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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2024-06-09 11:08
摘要：近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外雙特異性抗體發(fā)展迅速，截至2023年12月，全球已有近200個(gè)雙特異抗體正在進(jìn)行臨床研究，10余個(gè)雙特異性抗體藥物獲批上市。本文分析了國(guó)內(nèi)外雙特異性抗體注冊(cè)申報(bào)現(xiàn)狀，并結(jié)合藥學(xué)審評(píng)經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)此類(lèi)產(chǎn)品藥學(xué)開(kāi)發(fā)中的常見(jiàn)技術(shù)問(wèn)題進(jìn)行探討，以期為雙特異性抗體藥物的藥學(xué)開(kāi)發(fā)及評(píng)價(jià)提供參考。
NISONOFF等[1]在20世紀(jì)60年代首次提出將不同特異性的單價(jià)抗體片段的混合物重組，自此雙特異性抗體（簡(jiǎn)稱(chēng)雙抗）的發(fā)展拓展了癌癥免疫治療領(lǐng)域。但由于免疫原性和鏈錯(cuò)配問(wèn)題的存在，雙抗的發(fā)展受到了很大限制，近年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展以及對(duì)雙抗認(rèn)知的提高，這些問(wèn)題已逐漸被克服。雙抗由于能同時(shí)結(jié)合2個(gè)不同的靶點(diǎn)或同一個(gè)靶點(diǎn)的2個(gè)不同表位而具有更強(qiáng)的抗原結(jié)合能力，在復(fù)雜疾病的治療中十分關(guān)鍵[2]。LAN等[3]報(bào)道，靶向人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2）的雙抗已顯示出將免疫細(xì)胞定向至HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的能力，從而有效殺傷腫瘤細(xì)胞。已完成的臨床研究顯示，Roche的法瑞西單抗（Vabysmo）靶向血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A），用于治療新生血管性或濕性年齡相關(guān)性黃斑變性和糖尿病黃斑水腫，相比1～2個(gè)月眼部給藥1次的阿柏西普，Vabysmo在達(dá)到同樣治療效果下可將給藥時(shí)間延長(zhǎng)至3～4個(gè)月，有效降低了治療負(fù)擔(dān)[4]。
自2009年首個(gè)雙抗卡妥索單抗（Catumaxomab）批準(zhǔn)上市以來(lái)，多個(gè)雙抗藥物進(jìn)入研發(fā)的不同階段。截至2023年12月，全球已有近200個(gè)雙抗正在進(jìn)行臨床研究，10余個(gè)雙抗藥物獲批上市。本文分析了國(guó)內(nèi)外雙抗注冊(cè)申報(bào)現(xiàn)狀，并結(jié)合藥學(xué)審評(píng)經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)此類(lèi)產(chǎn)品藥學(xué)開(kāi)發(fā)中的常見(jiàn)技術(shù)問(wèn)題進(jìn)行探討，以期為雙抗藥物的藥學(xué)開(kāi)發(fā)及評(píng)價(jià)提供參考。
1、 國(guó)內(nèi)外雙抗藥物受理情況分析
1.1 國(guó)外已上市雙抗情況分析
根據(jù)已經(jīng)公開(kāi)的信息，截至2023年底，全球已獲批14款雙抗藥物（包括已退市的），其中10款為2022年后上市。獲批的雙抗藥物涉及的靶點(diǎn)多樣，包括分化簇3(cluster of differentiation 3,CD3）、分化簇19(CD19）、表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）、細(xì)胞間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)換因子（cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c MET）、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein-1,PD-1）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白-4(cytotoxic T lymphocyte associated protein-4,CTLA-4）、B細(xì)胞成熟抗原（B cell maturation antigen,BCMA）、凝血因子Ⅸ（coagulation factorⅨ，F(xiàn)Ⅸ）、凝血因子Ⅹ（FⅩ）、VEGF-A和Ang2等。適應(yīng)癥多為血液瘤、多發(fā)性骨髓瘤、消化道腫瘤、非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤，也進(jìn)行了血友病、眼科及關(guān)節(jié)炎等適應(yīng)癥的擴(kuò)展探索。見(jiàn)表1。
全球已上市雙抗藥物中，有4家已在國(guó)內(nèi)獲批上市，包括Amgen的貝林妥歐單抗、Roche的艾美賽珠單抗、法瑞西單抗、格羅菲妥單抗，其中貝林妥歐單抗在國(guó)外獲批5～6年后在國(guó)內(nèi)上市，Roche的3種雙抗國(guó)內(nèi)外獲批時(shí)間從1年逐漸縮短至1月，可見(jiàn)雙抗在國(guó)內(nèi)的上市時(shí)間與歐美的差距逐漸縮短，這得益于國(guó)內(nèi)近年來(lái)加快審評(píng)、審批的各項(xiàng)舉措及國(guó)際多中心臨床的開(kāi)展，明顯提高了國(guó)內(nèi)用藥的可及性。在國(guó)內(nèi)進(jìn)行新藥上市申請(qǐng)且處于審評(píng)中的包括Janssen的特立妥單抗、Roche的莫妥珠單抗、Johnson&Johnson的埃萬(wàn)妥單抗。
表1 國(guó)外已上市雙抗藥物匯總
Tab.1Summary of foreign marketed bispecific antibody drugs
注：FDA(Food and Drug Administration）為美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局；EMA(European Medicines Agency）為歐洲藥品管理局；NMPA(National Medical Products Administration）為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局；Ep CAM(epithelial cell adhesion molecule）為上皮細(xì)胞黏附分子；Gp100(glycoprotein 100）為糖化蛋白100;TNF-α(tumor necrosis factor-α）為腫瘤壞死因子-α;CD20(cluster of differentiation 20）為分化簇20;GPRC5D(G protein-coupled receptor,class C,group 5,member D）為G蛋白偶聯(lián)受體C5D。
國(guó)外已上市雙抗藥物在我國(guó)正開(kāi)展臨床試驗(yàn)的包括Pfizer的Elranatamab、Johnson&Johnson的Talquetamab、Abbvie/Genmab的Epcoritamab-bysp，目前在國(guó)內(nèi)均已進(jìn)入關(guān)鍵的臨床試驗(yàn)階段。除此之外，全球尚未上市，國(guó)內(nèi)外同步開(kāi)展臨床試驗(yàn)，且已進(jìn)入關(guān)鍵臨床試驗(yàn)的包括卡妥索單抗（Catumaxomab）、Amgen的Tarlatamab（靶點(diǎn)CD3E x DLL3）、Medimmune Llc研發(fā)的Volrustomig(PD-1 x CTLA4）、諾和諾德制藥的Mim8（靶點(diǎn)F9 x F10）、阿斯利康的Gefurulimab(C5抑制劑）、默克雪蘭諾的Bintrafuspalfa（靶點(diǎn)PD-L1 x TGF-β）、Zymeworks Inc的Zanidatamab（靶點(diǎn)HER2）、Abl Bio Inc的TR-009（靶點(diǎn)DLL4 x VEGFA）。值得注意的是，首個(gè)雙抗藥物卡妥索單抗（Catumaxomab）于2009年被歐盟批準(zhǔn)上市，用于惡性腹水治療，于2017年因商業(yè)原因退出市場(chǎng)。廣州凌騰生物醫(yī)藥有限公司重啟了卡妥索單抗在國(guó)內(nèi)的開(kāi)發(fā)，目前最高研發(fā)階段為臨床Ⅲ期，用于治療胃癌[5]。
1.2 國(guó)內(nèi)雙抗注冊(cè)受理情況分析
中山康方生物醫(yī)藥有限公司的卡度尼利單抗注射液（代號(hào)：AK104，商品名：開(kāi)坦尼）已于2022年6月由NMPA獲批上市，靶向人PD-1和CTLA-4，用于治療既往接受含鉑化療治療失敗的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性宮頸癌患者，是全球首個(gè)獲批上市的腫瘤雙免疫檢查點(diǎn)抑制劑雙抗，也是國(guó)內(nèi)首個(gè)獲批上市的雙抗[6]。新藥上市申請(qǐng)方面，中山康方生物醫(yī)藥有限公司研發(fā)的依沃西單抗（AK112）是一種特異結(jié)合人VEGF和PD-1的人源化雙抗，用于治療聯(lián)合培美曲塞與卡鉑用于經(jīng)EGFR酪氨酸激酶抑制劑（epidermal growth factor receptortyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI）治療后進(jìn)展的EGFR突變的局部晚期或轉(zhuǎn)移性非鱗非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC），目前已申請(qǐng)上市，處于審評(píng)中。
除已上市及正申請(qǐng)上市的品種外，國(guó)內(nèi)雙抗藥物的臨床研究也取得了階段性進(jìn)展，截至2023年底，中國(guó)大陸已有152個(gè)雙抗獲得臨床試驗(yàn)申請(qǐng)（Investigational New Drug,IND）的批準(zhǔn)，用于基于免疫腫瘤學(xué)的癌癥及自身免疫性疾病治療，且已成為雙抗臨床開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)。根據(jù)靶點(diǎn)組合和適應(yīng)癥的區(qū)別，主流的雙抗類(lèi)型可分為3類(lèi)：含PD-1/PD-L1軸類(lèi)、CD3招募類(lèi)及其他類(lèi)。目前國(guó)內(nèi)處于臨床Ⅲ期的雙抗見(jiàn)表2。
2 雙抗藥學(xué)審評(píng)中常見(jiàn)問(wèn)題及思考
雙抗具有與單抗相似的理化性質(zhì)，單抗典型質(zhì)量研究方法大部分也適用于雙抗，但雙抗由于分子固有特性、特異性純化工藝、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)與單抗存在一定差異，質(zhì)控研究又有自身特點(diǎn)。本文結(jié)合審評(píng)經(jīng)驗(yàn)，列舉了雙抗藥物審評(píng)中常見(jiàn)藥學(xué)問(wèn)題，著重強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量研究中可能遇到的問(wèn)題，以期為雙抗藥物的藥學(xué)開(kāi)發(fā)及評(píng)價(jià)提供參考。
表2 國(guó)內(nèi)處于臨床Ⅲ期的雙抗藥物
Tab.2Domestic bispecific antibody drugs in clinical phaseⅢ
注：PD-L1(programmed cell death 1 ligand 1）為細(xì)胞程序性死亡-配體1;HER3(human epidermal growth factor receptor 3）為人表皮生長(zhǎng)因子受體3。
2.1 雙抗特異性
FDA于2021年5月發(fā)布的《Bispecific Antibody Development Programs Guidance for Industry》[7]在雙抗藥學(xué)研究和控制（Chemical Manufacturing and Control,CMC）方面提出，應(yīng)研究可能影響藥理學(xué)的質(zhì)量屬性，包括抗原特異性、與抗原表位結(jié)合的親和力、與抗體結(jié)合的親和力（針對(duì)同一細(xì)胞上的2個(gè)分子的雙抗）、效價(jià)、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如聚集體、片段、同源二聚體及其他錯(cuò)配形式）、穩(wěn)定性及半衰期等，并指出“某些情況下，F(xiàn)DA可能會(huì)要求將雙抗與針對(duì)相同抗原靶點(diǎn)的已批準(zhǔn)單特異性產(chǎn)品進(jìn)行比較（與類(lèi)似單特異性產(chǎn)品相比安全性和/或有效性應(yīng)有所提高），以便為雙抗的獲益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供信息”，此處強(qiáng)調(diào)了雙抗特異性的重要性，與僅具有組合效應(yīng)的雙抗相比，更傾向于特異性雙抗。
雙抗藥物開(kāi)發(fā)時(shí)比傳統(tǒng)的單抗藥物面臨更多的挑戰(zhàn)，如某些雙抗形式可能顯示出不如其母體單抗的藥代動(dòng)力學(xué)特性[8]。該研究評(píng)估了兩種Ig G融合雙抗形式（Ig G-ECD和Ig G-sc Fv）在食蟹猴體內(nèi)的代謝，結(jié)果顯示，兩種Ig G融合雙抗形式清除較快、較其單抗分子半衰期短，因此選擇合適的雙抗形式是開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵部分[9]，通常需要大量的篩選研究工作，重點(diǎn)是提高穩(wěn)定性，降低多反應(yīng)性和自締合潛力，去除免疫及消除化學(xué)和蛋白水解切割位點(diǎn)。早期的體外研究可能會(huì)對(duì)選擇具有最佳親和力和穩(wěn)定性的工程細(xì)胞株具有指導(dǎo)意義。如文獻(xiàn)報(bào)道，艾美賽珠開(kāi)發(fā)時(shí)曾從40 000個(gè)雙抗中篩選，針對(duì)靶向FIX x FX活性、藥代動(dòng)力學(xué)改善、溶解度改善、脫酰胺和去免疫等進(jìn)行了優(yōu)化，最終篩選出emicizumab。部分抗體通過(guò)添加透明質(zhì)酸酶等輔料制備皮下注射劑型，以高濃度形式給藥，延長(zhǎng)半衰期，方便患者給藥[10]。目前國(guó)內(nèi)外制藥企業(yè)構(gòu)建了高通量雙抗制備和篩選平臺(tái)，如蘇州康寧杰瑞生物科技有限公司的電荷排斥誘導(dǎo)雙特異性（Charge Repulsion Improved Bispecific,CRIB）平臺(tái)、武漢友芝友生物制藥股份有限公司的Ybody、Roche雙抗篩選平臺(tái)、Merck的SPLIT INTEINS平臺(tái)、賽諾菲的CODV-Ig等，為快速、高效獲得高質(zhì)量、療效好的雙抗提供了平臺(tái)支持。
2.2 結(jié)構(gòu)研究
部分雙抗與Ig G單抗結(jié)構(gòu)類(lèi)似，分子較大，研發(fā)時(shí)采用傳統(tǒng)的生物物理學(xué)工具，如圓二色譜（circular dichroism,CD）、傅里葉變換紅外光譜（Fourier transform infrared spectrometer,FTIR）和差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry,DSC）等，對(duì)大的、多結(jié)構(gòu)域蛋白或小部分變體微小結(jié)構(gòu)變化的檢測(cè)靈敏度下降，導(dǎo)致采用這些生物物理學(xué)技術(shù)對(duì)雙抗提供的額外表征有限。但仍應(yīng)盡可能采用多種正交方法對(duì)雙抗的高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，以便從多角度了解蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)，這對(duì)發(fā)生可能影響產(chǎn)品安全、有效性的藥學(xué)變更時(shí)，如何證明產(chǎn)品變更前后的可比性也具有益處。此外，雙抗分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，氨基酸序列測(cè)定時(shí)，部分雙抗的氨基酸覆蓋率可能達(dá)不到100%，建議盡可能采用多種酶切形式結(jié)合肽圖提高序列覆蓋率。
2.3 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)/有關(guān)物質(zhì)
雙抗產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)/有關(guān)物質(zhì)可能包括分子大小變異體、電荷異構(gòu)體、序列變異體、錯(cuò)配抗體、半抗體、糖化變體、氧化變體、天冬氨酸異構(gòu)化等。對(duì)于分子大小變異體、電荷異構(gòu)體等含量較多產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)/有關(guān)物質(zhì)可采用色譜法富集，對(duì)于序列變體等痕量變異體可通過(guò)強(qiáng)降解方法制備，開(kāi)展進(jìn)一步的質(zhì)量研究，分析對(duì)活性的影響。
部分雙抗開(kāi)發(fā)研究時(shí)出現(xiàn)序列變異體，已知治療性抗體恒定區(qū)的異型變異體可在異型錯(cuò)配患者中引發(fā)免疫原性反應(yīng)，但與臨床影響無(wú)關(guān)[11]。開(kāi)發(fā)者應(yīng)從DNA水平、蛋白水平研究序列變體的來(lái)源、不同代次細(xì)胞中的含量，并對(duì)序列變體進(jìn)行鑒別，結(jié)合已有的非臨床、臨床研究鑒定該變異體對(duì)安全性、有效性、免疫原性不會(huì)產(chǎn)生影響。若與基因突變有關(guān)，應(yīng)嚴(yán)格控制細(xì)胞限傳代次，必要時(shí)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中擬定合理的限度。
雙抗因二硫鍵偏多，可能會(huì)出現(xiàn)二硫鍵錯(cuò)配結(jié)構(gòu)，另外如果抗體輕鏈和重鏈可變區(qū)中存在游離巰基，可能會(huì)影響其生物活性，導(dǎo)致生物學(xué)活性降低[12]，應(yīng)在研究時(shí)采用合適的方法（如非還原變性-酶切肽圖結(jié)合純度方法）表征二硫鍵配對(duì)方式、游離巰基含量等，鑒定二硫鍵已正確配對(duì)。
考慮到抗CD3或抗Fc受體的同源二聚體可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子的釋放，而后者又是雙抗類(lèi)產(chǎn)品常見(jiàn)的安全性風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對(duì)同源二聚體進(jìn)行定量分析，這對(duì)于與效應(yīng)細(xì)胞結(jié)合的雙抗十分重要。此外，新的結(jié)構(gòu)可能會(huì)導(dǎo)致增加免疫原性[7]。
部分雙抗互補(bǔ)性決定區(qū)（complementarity determining region,CDR）存在一定的氧化、脫酰胺、異構(gòu)化、糖基化等，考慮到CDR區(qū)影響樣品的有效性，增加免疫原性風(fēng)險(xiǎn)，CHUNG等[13]報(bào)道，聚糖結(jié)構(gòu)α1-3連接半乳糖和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（N-glycolylneuraminic acid,NGNA）可能參與不良免疫反應(yīng)，應(yīng)明確具體位點(diǎn)、含量，分析對(duì)活性、藥代、安全性及免疫原性等的影響，制定合理的控制措施。
2.4 生物學(xué)活性
由于雙抗的作用機(jī)理多樣，如細(xì)胞連接、受體橋接失活、受體橋接激活、雙靶點(diǎn)同時(shí)作用、雙靶點(diǎn)順序作用等，因此雙抗分子開(kāi)發(fā)時(shí)，除抗原結(jié)合試驗(yàn)、細(xì)胞表面配體結(jié)合試驗(yàn)、效應(yīng)器功能測(cè)定外，還應(yīng)盡可能開(kāi)發(fā)反映雙抗2個(gè)靶標(biāo)結(jié)合/協(xié)同效應(yīng)的生物學(xué)活性測(cè)定方法（mechanisms of action,MOA）。完善的生物測(cè)定法對(duì)于生物制品的表征和控制以及臨床研究結(jié)果的解釋至關(guān)重要，要求具有較好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，充分體現(xiàn)分子作用機(jī)制，最好使用單一檢測(cè)形式滿足檢測(cè)所需性能（即捕獲分子的雙重活性和潛在的協(xié)同效應(yīng)），以及檢測(cè)多方面的結(jié)構(gòu)變化[14]。
根據(jù)分子的作用機(jī)制，除應(yīng)測(cè)定主要生物學(xué)活性外，還需考慮開(kāi)發(fā)多種免疫學(xué)方法，如細(xì)胞殺傷、細(xì)胞因子分泌、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用（antibody dependent cellular phagocytosis,ADCP）等，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行表征。REGISTER等[15]匯總了目前雙抗生物學(xué)檢測(cè)常用方法，通過(guò)案例分析結(jié)合檢測(cè)、MOA、功能檢測(cè)（其他支持MOA表征方法）、效應(yīng)器功能檢測(cè)、雜質(zhì)生物測(cè)定等表征方法，為不同類(lèi)型雙特異性分子的生物測(cè)定開(kāi)發(fā)提供策略。
目前部分企業(yè)僅開(kāi)發(fā)分子水平的生物學(xué)活性檢測(cè)方法，未開(kāi)發(fā)細(xì)胞水平的活性研究方法。一方面與方法開(kāi)發(fā)難度有關(guān)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[16]，開(kāi)發(fā)穩(wěn)健且適合質(zhì)量控制（Quality Control,QC）的基于細(xì)胞的生物檢測(cè)方法比開(kāi)發(fā)非基于細(xì)胞的結(jié)合檢測(cè)方法更具挑戰(zhàn)性，細(xì)胞水平檢測(cè)方法方法變異度大；另一方面，生物測(cè)定的開(kāi)發(fā)、執(zhí)行、轉(zhuǎn)移和維護(hù)成本很高。FDA曾在2023年8月發(fā)表了針對(duì)三陰性乳腺癌雙抗的研究，比較了2種不同形式雙抗的生物學(xué)活性。一種具有2個(gè)針對(duì)每種抗原的結(jié)合位點(diǎn)的雙可變結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白（dual variable domain-Ig,DVD-Ig），另一種針對(duì)每種抗原具有1個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的桿臼結(jié)構(gòu)（knobin-hole,KIH）。研究發(fā)現(xiàn)，用于分析的細(xì)胞類(lèi)型（MDA-MB-231和BT-20細(xì)胞）以及抗腫瘤活性的測(cè)定會(huì)影響檢測(cè)能力，如一種分析法（細(xì)胞活力）可檢測(cè)2種細(xì)胞系的抗腫瘤作用，但另一種分析法（臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞增殖）不夠靈敏，無(wú)法檢測(cè)BT-20細(xì)胞的抗腫瘤作用[17]。因此進(jìn)行雙抗的生物學(xué)活性研究時(shí)，開(kāi)發(fā)合適的細(xì)胞系以及靈敏的檢測(cè)方法非常重要。
2.5 不溶性微粒（sub-visible particle,Sv P）問(wèn)題
目前開(kāi)發(fā)的雙抗產(chǎn)品濃度均較高，可能會(huì)引發(fā)Sv P升高。Sv P形成原因很多，包括分子的固有特性、處方、制劑工藝及貯存/穩(wěn)定性等均可影響Sv P，分析方法也會(huì)影響Sv P檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
已知可逆的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)（自締合）相互作用會(huì)導(dǎo)致光散射增加，可能會(huì)影響聚集和乳光度[18]，觀察到澄清度/乳光度升高。蛋白質(zhì)聚集，尤其是在高濃度時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致制劑中的Sv P計(jì)數(shù)升高。SIMLER等[19]報(bào)告了蛋白質(zhì)聚集與Sv P形成之間的機(jī)制途徑?？贵w處方中常添加聚山梨酯80或聚山梨酯20保護(hù)蛋白質(zhì)免受攪拌強(qiáng)制降解，已知聚山梨酯20降解可能因形成不溶性游離脂肪酸（free fatty acid,FFA）微粒導(dǎo)致Sv P[20]。抗體制劑工藝多存在攪拌、凍融環(huán)節(jié)，可能會(huì)影響Sv P形成。有研究報(bào)道，抗體凍融時(shí)蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)會(huì)發(fā)生一定程度上的反轉(zhuǎn)，液體中的氣泡在凍融過(guò)程中可能會(huì)溶解和逸出，導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化，易于聚集形成Sv P[21,22]，此時(shí)需結(jié)合凍融研究、運(yùn)輸穩(wěn)定性研究證實(shí)。根據(jù)《美國(guó)藥典》<787>、《歐洲藥典》2.9.19和《中國(guó)藥典》三部（2020版）通則0903要求，推薦采用光阻法、顯微計(jì)數(shù)法檢查Sv P，如果光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。對(duì)于滴眼液，應(yīng)按照《美國(guó)藥典》<789>規(guī)定，限度更嚴(yán)。兩種分析方法的變異性可能會(huì)影響觀察到的Sv P水平。
針對(duì)抗體藥物儲(chǔ)存時(shí)出現(xiàn)Sv P，應(yīng)采用多種分析方法，如顯微鏡、FTIR光譜、拉曼光譜、Energy Dispersive X-Ray Spectroscopy(EDX光譜）、流動(dòng)成像等，盡可能對(duì)Sv P進(jìn)行鑒別，分析Sv P的組成，形成原因，是否隨儲(chǔ)存時(shí)間而增加等，進(jìn)行必要的安全性評(píng)估，并采用合理的控制策略進(jìn)行控制（如使用前過(guò)濾、替換為純度更高的輔料等），原則上應(yīng)符合現(xiàn)行藥典及同類(lèi)品種的要求。
3、 結(jié)語(yǔ)
隨著雙抗平臺(tái)技術(shù)的發(fā)展，雙抗藥物免疫原性和鏈錯(cuò)配問(wèn)題等逐漸被克服，貝林妥歐單抗、艾美賽珠單抗等10余個(gè)雙抗藥物已在全球獲批上市，用于治療癌癥、血液系統(tǒng)、眼科、免疫系統(tǒng)疾病等。雙抗藥物的開(kāi)發(fā)仍在快速發(fā)展中，是當(dāng)下制藥行業(yè)最熱門(mén)的新藥研發(fā)方向之一，國(guó)內(nèi)外藥企研發(fā)速度正在逐漸縮短差距。本文基于對(duì)多個(gè)雙抗品種的審評(píng)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研等對(duì)雙抗藥物的國(guó)內(nèi)外注冊(cè)申報(bào)現(xiàn)狀進(jìn)行了分析，并匯總探討了雙抗審評(píng)中常見(jiàn)的技術(shù)問(wèn)題，以期通過(guò)研發(fā)生產(chǎn)方與監(jiān)管方共同努力，強(qiáng)化技術(shù)和共性問(wèn)題交流，為患者提供安全有效、質(zhì)量可控的新型雙抗藥物。
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來(lái)源：中國(guó)生物制品學(xué)雜志2024年
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