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問：色譜柱反向沖洗是我們實驗室的常見做法。當色譜柱的峰形變差時，我們會使用與正常流動方向相反的方向沖洗色譜柱。有時，我們會使用不同的溶劑進行反向沖洗。雖然我看到了一些改進，但效果并不穩(wěn)定；實際上，大多數(shù)情況下改進很小，大約再進行 100 次進樣后，我們就會扔掉色譜柱。我們該如何改進這一程序呢？

答：事實上，我并不提倡反向沖柱。大多數(shù)情況下，它并不起作用，而當它確實起作用時，我認為可以通過更合理的方式來改善。此外，我認為還有更有效的解決方案來改善色譜柱的壽命。讓我們詳細討論一下這些問題！

什么情況下我們需要嘗試對色譜柱進行反向沖洗？原因可能有兩個：一個是壓力升高，另一個是色譜柱性能顯著下降。據(jù)信，這兩種情況都是由于流動相或 HPLC 儀器中的樣品成分或碎屑堆積在柱頭導致的。

第一個問題是，這些碎屑積聚在哪里？如果碎屑足夠多，就會聚集在色譜柱過濾片的外表面。在這種情況下，更換過濾片與反向沖洗的效果是一樣的。如果您手頭有更換用的過濾片，您可以用新的過濾片代替舊的過濾片，這樣就可以重新運行了。然后，您可以檢查舊的過濾片是否可以恢復狀態(tài)，也許可以將其放入超聲浴中浸泡一段時間，或者直接反向沖洗過濾片。您可以使用廢棄色譜柱來做這件事。這是一個相當快速的過程。

不過，只有當問題出在過濾片上時，更換過濾片才會起作用。根據(jù)我的經(jīng)驗，這種情況很少發(fā)生。大多數(shù)情況下，柱頭上會積聚一些東西。積聚的事實本身就表明，物質(zhì)被強烈吸附在柱頭相對狹窄的區(qū)域內(nèi)。如果壓力同時增加，則表明污染物的分子量較大或溶解度較低，并堵塞了填料之間的通道。隨著壓力的增加，這意味著色譜柱中的第一層填料會受到很大的作用力，這些填料層會重新排列，最終導致峰形惡化。要修復這種對填料結(jié)構(gòu)的破壞是非常困難的，甚至是不可能的。這就是色譜柱反向沖洗充其量只是一場賭博的原因。

問：至少可以讓色譜柱的壽命更長一些。反向沖洗可能不是一個很好的解決方案，但確實有幫助。

答：這當然有幫助，但我更喜歡更可靠、更持久的解決方案。您使用過保護柱嗎？它們可以保護色譜柱不受來自樣品或儀器的各種碎屑的影響。如果您的樣品相對干凈，那么保護柱可以持續(xù)使用上千次進樣。之后，分析柱通常會煥然一新。如果樣品比較臟，那么保護柱可能只能使用 50 次。由于保護柱的使用壽命與目前分析柱的使用壽命大致相同，因此您可以心中有數(shù)。

當然，保護柱不是免費的。不過，與分析柱的成本相比，保護柱的價格相對較低。因此，一次性保護柱的成本很快就會被分析柱更長的使用壽命所補償。

您應該使用哪種保護柱？整個討論都假定您使用的保護柱填料與分析柱填料相同。大多數(shù)情況下，這是最佳解決方案，原因有以下幾點。最重要的一個原因是，如果使用與保護柱相同的填料，則添加保護柱不會對分離產(chǎn)生任何明顯的影響。同時，這種方法通常也是保護分析柱的最佳方式。一般不建議使用不同制造商生產(chǎn)的不同填料。不同制造商生產(chǎn)的鍵合相有很大差異，使用不同填料制成的保護柱無法保證與使用相同填料制成的保護柱一樣好的保護效果。此外，填料之間的差異可能會導致分析物出現(xiàn)額外的譜帶展寬。由此可見，有幾個很好的理由讓保護柱和分析柱中的填料保持一致。

在極少數(shù)情況下，已知導致色譜柱壽命縮短的污染物，使用不同的保護柱可以更有效地捕集這種污染物。這就需要仔細斟酌。例如，使用 C18 填料分析的樣品受到了多胺的污染。這種多胺在陽離子交換填料上的吸附效果要比在 C18 保護柱上好得多。如果在保護柱中使用不同的填料，則需要確保它不會干擾分析。

在本例中，所有相關(guān)分析物均為酸性或中性化合物。因此，添加陽離子交換填料來捕集多胺是非?？尚械?。如果感興趣的分析物中含有堿性化合物，那么使用陽離子交換填料作為保護柱就比較麻煩，需要進行徹底的分析。不過，像這里描述的情況并不多見，大多數(shù)情況下，最好的保護柱包含與分析柱相同的填料。

問：市場上有許多不同的保護柱設計。我應該使用哪一種？

答：重要的是要使用與分析柱含有相同填料的保護柱。因此，您應該向分析柱的供應商咨詢他推薦使用哪種保護柱。有時會有幾種類型，價格和功能各不相同。實際上，我所熟悉的所有保護柱都是卡套式。這可以降低保護柱的成本，因為端部配件可以重復使用。有些保護柱設計為通過額外的管路連接到分析柱，有些則直接連接到分析柱。雖然有些保護柱的設計可能比其他的更好，但重要的一點是要使用與分析柱填料相同的保護柱。相比于反向沖洗色譜柱，這種方法能更有效地延長色譜柱的使用壽命。