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程序性死亡配體1（programmed - death ligand 1，PD-L1）是程序性死亡受體1（programmed - Death 1，PD 1）的主要配體，為Ⅰ型跨膜蛋白，參與細胞調(diào)節(jié)和免疫反應(yīng)，廣泛表達于抗原提呈細胞和非淋巴組織等。PD-1與PD-L1結(jié)合后，下游的脾酪氨酸激酶和磷脂酰肌醇3激酶發(fā)生去磷酸化，從而傳遞抑制性信號，發(fā)揮負性調(diào)節(jié)作用。腫瘤細胞可能表達PD-L1，PD-L1與PD-1結(jié)合，使腫瘤細胞逃避T細胞的攻擊。PD-1/PD-L1通路的阻斷現(xiàn)已證明可用于多種癌癥類型的治療，腫瘤細胞和/或腫瘤相關(guān)免疫細胞的PD-L1表達水平與免疫治療療效及患者預(yù)后密切相關(guān)。國內(nèi)外指南文件和專家共識推薦將PD-L1作為多種腫瘤免疫治療的生物標志物，以識別或輔助預(yù)測可能從免疫治療中獲益的患者。免疫組織化學方法是評估PD-L1表達狀態(tài)的有效且最常用方法。

目前我國已批準丹麥DAKO、美國Ventana、廈門艾德、蘇州邁杰公司生產(chǎn)的多項檢測試劑，用于納武利尤單抗等免疫抑制劑的伴隨診斷或補充診斷。此類產(chǎn)品較一般免疫組織化學檢測試劑而言，具有預(yù)期用途變化快、評分規(guī)則復(fù)雜、陽性判斷值來源于藥品臨床試驗三個突出特點。針對PD-L1檢測試劑的特殊性，注冊審評應(yīng)予以特殊關(guān)注并提出相應(yīng)的研究要求。

一、產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標：外觀、符合性、批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、穩(wěn)定性等?？紤]到PD-L1表達在不同腫瘤組織存在差異，其中“符合性”和“重復(fù)性”指標，應(yīng)明確采用包含不同表達水平的適用腫瘤組織類型組織片進行檢測。

二、分析性能研究

（一）免疫反應(yīng)性

1.正常組織：對30種正常人體組織，每種組織類型不少于3例，進行特異性評價，同時對著色位置及染色特點進行描述。

2.非正常組織：對相關(guān)良性、惡性病變組織進行特異性評價。如有采用申報產(chǎn)品為試驗材料進行研究的相關(guān)文獻資料，也可提交文獻資料驗證抗體試劑或檢測試劑盒與非正常組織的免疫反應(yīng)性。非正常組織包括：腎上腺皮質(zhì)癌、星形細胞癌、基底細胞癌、鱗狀上皮癌、大細胞癌、胸腺瘤、乳頭狀腺癌、小細胞未分化癌、鱗狀細胞癌、子宮內(nèi)膜透明細胞癌、移行細胞癌，淋巴瘤、惡性室管膜瘤、間質(zhì)肉瘤等。

（二）特異性

1.交叉反應(yīng)研究

應(yīng)進行與PD-1、PD-L2的交叉反應(yīng)研究，可利用免疫組織化學方法對表達不同蛋白的細胞/組織檢測，驗證抗體的特異性。也可利用其它合理的方法進行交叉反應(yīng)研究。

2.特異性識別研究

采用免疫印記法或酶聯(lián)免疫法驗證檢測試劑可特異性檢測PD-L1的性能。通過添加PD-L1抗原進行檢測或檢測PD-L1基因敲除腫瘤細胞等方法，驗證檢測試劑的特異性。

（三）精密度

考慮到不同PD-L1檢測試劑的評分規(guī)則具有較大差異，臨床中PD-L1表達情況的判讀在室間和人員間存在明顯差異，此類試劑的精密度評價應(yīng)更加充分，并在試驗設(shè)計中考慮各項影響因素。精密度研究應(yīng)采用隨機盲法進行，樣本應(yīng)為消除識別信息的預(yù)期樣本（未染色樣本），包括陰性、陽性及一定數(shù)量（建議不少于總樣本量的20%）陽性判斷值附近樣本，研究數(shù)據(jù)應(yīng)包含染色強度、評分結(jié)果及著色位置，采用合理的統(tǒng)計方法（如Wilson Score法）計算陰性一致率百分比（Negative Percent Agreement，NPA）、陽性一致率百分比（Positive Percent Agreement，PPA）、總體一致率（overall agreement, OPA）及雙側(cè)95%置信區(qū)間，并統(tǒng)計不同表達范圍水平%的一致率。研究應(yīng)制定適當?shù)慕邮軜藴剩ㄗh一致率95%置信區(qū)間下限不低于85%。

1.內(nèi)部重復(fù)性

（1）檢測內(nèi)精密度：對連續(xù)切片的預(yù)期組織類型樣本，進行檢測重復(fù)性研究。

（2）檢測間精密度

對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，包括批次（不少于3批次）、適用機型、操作方法（手工/自動）、日間和閱片者間。同一閱片者兩次閱片之間應(yīng)設(shè)置合理的清除期。

2.外部重復(fù)性

在至少3個外部檢測實驗室進行研究，研究應(yīng)包含對非連續(xù)日間、不同閱片者間、不同外部實驗室間的評價。

（四）靈敏度

研究對不同分期、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤的預(yù)期組織類型樣本的檢出能力。研究樣本應(yīng)包含不同表達水平%（0至100%）和染色強度，并計算所有樣本檢測的陽性率和不同染色強度的陽性樣本比例。

（五）參加國內(nèi)外質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動情況

建議企業(yè)積極參加國內(nèi)（衛(wèi)生計生委病理質(zhì)控評價中心）、國際質(zhì)控機構(gòu)（NordiQC、UK NEQUAS、CAP等）的質(zhì)控活動，并提交質(zhì)控結(jié)果報告。

三、陽性判斷值研究

此類產(chǎn)品的陽性判斷值在藥品的臨床試驗中確定，來源于藥物臨床試驗的療效數(shù)據(jù)。典型的陽性判斷值研究包含建立和驗證兩部分，兩部分研究樣本應(yīng)相互獨立。

建立陽性判斷值使用的樣本應(yīng)滿足藥物臨床試驗設(shè)計并考慮到不同的地理區(qū)域、民族（種族）、性別、年齡、不同病理分期等因素?？刹捎没谠u價指標如客觀緩解率（ORR）的最佳總體反應(yīng)繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve,ROC）的分析方式來選擇確定合理的陽性判斷值。

申請人也可參考既往經(jīng)驗或已上市同類產(chǎn)品，通過ROC的分析方式來擬定申報產(chǎn)品的陽性判斷值，招募受試者直接進入主要療效臨床試驗，并對參考區(qū)間進行驗證。