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有機(jī)合成中經(jīng)常會(huì)遇到微量樣品的分離，通常情況下，對(duì)于少于100毫克的樣品的純化，有以下幾種純化方法：1、直接高效液相制備色譜(Prep-HPLC)純化；2、制備薄層色譜(Prep-TLC, 俗稱爬大板，爬大板有什么奇技淫巧？)；3、微量樣品重結(jié)晶（如何重結(jié)晶？大量樣品和少量樣品一樣操作嗎？）；4、微量柱層析法。微量柱層析法，相對(duì)于上述方法，更加經(jīng)濟(jì)綠色，而且操作方便，通常十幾分鐘就可以完成，相對(duì)于爬大板，不用浸泡硅膠，避免產(chǎn)生一些不必要的雜質(zhì)。對(duì)于一些極性不是很大的產(chǎn)物，如果產(chǎn)物沒有紫外吸收，可以優(yōu)先考慮此方法。但是沒有柱子怎么柱層析呢？實(shí)驗(yàn)室中唾手可得的玻璃滴管就可以用于微量柱層析。

第一步：裝柱

塞入少量棉花，用木棒壓實(shí)，不要太緊，只需要防止硅膠漏下就可以。

裝入硅膠，在桌面上輕輕地敲一敲，將硅膠壓實(shí)，上方留4-5cm，用于上樣和加洗脫劑。

第二步：潤(rùn)柱

和過大柱子類似，先用滴管在滴管柱上方加入小極性溶劑，通過不斷加入溶劑，可以靠重力讓柱子潤(rùn)濕。如果嫌慢，直接用乳膠頭加壓，但是一定要注意，擠壓后千萬不要松開，壓完后拔下乳膠頭再松開，否則會(huì)把硅膠和溶劑吸起來。當(dāng)溶劑開始滴下時(shí)，完成潤(rùn)柱，但是一定要保持上方的溶劑不要干。

第三步：上樣

與平時(shí)過大柱子類似，也分為濕法上樣和干法上樣，具體選哪種要根據(jù)樣品的性質(zhì)決定，如果產(chǎn)物極性較大而且溶解度好，可以考慮濕法上樣。但是小編建議用干法，因?yàn)楸緛碇泳投?，濕法上樣?huì)影響部分柱效，會(huì)導(dǎo)致分離效果不佳。

第四步：洗脫

根據(jù)TLC, 選擇合適的溶劑配比【柱層析技術(shù)詳解】, 不斷加入溶劑洗脫，利用乳膠頭加壓，溶劑液面保持在硅膠上方，不要壓干。還是要注意擠壓乳膠頭后不要松開，拔下再松開。由于柱子很小可以方便的根據(jù)分離難度，調(diào)節(jié)溶劑梯度。

及時(shí)更換容器，接收不同洗脫液，由于量很少小編建議用試管接收比較好，通過TLC或者LCMS確定所需產(chǎn)物。

對(duì)于純度要求不高的樣品，盲刮Prep-TLC也可以純化，具體操作和平常的刮大板操作一樣，由于產(chǎn)物沒有紫外吸收，可以在大板的邊上切下來一條。這條板可以通過高錳酸鉀，磷鉬酸或茚三酮之類的顯色劑顯板后判斷大概位置。然后在剩下的板上畫出大概位置刮下來，純度只能看運(yùn)氣了。如果產(chǎn)物各種顯色劑都不顯板，則只能分段刮下來通過LCMS或HNMR確認(rèn)產(chǎn)物點(diǎn)，總之，都很麻煩。

參考資料

科羅拉多大學(xué)博爾德分?；瘜W(xué)和生物化學(xué)系，有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)課。