方法、有 14 項(xiàng)僅使用 Wilcoxon 檢驗(yàn)方法、有 10 項(xiàng)僅使用壽命表分析中 Gehan-Breslow 檢驗(yàn)方法、有 6 項(xiàng)僅使用 Peto 檢驗(yàn)方法、有 22 項(xiàng)同時(shí)使用Log rank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)、有 1 項(xiàng)同時(shí)使用Peto 檢驗(yàn)、Log rank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)、有 1 項(xiàng)同時(shí)使用 Peto 檢驗(yàn)和 Log rank 檢驗(yàn)、有 4 項(xiàng)使用非生存分析類檢驗(yàn)方法、有7項(xiàng)未注明使用的檢驗(yàn)方法有 79 項(xiàng)試驗(yàn)使用了趨勢(shì)檢驗(yàn)，其中有 27 項(xiàng)僅使用Logrank檢驗(yàn)方法、有10項(xiàng)使用壽命表分析中Gehan-Breslow檢驗(yàn)方法、有9項(xiàng)僅使用Tarone檢驗(yàn)方法、有 1 項(xiàng)僅使用 Peto 檢驗(yàn)方法、有 24 項(xiàng)同時(shí)使用 Log rank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)、有 1 項(xiàng)同時(shí)使用Tarone 檢驗(yàn)、Log rank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)、有 7 項(xiàng)未注明使用的檢驗(yàn)方法;有59項(xiàng)試驗(yàn)使用了總體檢驗(yàn)，其中有 34 項(xiàng)僅使用 Log rank 檢驗(yàn)方法、有 16 項(xiàng)僅使用 Wilcoxon 檢驗(yàn)方法、有 6 項(xiàng)同時(shí)使用 Logrank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)、有 3 項(xiàng)未注明使用的檢 驗(yàn)方法。
在不考慮最優(yōu)先進(jìn)行的雙對(duì)照組檢驗(yàn)的情況 下，有 55 項(xiàng)試驗(yàn)在描述中提到了其生存分析部分采用了一定次序的分析程序，其中有 45 項(xiàng)先開始總體 檢驗(yàn)，確定總體檢驗(yàn)存在顯著性差異后再進(jìn)行后續(xù) 的趨勢(shì)或配對(duì)檢驗(yàn);有 10 項(xiàng)先開始趨勢(shì)檢驗(yàn)，確定 存在顯著性差異后，再從高劑量組到低劑量組逐個(gè) 與陰性對(duì)照組比較。
2.2 申報(bào)方腫瘤數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
在指導(dǎo)原則推薦的 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ秃?Poly-3 檢驗(yàn)方法的選擇使用上，有 108 項(xiàng)試驗(yàn)使用了 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ?有 7 項(xiàng)試驗(yàn)使用了 Poly-3 檢驗(yàn)方法; 有 2 項(xiàng)試驗(yàn)同時(shí)使用了 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ秃?Poly-3 檢驗(yàn)方法;僅有4項(xiàng)試驗(yàn)既未使用Peto分時(shí)檢驗(yàn)，又 未使用 Poly-3 檢驗(yàn)方法，且這 4 項(xiàng)試驗(yàn)全部是 6 個(gè)月轉(zhuǎn)基因小鼠致癌性試驗(yàn)。
共有23項(xiàng)試驗(yàn)使用了除Peto分時(shí)檢驗(yàn)和Poly- 3 檢驗(yàn)之外的檢驗(yàn)方法，包括 Cochran-Amitage 趨勢(shì) 檢驗(yàn)、Fisher 精確配對(duì)檢驗(yàn)方法和生存分析方法。 其中的 19 項(xiàng)試驗(yàn)是將這類檢驗(yàn)方法作為 Peto 分時(shí) 檢驗(yàn)的補(bǔ)充，如利用Fisher精確配對(duì)檢驗(yàn)進(jìn)行陽性 對(duì)照組和陰性對(duì)照組的比較、使用生存分析方法對(duì) 可觸及且實(shí)時(shí)追蹤的腫瘤進(jìn)行更精確的分析檢驗(yàn)等。
部分試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)描述中，提到了使用精確版本 Peto 檢驗(yàn)或 Poly-3 檢驗(yàn)的條件。在這些試驗(yàn)中， 大部分將腫瘤發(fā)生個(gè)數(shù)少于等于10個(gè)作為使用精 確版本 Peto 檢驗(yàn)的條件。
2.3審評(píng)方統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2015-2022年這8年來，F(xiàn)DA-CDER的審評(píng)方在致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)審評(píng)報(bào)告中使用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法基本不變，以下是審評(píng)方使用的生存分析方法和腫瘤分析方法的總結(jié)。在生存分析方法上，審評(píng)方使用了Kaplan-Meier乘積極限法分析生存數(shù)據(jù)，并繪制 Kaplan-Meier 生存曲線圖。在生存分布的總體檢驗(yàn)上，使用Log- Rank檢驗(yàn);在劑量反應(yīng)關(guān)系，即趨勢(shì)檢驗(yàn)上，使用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型中的似然比檢驗(yàn);在給藥組與陰 性對(duì)照組的配對(duì)檢驗(yàn)上，則使用似然比檢驗(yàn)和 Log- Rank 檢驗(yàn) 2 種方式。以上生存分析數(shù)據(jù)和圖表均 會(huì)被出示在審評(píng)報(bào)告中。在腫瘤數(shù)據(jù)分析方法上，審評(píng)方使用 Poly-3 方法進(jìn)行腫瘤數(shù)據(jù)分析[13-20]。當(dāng)某一腫瘤類型的帶瘤動(dòng)物少于 10 只，則采用精確檢驗(yàn)方法，否則采用漸 近檢驗(yàn)方法。在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判定上，審評(píng)方根據(jù) FDA 在 2001年發(fā)布的指南和 Lin 等的補(bǔ)充規(guī)則對(duì) 2 年期致癌性試驗(yàn)和6月期轉(zhuǎn)基因小鼠致癌性試驗(yàn)采用了不 同的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義水平。
對(duì)于 2 年期大小鼠致癌性試 驗(yàn)，審評(píng)員在趨勢(shì)檢驗(yàn)中對(duì)常見腫瘤和罕見腫瘤分 別采用 0.005 和 0.025 的顯著性水平;在配對(duì)比較重 對(duì)常見腫瘤和罕見腫瘤分別采用 0.01 和 0.05 的顯 著性水平。對(duì)于 6 個(gè)月轉(zhuǎn)基因小鼠致癌性試驗(yàn)，審 評(píng)員在趨勢(shì)檢驗(yàn)和配對(duì)比較上對(duì)常見腫瘤和罕見 腫瘤均采用 0.05 的顯著性水平。罕見腫瘤的判定 標(biāo)準(zhǔn)是腫瘤自發(fā)率低于 1% 的腫瘤，反之為常見 腫瘤。
3、 NTP 致癌性試驗(yàn)報(bào)告中的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
美國國家毒理學(xué)項(xiàng)目中心(NTP)是美國衛(wèi)生與公眾服務(wù)部下的一個(gè)跨機(jī)構(gòu)項(xiàng)目，旨在提供環(huán)境中 潛在有害物質(zhì)的毒理學(xué)信息[21]。NTP自1978年成 立以來，已經(jīng)評(píng)估了 2 800 余種環(huán)境物質(zhì)對(duì)人類健 康的潛在影響[21]，其致癌性評(píng)價(jià)項(xiàng)目也為美國衛(wèi)生與公共服務(wù)部發(fā)布致癌物報(bào)告提供了研究支撐[22]。 NTP 的毒性和致癌性研究有一套較為固定的統(tǒng)計(jì) 分析程序，本部分的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法是根據(jù) NTP 公示的 統(tǒng)計(jì)分析程序和 2018—2021 年較有代表性的 4 篇 致癌性研究報(bào)告(TR-601、TR-600、TR-599、TR-594) 進(jìn)行的總結(jié)。
在生存分析方法上，NTP使用Kaplan-Meier乘 積極限法分析生存數(shù)據(jù)，并繪制 Kaplan-Meier 生存 曲線圖。對(duì)于無妊娠的大、小鼠試驗(yàn)，使用 Tarone 壽命表檢驗(yàn)做生存檢驗(yàn)趨勢(shì)分析，使用Cox比例風(fēng) 險(xiǎn)模型用于暴露組與對(duì)照組的成對(duì)比較[11，23-26]。對(duì) 于從圍產(chǎn)期開始的大鼠 2 年期試驗(yàn)，對(duì)斷奶后的 F1 代大鼠使用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分別進(jìn)行生存檢驗(yàn)趨 勢(shì)分析和暴露組與對(duì)照組的成對(duì)比較。在腫瘤與非腫瘤病變發(fā)生率分析上，對(duì)于常規(guī)2 年大、小鼠試驗(yàn)，NTP 使用 Poly-3 檢驗(yàn)進(jìn)行腫瘤與非腫瘤病變發(fā)生率分析。對(duì)于從圍產(chǎn)期開始的大鼠 2 年致癌性試驗(yàn)，對(duì) F1 代大鼠使用經(jīng)過 Rao-Scott調(diào)整的Poly-3檢驗(yàn)進(jìn)行分析，其考慮了同窩相關(guān)性。
在連續(xù)變量分析上，NTP 首先用 Jonckheere 檢 驗(yàn)驗(yàn)證變量與暴露量是否有趨勢(shì)相關(guān)性，若有趨勢(shì) 相關(guān)性則采用趨勢(shì)檢驗(yàn)，若沒有趨勢(shì)相關(guān)性則采用 成對(duì)比較。對(duì)于器官質(zhì)量、體質(zhì)量等具有近 似正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用參數(shù)檢驗(yàn)方法，包括 Dunnett成對(duì)比較或Williams趨勢(shì)檢驗(yàn);對(duì)于血液 學(xué)、尿液分析等具有偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用非參數(shù) 檢驗(yàn)方法，包括Dunn成對(duì)比較或Shirley趨勢(shì)檢驗(yàn)。
對(duì)于從圍產(chǎn)期開始的大鼠2年期致癌性試驗(yàn)，要根據(jù)窩組效應(yīng)，對(duì)以上檢驗(yàn)方法進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
4、 結(jié)語
申報(bào)方、FDA 審評(píng)方和 NTP 在生存情況分析與腫瘤數(shù)據(jù)分析上的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用上有著一定差 異。在生存分析方法方面，Kaplan-Meier 乘積極限 估計(jì)方法是幾乎所有致癌性試驗(yàn)生存分析都會(huì)用 到的;Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型被 FDA 審評(píng)方和 NTP 大量 使用，但申報(bào)方很少使用此方法;壽命表方法則僅 被 NTP 大量使用以進(jìn)行趨勢(shì)檢驗(yàn)分析，申報(bào)方很少使用此方法，F(xiàn)DA 審評(píng)方不使用該方法。
在數(shù)據(jù)檢驗(yàn)方法上，申報(bào)方大多使用 Log Rank 檢驗(yàn)和 Wilcoxon 檢驗(yàn)，F(xiàn)DA 審評(píng)方使用 Log Rank 檢驗(yàn)和 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型、NTP 使用 Tarone 壽命表檢驗(yàn)和Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型。由于沒有相關(guān)指導(dǎo)原則或相關(guān) 指南的建議或推薦，申報(bào)方在生存分析方法和數(shù)據(jù) 檢驗(yàn)方法上的使用都較為繁雜，不過主流上基本都 會(huì)選擇繪制 K-M 曲線并使用 Log-Rank 檢驗(yàn)進(jìn)行總體、趨勢(shì)和配對(duì)檢驗(yàn)。與申報(bào)方的主流生存分析方法相比，F(xiàn)DA 審評(píng)方還會(huì)使用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn) 行劑量趨勢(shì)檢驗(yàn)和各劑量組間的配對(duì)比較。
在腫瘤數(shù)據(jù)分析方法上，Peto 分時(shí)檢驗(yàn)仍是申 報(bào)方最常使用的方法，而FDA審評(píng)方和NTP則使用 Poly-3 檢驗(yàn)。如前面所述，使用 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)需要 病理學(xué)家將腫瘤分類為致死性、偶發(fā)性和不致 死(可觀察到)，并對(duì)這3類腫瘤分別采用患病率法、 死亡率法和發(fā)生率法進(jìn)行腫瘤數(shù)據(jù)分析，這是最直 接地能夠調(diào)整生存對(duì)腫瘤發(fā)生的影響的檢驗(yàn)方法， 而 Poly-3 檢驗(yàn)只是為終末期前死亡的動(dòng)物分配風(fēng)險(xiǎn) 權(quán)重的一種調(diào)整生存率影響的方法。因此有學(xué)者認(rèn)為，如果條件允許，則有必要采用 Peto 分時(shí)檢 驗(yàn)，這可能是 FDA 申辦方考慮更多使用 Peto 分 時(shí)檢驗(yàn)的原因。而 FDA 審評(píng)方無法就每只動(dòng)物的 病理切片進(jìn)行病理判斷，只能根據(jù)申報(bào)方提供的腫 瘤發(fā)生數(shù)據(jù)使用更為標(biāo)準(zhǔn)化的Poly-3檢驗(yàn)。
NTP在 統(tǒng)計(jì)分析程序中未解釋其為何未使用 Peto 分時(shí)檢 驗(yàn)，但其中描述了在 1988 年 Bailer 和 Portier 發(fā)表的 論文中，使用 Poly-k 方法評(píng)估了 1986 年 Portier 等人 發(fā)表的 NTP 致癌性試驗(yàn)中對(duì)照組 F344 大鼠和 B6C3F1 小鼠中各種特定部位的病變，并建議 k=3 的值，這可能是目前NTP使用Poly-3檢驗(yàn)進(jìn)行腫瘤 數(shù)據(jù)分析的開端。根據(jù)NTP發(fā)布的統(tǒng)計(jì)分析程 序，目前NTP已經(jīng)使用了1993年經(jīng)過調(diào)整的Bieler- Williams Poly-3檢驗(yàn)方法。
根據(jù)以上的匯總與討論，推薦致癌性試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)分析可按照以下思路進(jìn)行設(shè)計(jì)。在生存分析上， 首先使用 Kaplan-Meier 乘積極限估計(jì)方法，并選用 該模型的一種檢驗(yàn)方法(如Log Rank檢驗(yàn))對(duì)生存 數(shù)據(jù)依次進(jìn)行總體檢驗(yàn)、趨勢(shì)檢驗(yàn)和配對(duì)檢驗(yàn)，并 最好再使用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)生存數(shù)據(jù)進(jìn)行趨勢(shì) 分析和成對(duì)比較。在腫瘤發(fā)生率分析上，在有足夠?qū)I(yè)的病理學(xué)家以判斷腫瘤是否致死的情況下，推薦使用 Peto 分時(shí)檢驗(yàn)，否則推薦使用 Bieler- Williams Poly-3檢驗(yàn)。
本文匯總了申報(bào)方、FDA 審評(píng)方和 NTP 在致癌性試驗(yàn)中統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的使用，分析和討論了三者在 生存分析方法和腫瘤發(fā)生率分析方法的選用差異， 并就此總結(jié)了致癌性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析設(shè)計(jì)思路。希望通過本文的介紹與匯總，能夠?yàn)樾滤幏桥R床致癌性試驗(yàn)研究提供一定參考。
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