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內(nèi)容提要：二類含殼聚糖敷料作為創(chuàng)面敷料中的一類產(chǎn)品，包括含殼聚糖、改性殼聚糖不同結(jié)構(gòu)形態(tài)和臨床預(yù)期用途的產(chǎn)品。作為與創(chuàng)面直接接觸的醫(yī)療器械產(chǎn)品，在注冊申報(bào)過程中進(jìn)行生物學(xué)評價(jià)是必不可少的環(huán)節(jié)。通過對二類含殼聚糖敷料產(chǎn)品的實(shí)例分析，探討在注冊技術(shù)審評中運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16886.1-2022《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第1 部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評價(jià)與試驗(yàn)》進(jìn)行評價(jià)的問題，為相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)、注冊及審評提供參考。

關(guān) 鍵 詞：二類含殼聚糖敷料 生物學(xué)評價(jià) 技術(shù)審評

創(chuàng)面敷料是臨床廣泛應(yīng)用的醫(yī)療器械產(chǎn)品，主要用于各類創(chuàng)面的護(hù)理，在醫(yī)療器械分類目錄中其分類編碼為14（注輸、護(hù)理和防護(hù)器械）-10（創(chuàng)面敷料），在三級目錄類下面又細(xì)分為創(chuàng)面敷貼、粉末敷料、凝膠敷料、液體/ 膏狀敷料、纖維敷料、泡沫敷料以及含殼聚糖敷料等12 個(gè)大類。這些大類主要是根據(jù)產(chǎn)品外觀形態(tài)或形式進(jìn)行劃分，僅有碳纖維和活性炭敷料、含殼聚糖敷料這兩類是依據(jù)材質(zhì)劃分出來的。其中，含殼聚糖敷料由于材料本身所具有的一些特性，以其為原材料制成的含殼聚糖敷料產(chǎn)品也備受關(guān)注，敷料所含的殼聚糖包括殼聚糖和殼聚糖衍生物，結(jié)構(gòu)上也有敷貼、粉末/ 顆粒、纖維、無紡布、海綿等多種不同形式。作為與人體創(chuàng)面直接接觸的醫(yī)療器械產(chǎn)品，在產(chǎn)品研制和注冊申報(bào)過程中進(jìn)行生物學(xué)評價(jià)是必不可少的環(huán)節(jié)。GB/T 16886系列標(biāo)準(zhǔn)是醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)的主要依據(jù)，但在具體應(yīng)用過程中除應(yīng)考慮的生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評定終點(diǎn)外，還涉及諸多具體的試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)方法的選擇及對試驗(yàn)結(jié)果的分析評定等復(fù)雜問題。研究和總結(jié)分析不同二類含殼聚糖敷料的生物學(xué)評價(jià)，對于此類產(chǎn)品的研制、注冊和技術(shù)審評具有重要意義。

1.生物學(xué)評價(jià)途徑及終點(diǎn)

二類含殼聚糖敷料產(chǎn)品的生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)途徑與其他醫(yī)療器械一樣，可以采用生物學(xué)試驗(yàn)的方式，也可以通過醫(yī)療器械/ 材料與市售產(chǎn)品的等同性比較的方式進(jìn)行評價(jià)。按照GB/T 16886.1-2022《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第1 部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評價(jià)與試驗(yàn)》[1]，醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)的系統(tǒng)方法框圖中，在明確產(chǎn)品與患者接觸并獲得物理/ 化學(xué)信息后，需要從材料（配方）、加工過程和滅菌（類型/過程細(xì)節(jié)）、幾何和物理特性、人體接觸方式和臨床使用方式四方面論證與市售器械的等同性。以材料等同性的論證為例，這個(gè)等同性不僅僅是指比較兩個(gè)材料本身在化學(xué)名稱或組成等方面是否是完全等同或一致，而是需要從毒理學(xué)方面的等同性進(jìn)行具體的比較，通過論證材料本身及其生產(chǎn)過程中可能引入的物質(zhì)（如反應(yīng)物、催化劑、溶劑、加工助劑、染色劑等），以及這個(gè)過程中產(chǎn)生的各種副產(chǎn)物，在毒理學(xué)或者生物安全性方面能否不低于臨床已使用的同類材料，這些論證均需要提供相應(yīng)的支持性數(shù)據(jù)資料。對于大多數(shù)注冊申請人來講，如通過與其他企業(yè)上市產(chǎn)品進(jìn)行等同性比較的方式評價(jià)，在實(shí)際操作過程中需要做的研究工作量巨大，且申請人自身或其委托進(jìn)行評價(jià)的機(jī)構(gòu)要具備相當(dāng)高的分析測試能力及技術(shù)水平，而且整個(gè)評價(jià)過程和最終結(jié)果也具有一定的不確定性。因此，目前注冊申請人采用等同性比較方式進(jìn)行評價(jià)多局限于與自家生產(chǎn)的上市產(chǎn)品進(jìn)行比較，通過生物學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)仍是現(xiàn)階段主要依賴的評價(jià)途徑。

采用生物學(xué)試驗(yàn)方式進(jìn)行評價(jià)，首先需要確認(rèn)產(chǎn)品與人體接觸的性質(zhì)與時(shí)間。根據(jù)《醫(yī)療器械分類目錄》，二類含殼聚糖敷料的臨床預(yù)期用途被限定為“非慢性創(chuàng)面”的應(yīng)用，且要求“所含成分不可被人體吸收”。因此，該產(chǎn)品與人體接觸時(shí)間均<30d，包括短期接觸（≤24h）和長期接觸（>24h，≤30d）兩種情形，與人體接觸性質(zhì)屬于表面接觸醫(yī)療器械中的破裂或損傷表面，依據(jù)GB/T 16886.1-2022，在已知產(chǎn)品物理和/ 或化學(xué)信息前提下，生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評定終點(diǎn)短期接觸產(chǎn)品應(yīng)包含細(xì)胞毒性、致敏反應(yīng)、皮內(nèi)反應(yīng)、材料介導(dǎo)的致熱性、急性全身毒性反應(yīng)，與人體長期接觸的產(chǎn)品在此基礎(chǔ)上還應(yīng)增加亞急性毒性和植入反應(yīng)。相較原標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16886.1-2011，可以看到對短期接觸產(chǎn)品生物學(xué)評價(jià)項(xiàng)目增加了致熱性、急性全身毒性反應(yīng)，長期接觸產(chǎn)品增加了致熱性、急性全身毒性、亞急性毒性和植入反應(yīng)。

2.生物學(xué)評價(jià)實(shí)例及分析

二類含殼聚糖敷料在外觀形態(tài)上涵蓋了敷貼、粉末/ 顆粒、纖維、無紡布、泡沫等不同形式，所含殼聚糖包括殼聚糖本身以及殼聚糖衍生物，其中敷料產(chǎn)品中所含殼聚糖衍生物以羧甲基殼聚糖占比較高。本文通過對不同類型含殼聚糖敷料的生物學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)例進(jìn)行分析，從試驗(yàn)樣品制備、各試驗(yàn)項(xiàng)目具體方法的選擇以及對試驗(yàn)結(jié)果的評價(jià)進(jìn)行分析總結(jié)。在進(jìn)行生物學(xué)試驗(yàn)時(shí)應(yīng)依據(jù)GB/T 16886.12-2017《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第12 部分：樣品制備與參照材料》[2] 進(jìn)行樣品制備，而試驗(yàn)樣品應(yīng)適用于特定的試驗(yàn)系統(tǒng)，不同產(chǎn)品和不同試驗(yàn)項(xiàng)目及產(chǎn)品本身具體情況考慮采用適當(dāng)?shù)闹苽浞椒?。在具體試驗(yàn)方法的選擇上，不同試驗(yàn)項(xiàng)目下一般會包含多個(gè)試驗(yàn)方法，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品本身特性、實(shí)際的臨床應(yīng)用及試驗(yàn)方法的可操作性等方面綜合考慮，選取適宜的方法。生物學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的評價(jià)也是一個(gè)重要的過程，有時(shí)從生物學(xué)試驗(yàn)單一的結(jié)果方面并無法完成對產(chǎn)品安全性和有效性評價(jià)，還需結(jié)合材料或產(chǎn)品本身特性以及該類產(chǎn)品的臨床應(yīng)用史等方面進(jìn)行綜合評價(jià)。

2.1 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)可以用來評估醫(yī)療器械產(chǎn)品對細(xì)胞的毒性，反映醫(yī)療器械產(chǎn)品的生物相容性問題，該試驗(yàn)方法和結(jié)果判定的依據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16886.5-2017《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第5 部分：體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)》[3]。該試驗(yàn)主要通過將醫(yī)療器械與體外培養(yǎng)的細(xì)胞接觸，觀察和測量細(xì)胞的生存率、形態(tài)變化、代謝活性等指標(biāo)來評估其對細(xì)胞的影響。體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)分為三類，分別是浸提液試驗(yàn)、直接接觸試驗(yàn)和間接接觸試驗(yàn)。依據(jù)試驗(yàn)的選擇應(yīng)盡量模擬臨床使用情況或嚴(yán)于臨床條件的原則，含殼聚糖敷料通常采用浸提液試驗(yàn)或直接接觸試驗(yàn)這兩種方式對細(xì)胞毒性進(jìn)行定量評價(jià)。而間接接觸試驗(yàn)與臨床實(shí)際使用接觸方式不同，且僅用于細(xì)胞毒性的定性評價(jià)，通常用于材料的篩選，對于采用與已上市產(chǎn)品相同材質(zhì)的產(chǎn)品，評價(jià)時(shí)一般不采用此試驗(yàn)方法。

以敷貼形式的含殼聚糖敷料為例，其通常包含涂膠基材、含殼聚糖的敷芯和可剝離的保護(hù)層組成。這三個(gè)組成部分與人體接觸的性質(zhì)各不相同：可剝離的保護(hù)層不與人體接觸，涂膠基材使用時(shí)僅與創(chuàng)面周圍的完整皮膚接觸，只有敷芯是與創(chuàng)面直接接觸的。因此對這三個(gè)組成部分應(yīng)分別進(jìn)行評價(jià)，其中可剝離的保護(hù)層不與人體接觸可免于生物學(xué)評價(jià)，涂膠基材和敷芯在通過試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)時(shí)可采用浸提液試驗(yàn)、直接接觸試驗(yàn)。

浸提液試驗(yàn)-MTT法是在醫(yī)療器械體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)中最常采用的方法。在殼聚糖敷貼產(chǎn)品生物學(xué)試驗(yàn)實(shí)例中，樣品制備使用細(xì)胞培養(yǎng)液（含10%胎牛血清的最小必需培養(yǎng)基）進(jìn)行浸提，由于含血清培養(yǎng)液能支持細(xì)胞生長且具有極性和非極性介質(zhì)特性，所以可采取單一介質(zhì)浸提：取殼聚糖敷貼的敷芯，基于3cm2/mL的比例（額外吸收試驗(yàn)樣品細(xì)胞培養(yǎng)液吸收量）；取殼聚糖敷貼的粘貼邊，基于6cm2/mL的比例，在細(xì)胞培養(yǎng)液中于（37±1）?C的溫度下，以60r/min的振蕩頻率浸提（24±2）h 制備的浸提液作為試驗(yàn)液。由于陽性對照采用10%二甲基亞砜溶液，陰性對照為聚乙烯（基于6cm2/mL比例的浸提液），介質(zhì)對照為不含試驗(yàn)樣品的細(xì)胞培養(yǎng)液。試驗(yàn)系統(tǒng)中細(xì)胞株采用小鼠成纖維細(xì)胞L929，用細(xì)胞培養(yǎng)基制備細(xì)胞懸浮液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/mL，加入96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱（5%CO2，37?C）中孵育24h，形成近匯合單層細(xì)胞，吸出原培養(yǎng)基后分別在培養(yǎng)板中加入試驗(yàn)液（產(chǎn)品浸提液）、陰性對照液（聚乙烯浸提液）、陽性對照液（10%二甲基亞砜溶液）以及介質(zhì)對照液（細(xì)胞培養(yǎng)液）。將該培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。之后移去培養(yǎng)基加入MTT溶液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，然后將孔內(nèi)液體棄去加入異丙醇振蕩，用酶標(biāo)儀測定吸光度（波長570nm），然后通過公式計(jì)算存活率：存活率（%）=100× 各供試組（試驗(yàn)組、陰性對照組、陽性對照組）吸光度/ 介質(zhì)對照組吸光度。試驗(yàn)結(jié)果包括顯微鏡下各供試組細(xì)胞形態(tài)的觀察及存活率的定量檢測兩部分。最終結(jié)果顯示試驗(yàn)組絕大部分細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞存活率為88%；陰性對照組絕大部分細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞存活率為95%；陽性對照組細(xì)胞層幾乎完全破壞，細(xì)胞存活率為2%。從試驗(yàn)結(jié)果可看出，試驗(yàn)組細(xì)胞存活率≥70%，無潛在細(xì)胞毒性。

對于所含殼聚糖為羧甲基殼聚糖的敷料產(chǎn)品，其體外細(xì)胞毒性與浸提液濃度密切相關(guān)，并受羧甲基殼聚糖的取代位置及羧基化程度影響[4]。羧甲基殼聚糖具有水溶性，也可溶解于含血清培養(yǎng)基中，在YY 0953-2015《醫(yī)用羧甲基殼聚糖》[5] 標(biāo)準(zhǔn)中，其生物學(xué)性能中明確用生理鹽水配制成含羧甲基殼聚糖2mg/mL的溶液，取此溶液進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，但在更新后的YY/T 0953-2020《醫(yī)用羧甲基殼聚糖》[6] 標(biāo)準(zhǔn)中刪除了生物學(xué)評價(jià)的具體要求及試驗(yàn)方法。依據(jù)GB/T 16886.12-2017，采用0.2g/mL的比例進(jìn)行浸提，其試驗(yàn)結(jié)果可能會表現(xiàn)出較高的細(xì)胞毒性。這與羧甲基殼聚糖本身的溶解性相關(guān)，其浸提液實(shí)際上為羧甲基殼聚糖溶液，較高的濃度會導(dǎo)致細(xì)胞處于高滲狀態(tài)，抑制細(xì)胞其生長。因此，如在較高浸提濃度下試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)出具有潛在細(xì)胞毒性時(shí)，需要注冊申請人對結(jié)果進(jìn)行分析?？蛇x取已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行平行試驗(yàn)比對的方法，通過相同試驗(yàn)條件下及浸提液逐級稀釋后細(xì)胞存活率的對比進(jìn)一步說明產(chǎn)品生物相容性是否可接受。

2.2 刺激與皮膚致敏試驗(yàn)

刺激與皮膚致敏試驗(yàn)方法和結(jié)果判定的依據(jù)為GB/T 16886.10-2017《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第10 部分：刺激與皮膚致敏試驗(yàn)》[7]。刺激試驗(yàn)分為體外刺激試驗(yàn)和體內(nèi)刺激試驗(yàn)，但目前體外皮膚刺激試驗(yàn)僅用于純化學(xué)物，不適用于醫(yī)療器械浸提液。因此，醫(yī)療器械的刺激試驗(yàn)還是采用體內(nèi)刺激試驗(yàn)，目前基本上都是通過動物皮膚/ 黏膜刺激試驗(yàn)和動物皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。

敷貼形式的含殼聚糖敷料，由于其敷芯和可粘貼背襯與人體接觸性質(zhì)不同，在刺激試驗(yàn)時(shí)可采用不同的試驗(yàn)方法。敷芯作為與創(chuàng)面直接接觸的部分，通常采用皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)以評價(jià)產(chǎn)品產(chǎn)生刺激反應(yīng)的潛能。而可粘貼的背襯只與創(chuàng)面周圍的完整皮膚接觸，可以選用皮膚刺激試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。

敷芯進(jìn)行皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)動物采用3 只體重不低于2kg 的家兔（新西蘭白兔）。制備浸提液時(shí)分別使用0.9%氯化鈉注射液（Sodium Chloride，SC）作為極性浸提介質(zhì)、棉籽油（Cottonseed Oil，SCO）作為非極性浸提介質(zhì)，浸提比例和方法與體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)一致，但浸提時(shí)間增加為（72±2）h。這是由于細(xì)胞毒性試驗(yàn)中采用的浸提介質(zhì)含有血清，長時(shí)間浸提會影響其穩(wěn)定性，性質(zhì)相對穩(wěn)定的浸提介質(zhì)SC和SCO 通常按照GB/T 16886.12-2017中推薦的加嚴(yán)浸提條件（37±1）?C、（72±2）h 進(jìn)行。試驗(yàn)空白對照采用不含試驗(yàn)樣品的浸提介質(zhì)以相同的方法制備。皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)前4~18h對家兔進(jìn)行稱重，并將其背部脊柱兩側(cè)的被毛徹底除去作為試驗(yàn)和觀察部位，按照GB/T 16886.10-2017 注射點(diǎn)排列要求，分別皮內(nèi)注射0.2mL的SC試驗(yàn)液、SCO 試驗(yàn)液、SC 對照液、SCO 對照液。在注射完成后立即觀察注射點(diǎn)即時(shí)反應(yīng)，然后觀察并記錄注射后（24±2）h、（48±2）h、（72±2）h 3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)注射部位的紅斑和水腫反應(yīng)，并按照GB/T 16886.10-2017 中的標(biāo)準(zhǔn)記分。在（72±2）h 評分后，分別將每只動物試驗(yàn)樣品或空白對照3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的全部紅斑和水腫的記分相加，再除以15，通過計(jì)算得出每只家兔試驗(yàn)樣品或空白對照的記分。然后將3 只家兔記分相加除以3，得出每一試驗(yàn)樣品或空白對照的總平均記分。試驗(yàn)樣品的記分減去空白對照的記分可得出試驗(yàn)樣品最終記分，如試驗(yàn)樣品最終記分≤1.0，則符合試驗(yàn)要求。殼聚糖敷貼的敷芯試驗(yàn)結(jié)果為SC和SCO試驗(yàn)液的家兔皮內(nèi)反應(yīng)最終記分均≤1.0，說明敷芯皮內(nèi)反應(yīng)的試驗(yàn)結(jié)果是符合標(biāo)準(zhǔn)要求的。

對于可粘貼的背襯部分，采用皮膚刺激試驗(yàn)來評價(jià)產(chǎn)生刺激反應(yīng)的潛能。試驗(yàn)動物也是采用3 只體重不低于2kg 的家兔（新西蘭白兔），將試驗(yàn)樣品（殼聚糖敷貼的粘貼邊）單次直接接觸家兔背部脊柱兩側(cè)的皮膚24h，將紗布塊同法接觸作為對照。于接觸后（24±2）h、（48±2）h、（72±2）h，對接觸部位紅斑、水腫記分，計(jì)算原發(fā)性刺激指數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果為殼聚糖敷貼的粘貼邊家兔原發(fā)性刺激指數(shù)為0.0，說明可粘貼背襯的皮膚刺激是符合要求的。

皮膚致敏試驗(yàn)是用于測定產(chǎn)品潛在皮膚致敏性的動物試驗(yàn)。目前該試驗(yàn)有三種方法：小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)、豚鼠最大劑量試驗(yàn)、封閉式貼敷試驗(yàn)。這三種方法中最大劑量試驗(yàn)是最敏感的方法，含殼聚糖敷料產(chǎn)品通常采用此試驗(yàn)方法進(jìn)行評價(jià)。殼聚糖敷貼試驗(yàn)液分別采用SC、SCO 浸提，比例與體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)一致，（37±1）?C條件下振蕩浸提（72±2）h。陽性對照為1- 氯-2,4- 二硝基苯，介質(zhì)對照采用不含試驗(yàn)樣品的浸提介質(zhì)（SC、SCO）以和試驗(yàn)液相同的方法制備，共取30 只豚鼠作為試驗(yàn)動物進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)分為皮內(nèi)誘導(dǎo)階段、局部誘導(dǎo)階段和激發(fā)階段。將SC和SCO兩種試驗(yàn)液分別注射于試驗(yàn)組豚鼠背部剃毛區(qū)，并用浸透了試驗(yàn)液的濾紙片進(jìn)行封閉固定，用以誘導(dǎo)皮膚致敏反應(yīng)。試驗(yàn)激發(fā)階段在局部誘導(dǎo)完成后14d 進(jìn)行，把試驗(yàn)液浸透的濾紙片封閉固定于試驗(yàn)組動物誘導(dǎo)階段其他未試驗(yàn)的部位- 腹部剃毛區(qū)，封閉貼敷（24±2）h 后除去，觀察并記錄在去除濾紙片后24h和48h所有動物激發(fā)部位皮膚情況，按Magnusson和Klingman分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行描述并分級，對照組動物同法操作。試驗(yàn)結(jié)果為殼聚糖敷貼SC和SCO試驗(yàn)液均未導(dǎo)致豚鼠出現(xiàn)皮膚致敏反應(yīng)。

2.3 熱原試驗(yàn)與急性全身毒性

目前，針對熱原檢測的試驗(yàn)主要有兩種，分別是熱原檢查法（家兔法）和細(xì)菌內(nèi)毒素法（鱟試劑法），細(xì)菌內(nèi)毒素是產(chǎn)生致熱反應(yīng)的因素，但材料和其他物質(zhì)也可能會導(dǎo)致致熱性，細(xì)菌內(nèi)毒素法無法全面反映醫(yī)療器械的致熱性，因此熱原檢查法（家兔法）被作為仲裁法。

在殼聚糖敷貼熱原試驗(yàn)依據(jù)的是標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16886.11-2021《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第11 部分：全身毒性試驗(yàn)》[8]，試驗(yàn)方法則按照《中華人民共和國藥典》2020 年版四部通則1142 熱原檢查法進(jìn)行，確定樣品試驗(yàn)液經(jīng)靜脈注射家兔后是否會導(dǎo)致熱原反應(yīng)。由于殼聚糖敷貼只有敷芯與創(chuàng)面接觸，所以僅需對敷芯進(jìn)行熱原試驗(yàn)。浸提介質(zhì)為SC，基于3cm2/mL的比例，（37±1）?C條件下振蕩浸提（72±2）h。試驗(yàn)時(shí)首先要選取可供熱原檢查用的家兔3 只，需每30min 測量并記錄試驗(yàn)動物的直腸溫度，共測量8 次。只有8 次體溫均為38?C~39.6?C，且最高與最低體溫相差不超過0.4?C的家兔才可使用。試驗(yàn)時(shí)按照10mL/kg的劑量，經(jīng)耳緣靜脈分別對3 只家兔進(jìn)行樣品試驗(yàn)液的注射，注射后3h 內(nèi)每隔30min測量家兔直腸溫度并記錄。試驗(yàn)結(jié)果3只家兔體溫升高均低于0.6?C，并且3 只家兔升溫總和低于1.3?C，3h 觀察時(shí)間內(nèi)家兔體溫變化在《中華人民共和國藥典》可接受的范圍內(nèi)，殼聚糖敷貼（敷芯）沒有致熱性。

急性全身毒性試驗(yàn)是用于評價(jià)在短時(shí)間內(nèi)（通常為24h內(nèi)）一次或多次接觸試驗(yàn)樣品后在72h 內(nèi)發(fā)生不良反應(yīng)的情況。對于殼聚糖敷貼產(chǎn)品，也是僅需評價(jià)敷芯部分，與完整皮膚接觸的粘貼背襯是無須進(jìn)行該試驗(yàn)的。試驗(yàn)樣品制備也是采用浸提液，浸提介質(zhì)分別使用SC和SCO，浸提比例和條件與熱原試驗(yàn)一致，對照組采用不含試驗(yàn)樣品的浸提介質(zhì)（SC和SCO）以相同的方法制備。依據(jù)GB/T 16886.11-2021《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第11 部分：全身毒性試驗(yàn)》，試驗(yàn)動物使用昆明小鼠20 只，2 個(gè)試驗(yàn)組和2 個(gè)對照組，每組5 只小鼠，試驗(yàn)前先將小鼠標(biāo)記并稱重。采用腹腔注射（IP）法，按照50mL/kg的劑量分別注入SC試驗(yàn)液、SCO試驗(yàn)液、SC對照液、SCO對照液，腹腔注射完成后立即觀察小鼠所有行為表現(xiàn)，然后觀察注射后4h、24h、48h、72h 小鼠的行為表現(xiàn)和觀測有無死亡動物，并記錄小鼠在24h、48h、72h 時(shí)的體重。試驗(yàn)結(jié)果為試驗(yàn)組與對照組小鼠均未見死亡和異常癥狀，所有動物體重均有增加，試驗(yàn)液給予試驗(yàn)小鼠后未見明顯急性全身毒性反應(yīng)。

3.小結(jié)

生物學(xué)評價(jià)是確保二類含殼聚糖敷料產(chǎn)品安全性和有效性所必須進(jìn)行的研究內(nèi)容，目前主要依據(jù)GB/T 16886 系列標(biāo)準(zhǔn)以開展相關(guān)生物試驗(yàn)的方式進(jìn)行。但在具體實(shí)施過程中，對于試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)方法及試驗(yàn)條件的選擇方面，由于醫(yī)療器械產(chǎn)品種類繁多，標(biāo)準(zhǔn)無法細(xì)化到每個(gè)產(chǎn)品，還是需要研究者根據(jù)產(chǎn)品情況具體分析和選擇。本文選取二類含殼聚糖敷料的生物學(xué)評價(jià)實(shí)例，列舉了體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)、刺激與皮膚致敏試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、急性全身毒性試驗(yàn)采用的具體試驗(yàn)方法和結(jié)果，并進(jìn)行相應(yīng)的分析，希望可以為二類含殼聚糖敷料產(chǎn)品的研制、注冊和技術(shù)審評提供一定參考。