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一、目的

規(guī)范實(shí)驗(yàn)室查找“污染”來源的操作過程，保證查找“污染”來源的全面性和及時(shí)性。

二、適應(yīng)范圍

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。

三、責(zé)任人

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作人員。

四、操作步驟

1. 物品準(zhǔn)備：生理鹽水（或去RNA酶水）、1.5ml EP管、EP管架、采樣拭子、帶濾芯槍頭、擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒等。

2. 查找“污染”來源的檢測(cè)途徑

2.1 空氣沉降檢測(cè)：

2.1.1 在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上分別放置開蓋裝有生理鹽水（或去RNA酶水）的EP管，過夜。測(cè)試試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)的空間否存在氣溶膠污染。

2.1.2 在潔凈工作臺(tái)面、生物安全柜內(nèi)部和核酸提取儀內(nèi)部分別放置開蓋裝有生理鹽水（或去RNA酶水）的EP管，過夜。測(cè)試潔凈工作臺(tái)、生物安全柜內(nèi)部和核酸提取儀的空間是否存在氣溶膠污染。

2.2 物表檢測(cè)：

2.2.1 用采樣拭子蘸生理鹽水（或去RNA酶水）分別對(duì)試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面反復(fù)擦拭后，放入生理鹽水（或去RNA酶水）中進(jìn)行洗脫。測(cè)試試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上否存在污染。

2.2.2 用采樣拭子蘸生理鹽水（或去RNA酶水）分別對(duì)潔凈工作臺(tái)面、生物安全柜臺(tái)面和熒光PCR儀內(nèi)壁反復(fù)擦拭后，放入生理鹽水（或去RNA酶水）中進(jìn)行洗脫。測(cè)試潔凈工作臺(tái)、生物安全柜內(nèi)部、核酸提取儀和熒光PCR儀內(nèi)面是否存在污染。

2.3 移液器檢測(cè)：

2.3.1 將配液的移液器和加模板的移液器分別換上無濾芯槍頭，在生理鹽水（或去RNA酶水）中反復(fù)吹吸10次。測(cè)試移液器內(nèi)部是否存在污染。

2.3.2 用采樣拭子蘸生理鹽水（或去RNA酶水）后分別對(duì)配液的移液器和加模板的移液器的內(nèi)外表面進(jìn)行取樣，取樣后放入生理鹽水（或去RNA酶水）中進(jìn)行洗脫。測(cè)試移液器表面是否存著污染。

3. 將上述采集到的樣本，按照擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒說明書要求的和核酸樣本量，直接加入擴(kuò)增試劑的八連管內(nèi)，上機(jī)擴(kuò)增檢測(cè)。同批次擴(kuò)增檢測(cè)應(yīng)設(shè)有陽性對(duì)照和陰性對(duì)照（排除擴(kuò)增過程中的假陰性和假陽性）。

4. 結(jié)果分析：按照擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒要求進(jìn)行結(jié)果分析。

4.1 在陽性對(duì)照和陰性對(duì)照結(jié)果正常的情況下分析檢測(cè)樣本。

4.2 若發(fā)現(xiàn)樣本中有擴(kuò)增曲線，即說明該樣本檢測(cè)的內(nèi)容存在“污染”。