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1、Purge閥濾芯堵塞

在做實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，將流動(dòng)相（過(guò)濾超聲）配好，HPLC儀器就緒，打開Purge閥（逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)180°），調(diào)節(jié)流速，發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力較平時(shí)高（異常），可能是濾頭或者Purge閥內(nèi)的濾芯堵塞導(dǎo)致，經(jīng)檢查濾頭并無(wú)堵塞，于是將Purge閥拆開，將里面的濾芯取出，發(fā)現(xiàn)濾芯比較臟（表面一層黑色吸附物），于是更換新的濾芯（也可以將濾芯放入10%異丙醇內(nèi)超聲3-5min），重新安裝好后，打開Purge閥，壓力正常。

（通常在平衡色譜柱前，先打開Purge閥，將流動(dòng)相內(nèi)的氣泡排除，以免引起系統(tǒng)壓力波動(dòng)，進(jìn)而影響化合物的保留。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)壓力異常，排除流動(dòng)相（超聲過(guò)濾，不會(huì)引起堵塞）引起濾頭堵塞；另一個(gè)原因就是Purge閥內(nèi)的濾芯污染，更換后正常，所以在日常工作中要對(duì)其進(jìn)行定期維護(hù)）

2、色譜柱太臟接檢測(cè)器后，導(dǎo)致的檢測(cè)器污染

同事將其事先清洗好的色譜柱外借，歸還后，重新平衡柱子（接檢測(cè)器），發(fā)現(xiàn)壓力異常（較平常時(shí)的2倍），且色譜圖中出現(xiàn)好多峰，于是用高比例的鹽相沖洗色譜柱，壓力一直未減小，說(shuō)明以排除色譜柱原因；于是開始排查：未接色譜柱時(shí)，儀器系統(tǒng)壓力正常；打開Purge閥，壓力正常；將六通閥處的5/6號(hào)管線反接，沖洗針座，重新接好后，壓力未明顯減小；將檢測(cè)器的入口端拆開，壓力明顯下降，說(shuō)明是檢測(cè)器污染，于是將檢測(cè)器的進(jìn)口和出口的管線反接，用超純水低流速?zèng)_洗，之后正常連接，儀器壓力正常。

（首先通過(guò)壓力線排除系統(tǒng)自身的原因；通過(guò)Purge閥，排除其濾芯的原因；用高濃度的鹽相進(jìn)行沖洗是為了將殘留在色譜柱內(nèi)的蛋白沖洗出來(lái)（樣品為蛋白樣品）；進(jìn)樣針座一般不會(huì)堵，這里簡(jiǎn)單的進(jìn)行沖洗；不接檢測(cè)器，壓力明顯下降，說(shuō)明檢測(cè)器已被污染，所以建議在沖洗柱子或啟用新的色譜柱時(shí)不連接檢測(cè)器）

3、含鹽的的流動(dòng)相未再次過(guò)濾導(dǎo)致的壓力偏高

基本的實(shí)驗(yàn)條件：弱陽(yáng)離子交換柱，緩沖液作為流動(dòng)相（用了一天一夜）（對(duì)于離子交換，流動(dòng)相通常為緩沖鹽，當(dāng)鹽濃度不高，PH在中性附近，環(huán)境溫度較高，容易生長(zhǎng)細(xì)菌，因此對(duì)于5μm的色譜柱來(lái)說(shuō)，2μm的篩板很容易堵塞，表現(xiàn)出來(lái)的就是柱壓的緩慢上升）；樣品為生物制品。

儀器報(bào)紅后，首先把儀器內(nèi)的積水清理干凈，然后查看每一針樣品的柱壓，發(fā)現(xiàn)柱壓每一針壓力都在上升（在遇到諸如壓力問(wèn)題、出鬼峰或與原方法結(jié)果不一致時(shí)，不能主觀判斷儀器臟了或是樣品不合格，首先做的就是調(diào)查。對(duì)于HPLC來(lái)說(shuō)，壓力線是一個(gè)重要參數(shù)）；重新接好色譜柱，使用含高鹽的流動(dòng)相低流速?zèng)_洗色譜柱0.5h（檢測(cè)器一端未連接）柱壓無(wú)明顯變化，仍然很大，排除色譜柱自身原因（在離子交換中，增加鹽濃度即增加洗脫能力，一般來(lái)說(shuō)出峰不正常才考慮，由于是生物樣品，有可能是洗脫能力弱導(dǎo)致某些成分未洗脫導(dǎo)致壓力升高；檢測(cè)器一端未連接是為了排除將檢測(cè)器污染的可能）；之后打開purge閥，流速逐漸調(diào)節(jié)至5.0ml/min，壓力為1.0bar左右，則證明吸液濾頭沒(méi)堵；之后拆開purge閥處的濾芯，超聲5min，重新?lián)Q上后，壓力無(wú)明顯變化，排除濾芯的問(wèn)題；懷疑進(jìn)樣針的針座堵了，然后將進(jìn)樣針升起（進(jìn)樣針升起后，打開ALS門，進(jìn)樣針將不會(huì)下落），將六通閥處的5、6號(hào)管線換接，進(jìn)行反沖，大約0.5h，重新接好管路，系統(tǒng)壓力下降明顯，平衡好色譜柱后，繼續(xù)進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)每一針的壓力在逐漸上升，隨后，對(duì)流動(dòng)相（一天一夜）過(guò)濾超聲，對(duì)針座反沖，之后每一針的壓力均正常。

（Purge閥打開壓力正常，排除泵前沒(méi)有堵塞；在針對(duì)儀器壓力增加的問(wèn)題，常用的是分段排查，找出堵塞點(diǎn)在哪兒，在進(jìn)行有針對(duì)性的清理；在樣品比較復(fù)雜的情況下，首先對(duì)針、針座進(jìn)行排查、清理；除了關(guān)注進(jìn)樣后的壓力還應(yīng)與原先方法操作的壓力進(jìn)行比較；流動(dòng)相為純水相或者低比例有機(jī)相，最好臨用新制，超過(guò)兩天需重新超聲過(guò)濾，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將管路及色譜柱沖洗干凈，并將管路填充異丙醇或甲醇）

4、色譜柱對(duì)樣品有吸附

在做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)適用性不通過(guò)（生物樣品，前3后1），前幾針?lè)迕娣e依次增加，但第一針?lè)迕娣e明顯偏小，排除儀器自身原因，因?yàn)樽銎渌麡悠窌r(shí)檢測(cè)正常，懷疑可能是色譜柱吸附樣品造成的，于是進(jìn)行驗(yàn)證，連續(xù)進(jìn)十針對(duì)照品，從第一針到最后一針的峰面積如下：3599、3975、3994、4015、4034、4055、4072、4075、4055，很明顯第一針偏小，從第四針趨于穩(wěn)定，因此可將sop進(jìn)行升級(jí)，舍棄前面幾針以排除干擾（或者購(gòu)買別的廠家的色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，檢查結(jié)果，目前僅有一個(gè)廠家的色譜柱，或者調(diào)整方法）