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制備培養(yǎng)基的一般流程包括稱(chēng)量、‌熔化及調(diào)pH、‌分裝、‌包扎，‌以及滅菌等步驟。‌

稱(chēng)量：‌首先，‌根據(jù)培養(yǎng)基的配方，‌準(zhǔn)確稱(chēng)取各種藥品。‌對(duì)于用量較少的藥品，‌應(yīng)先配制成溶液后再加入。‌這一步驟要求精確，‌因?yàn)榧词故俏⑿〉恼`差也可能影響培養(yǎng)基的最終效果。‌

加水：打開(kāi)滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋?zhàn)詈糜靡阎箝_(kāi)過(guò)的水，以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠，防止滅菌過(guò)程中干鍋。裝料、加蓋滅菌材料放好后，關(guān)閉滅菌器蓋，采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。

排氣：打開(kāi)排氣口（也叫放氣閥）。加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí)，維持5min，使鍋內(nèi)冷空氣完全排凈。

升壓、保壓和降壓：當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開(kāi)始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí)，控制電壓以維持恒溫，并開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間，待時(shí)間達(dá)到要求（一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃，20min）后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時(shí)，打開(kāi)放氣閥。注意不能過(guò)早過(guò)急地排氣，否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。

熔化及調(diào)pH：‌將稱(chēng)量好的藥品加入少量水（‌通常是所需水量的一半）‌中溶解，‌加熱至瓊脂全部溶解，‌并補(bǔ)足所需的全部水量。‌使用1mol NaOH和1mol HCl調(diào)節(jié)pH至要求值。‌這一過(guò)程中需要注意在加熱熔化瓊脂時(shí)要不斷攪拌，‌以防糊底。‌

分裝：‌將熔化并調(diào)整好pH值的培養(yǎng)基使用分裝器分裝入試管或三角瓶中。‌分裝時(shí)要注意不要讓培養(yǎng)基沾染試管口或瓶口，‌以防培養(yǎng)過(guò)程中容易污染雜菌。‌

包扎：‌將分裝好的試管和三角瓶塞上棉塞，‌棉塞外包一層報(bào)紙，‌用繩子扎好，‌以防止外界雜菌的污染。‌

滅菌：‌完成包扎后，‌對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。‌滅菌是確保培養(yǎng)基無(wú)菌的重要步驟，‌通常使用高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器進(jìn)行滅菌。‌

滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng)：滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，經(jīng)24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng)，可保存?zhèn)溆?；斜面培養(yǎng)基取出后，立即擺成斜面后空白培養(yǎng)；半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養(yǎng)。

干熱滅菌法：通過(guò)使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160-170℃維持1-2h。干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌。

滅菌前的準(zhǔn)備：玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi)；三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結(jié)扎緊，以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染；吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過(guò)火焰燒去，滅菌時(shí)將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行滅菌，也可用紙條斜著從吸管尖端包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。

干燥箱滅菌：將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi)，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160-170℃并恒溫1-2h，注意勿使溫度過(guò)高，超過(guò)170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會(huì)被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為120℃持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60-70℃時(shí)方可打開(kāi)箱門(mén)，取出物品，否則玻璃器皿會(huì)因驟冷而爆裂。用此法滅菌時(shí)，絕不能用油、蠟紙包扎物品。

火焰滅菌：直接用火焰灼燒滅菌，迅速?gòu)氐?。?duì)于接種環(huán)，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行滅菌。此外，在接種過(guò)程中，試管或三角瓶口，也采用通過(guò)火焰而達(dá)到滅菌的目的。

結(jié)果：記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件（溫度、壓力等），記錄高壓蒸汽滅菌的過(guò)程及注意事項(xiàng)。

注意事項(xiàng)：‌

在整個(gè)制備過(guò)程中，‌要確保使用的化學(xué)藥品是化學(xué)純的，‌以避免對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)造成不利影響。‌

使用的蒸煮鍋不應(yīng)為銅鍋或鐵鍋，‌以防微量金屬混入培養(yǎng)基中。‌

滅菌前，‌玻璃器皿等必須經(jīng)正確包裹和加塞，‌以保證滅菌后不被外界雜菌所污染。‌

滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行空白培養(yǎng)，‌以檢查是否無(wú)菌生長(zhǎng)，‌確保培養(yǎng)基的質(zhì)量。