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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-07-31 20:34
摘 要： 建立了高效液相色譜-質(zhì)譜法同時測定退熱貼中13種解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥物。樣品用5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.1%的甲酸）-甲醇溶液（體積比為1∶1）提取，經(jīng)Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）梯度洗脫分離，采用電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測模式進行檢測，以色譜峰面積外標(biāo)法進行定量。13種化合物的質(zhì)量濃度在各自濃度范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.995～0.999 6，方法檢出限為0.12～2.5 μg/kg，定量限為0.32～8.2 μg/kg；基質(zhì)空白加入不同濃度水平的加標(biāo)回收率為93.9%～102.0%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.31%～4.81%（n=6）。該方法基質(zhì)干擾小、準(zhǔn)確、可靠，適用于退熱貼中解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥非法添加的測定。
關(guān)鍵詞： 退熱貼； 解熱鎮(zhèn)痛； 非法添加； 高效液相色譜-質(zhì)譜法
退熱貼又名退燒貼、降溫貼、冷敷貼，是一類由純化水、甘油、冰片、薄荷、高分子凝膠等組成的用于退熱降溫的貼劑類醫(yī)療器械。它還具有提神醒腦，緩解感冒引起的發(fā)燒、頭痛、牙痛、肌肉扭傷、日曬所致疼熱癥狀，最常用于兒童發(fā)燒［1?2］。
解熱鎮(zhèn)痛化學(xué)藥品是一類不僅能鎮(zhèn)痛還能降溫的藥物，是臨床常用的藥物［3?7］。常用的解熱鎮(zhèn)痛藥有以阿司匹林為代表的水楊酸類［8］，以對乙酰氨基酚為代表的苯胺類［9］，以吲哚美辛為代表的吲哚衍生類，以布洛芬為代表的丙酸類［10］，以保泰松為代表的吡格酮類等。濫用應(yīng)用解熱鎮(zhèn)痛類的化學(xué)藥品，可產(chǎn)生顯著的副作用和不良反應(yīng)，如腹部不適，惡心嘔吐，皮膚瘙癢，血液系統(tǒng)出現(xiàn)貧血、凝血障礙，神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)頭暈等［11?13］，因此該類藥物的使用和用量都需嚴格遵從醫(yī)囑，不得濫用。若發(fā)燒病人在吃完解熱鎮(zhèn)痛類的藥物后再使用添加解熱鎮(zhèn)痛類藥物的退燒貼，將超過安全用藥劑量，造成嚴重不良反應(yīng)，影響病人的健康。
為了進一步保障用藥安全，對退熱貼中解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥品非法添加的測定研究十分必要。高效液相色譜法［14］及毛細管電色譜法［15］具有環(huán)保、高效等優(yōu)點在解熱鎮(zhèn)痛類藥物的分析上得到廣泛應(yīng)用，但由于該類方法定性差，且在定量時樣品基質(zhì)易產(chǎn)生干擾，故對多個化合物的同時測定難度較大。高效液相色譜-質(zhì)譜法［3-5，16-17］具有分析速度快、選擇性強，靈敏度高，能夠準(zhǔn)確定性定量等優(yōu)點，更適用于復(fù)雜樣品的高通量快速篩查。筆者建立了高效液相色譜-質(zhì)譜法快速篩查退熱貼中13種加解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥品，并首次對市場上的退熱貼非法添加解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥品進行篩查評估，為市場用藥及器械的使用安全提供更有利的技術(shù)支持。
1、 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：AB SCIEX 4000 QTRAP型，美國AB SCIEX公司。
電子天平：（1）ME204E型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司；（2）SQP型，感量為0.01 mg，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。
數(shù)控超聲波清洗器：KQ3200DE型，昆山市超聲儀器有限公司。
布洛芬、對乙酰氨基酚、阿司匹林、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、萘普生、氨基比林、芬布芬、安替比林、羅通定、尼美舒利、酮洛芬、異丙安替比林對照品：純度（質(zhì)量分數(shù)）均大于99%，中國食品藥品檢定研究院。
甲醇：色譜純，美國賽默飛世爾科技公司。
乙腈：色譜純，德國默克公司。
甲酸銨：色譜純，上海麥克林生化科技股份有限公司。
甲酸：色譜純，美國ACS恩科化學(xué)公司。
氮氣：純度（體積分數(shù)）為99.9%，南昌市江竹化工氣體有限公司。
退熱貼樣品：市售。
實驗室用水均為超純水。
1.2 儀器工作條件
1.2.1 色譜儀
色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm，美國沃特世科技有限公司）；流動相：A相為含0.1%甲酸的5 mmol/L甲酸銨溶液，B相為甲醇；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫程序：0～2 min時A相體積分數(shù)為90%，2～3.5 min時A相體積分數(shù)由90%變?yōu)?0%，3.5～6.5 min時A相體積分數(shù)保持為10%，6.5～6.6 min時A相體積分數(shù)由10%變?yōu)?0%，6.6～10 min時A相體積分數(shù)保持為90%；流動相流量：1.0 mL/min；檢測溫度：30 ℃；進樣體積：5 μL。
1.2.2 質(zhì)譜條件
電離方式：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）。離子源噴霧電壓：正離子模式（ESI+）為5.5 kV，負離子模式（ESI-）為-4.5 kV；氣簾氣壓力：0.24 MPa；噴霧器壓力：0.31 MPa；輔助加熱氣壓力：0.34 MPa；碰撞氣壓力：0.06 MPa；離子源溫度：550 ℃。13種化合物的母離子、子離子、去簇電壓及碰撞電壓等參數(shù)見表1。
表1 13種化合物的質(zhì)譜分析參數(shù)
Tab. 1 Mass spectrometric determination parameters of 13 compounds
注：帶*的表示為定量離子
1.3 溶液制備
對照品儲備液：分別精密稱取布洛芬、對乙酰氨基酚、阿司匹林、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、萘普生、氨基比林、芬布芬、安替比林、羅通定、尼美舒利、酮洛芬、異丙安替比林對照品約10 mg，分置于13只100 mL容量瓶中，分別加入甲醇，超聲溶解并定容，各對照品的質(zhì)量濃度均為0.1 mg/mL。
混合對照品溶液：分別取13種對照品儲備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇，定容至標(biāo)線，搖勻，其中各組分質(zhì)量濃度均為10 μg/mL。
系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別量取適量的混合對照品溶液，用含0.1%甲酸的5 mmol/L甲酸銨溶液與甲醇（體積比為1∶1）混合溶液（以下簡稱甲酸銨-甲醇混合溶液）稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為5、10、20、50、80、100 ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
樣品溶液：用剪刀將退熱貼樣品剪成小于0.5 cm×0.5 cm的小塊樣品，精密稱取1.00 g樣品，置于50 mL離心管中，加入甲酸銨-甲醇混合溶液30 mL，超聲30分鐘，再用甲酸銨-甲醇混合溶液定容至標(biāo)線，搖勻，過濾。
1.4 定量方法
按1.2儀器工作條件測定樣品溶液曲線法計算出各化合物的含量。
2、 結(jié)果與討論
2.1 樣品提取條件的優(yōu)化
退熱貼的組成相對簡單，空白基質(zhì)產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)對實驗的影響較小，故只對提取溶劑進行了優(yōu)化。因所需檢驗的成分均溶于甲醇，故選擇甲醇和甲酸銨-甲醇混合溶液作為提取溶劑，并進行比較，實驗發(fā)現(xiàn)使用甲酸銨-甲醇混合溶液提取所得的樣品溶液中各色譜峰峰型更好且信號更強。
2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化
根據(jù)13種化合物的結(jié)構(gòu)特點，在參閱文獻9和11后，阿司匹林、布洛芬以及尼美舒利選擇了電噴霧源正離子模式（ESI-），其他10個化合物采用電噴霧源正離子模式（ESI+），均進行多反應(yīng)監(jiān)測方式（MRM）進行試驗。
值得注意的是，其中雙氯芬酸鈉在溶液中呈去鈉加氫的方式進行電離的，故在確認母離子時選擇的質(zhì)荷比為296.1。而阿司匹林在負離子模式下呈去羧基的方式進行電離，故選擇質(zhì)荷比為137.1的碎片離子作為母離子。
2.3 液相色譜條件的優(yōu)化
因樣品中含有甲醇，為了減小效溶劑效應(yīng)，分別選用水-甲醇、0.1%甲酸溶液-甲醇、甲酸銨-甲醇混合溶液三組流動相，進行梯度洗脫進行比較試驗，結(jié)果表明，甲酸銨-甲醇混合溶液得到的色譜峰峰型更好，靈敏度更高，具體優(yōu)化的梯度條件見1.2.1，所得各色譜峰的定量離子圖見圖1。
圖1 13種化合物定量離子色譜圖
Fig. 1 Quantitative ion chromatograms of 13 compounds
2.4 線性方程、檢出限與定量限
精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按1.2色譜條件測定，以各成分質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計算線性方程和相關(guān)系數(shù)。將混合對照品溶液用甲酸銨-甲醇混合溶液逐級稀釋，按1.2色譜條件進行測定，以3倍信噪比對應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限，以10倍信噪比對應(yīng)的質(zhì)量濃度為定量限。
13種化合物的質(zhì)量濃度在5.070～108.8 μg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限見表2。
表2 13種化合物質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限、定量限
Tab. 2 Linear range，linear equation，correlation coefficient，detection limit, and quantification limit of 13 compound
2.5 加標(biāo)回收與精密度試驗
分別取陰性退熱貼樣品各1.0 g，置于12支50 mL離心管中，其中6份分別加入0.05 mL混合對照品溶液，另外6份分別加入0.4 mL混合對照品溶液，按樣品溶液處理方法進行加標(biāo)樣品制備，照1.2色譜條件分別進行測定，測定結(jié)果見表3。由表3可知，13種化合物平均回收率為93.9%～102.0%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.31%～4.81%，表明該方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。
表3 加標(biāo)回收試驗結(jié)果
Tab. 3 Results of recovery test
3、 結(jié)語
建立了13種解熱鎮(zhèn)痛類化合物的高效液相色譜-質(zhì)譜法，并首次用于測定退熱貼。該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，具有簡單、快速、高效等優(yōu)點。該研究為建立退熱貼的檢驗標(biāo)準(zhǔn)奠定了一定的基礎(chǔ)，對提升我國退熱貼的安全監(jiān)管具有重要意義。
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引用本文： 傅小紅，陳思，姜偉，等 . 高效液相色譜-質(zhì)譜法同時測定退熱貼中13種解熱鎮(zhèn)痛類化學(xué)藥物［J］. 化學(xué)分析計量，2024，33（6）：34. (FU Xiaohong, CHEN Si, JIANG Wei, et al. Simultaneous determination of 13 antipyretic and analgesic chemical drugs in antipyretic patches by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(6): 34.)
來源：化學(xué)分析計量
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