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有關(guān)物質(zhì)研究一直是藥物藥學研究和評價中的重點和難點。隨著我們對有關(guān)物質(zhì)認識的不斷深入，對有關(guān)物質(zhì)的技術(shù)要求也在不斷提高，其中對有關(guān)物質(zhì)進行定性（鑒定）研究已經(jīng)成為有關(guān)物質(zhì)研究技術(shù)要求的重要組成部分，受到廣泛關(guān)注。但目前有關(guān)物質(zhì)的定性研究仍然是國內(nèi)有關(guān)物質(zhì)研究中的薄弱環(huán)節(jié)，研究水平與國外先進國家相比有較大的差距，也限制了我國藥品研究水平和藥品質(zhì)量提高，需要引起國內(nèi)研發(fā)者的充分重視，主動進行深入研究，提高研究水平。

對藥物中的有關(guān)物質(zhì)進行定性研究具有重要意義，通過對有關(guān)物質(zhì)的定性研究，我們可以獲得有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，分析其形成過程，合成時可設(shè)法避免該雜質(zhì)的形成，或經(jīng)純化使之降至可接受的水平。另外，還可以通過檢索毒性物質(zhì)數(shù)據(jù)庫獲知該雜質(zhì)的毒性數(shù)據(jù)，為其限度的確定提供有力的依據(jù)。同時，定性研究也是分析方法確定的重要參考，對貯藏條件的確定也有指導(dǎo)意義。如果不了解有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，后續(xù)的研究將無法繼續(xù)進行。

對藥物中的有關(guān)物質(zhì)進行定性分析也是我國藥品研發(fā)與國際接軌的需要。按照ICH Q3A/Q3B指導(dǎo)原則以及2005年SFDA《化學藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，對藥物中超過鑒定限度的有關(guān)物質(zhì)皆應(yīng)明確其來源，并推測可能的結(jié)構(gòu)。我國的藥物研發(fā)要想與國際接軌，就必須在有關(guān)物質(zhì)研究的完整性和規(guī)范性上符合相關(guān)的要求。

按照研究方法的不同，有關(guān)物質(zhì)的定性研究可以分為理論推導(dǎo)法、直接測定法和間接測定法等，在實際的應(yīng)用中，這幾種方法常常結(jié)合使用，相互印證。一般而言，由于有關(guān)物質(zhì)的定性研究不能像原料藥的結(jié)構(gòu)確證一樣提供全面的信息，因而需要盡可能采用多種方法（直接測定法例外），提供盡可能多的信息和證據(jù)，否則，有可能得到錯誤的結(jié)論。下面對幾種方法進行分別說明：

1、理論推導(dǎo)法

理論推導(dǎo)法是藥物化學家通過分析化合物的結(jié)構(gòu)及其合成路線，推測可能產(chǎn)生的雜質(zhì)。理論推導(dǎo)法是獲得有關(guān)物質(zhì)定性分析的極為重要的手段，也可以給其他方法提供重要的指導(dǎo)。通過理論推導(dǎo)，我們可以對藥物的雜質(zhì)類型有一個初步的了解，對于后續(xù)的測定非常有用，因此，理論推導(dǎo)法也可以稱為雜質(zhì)譜分析。關(guān)于雜質(zhì)譜分析，中心已有電子刊物進行了詳細說明。需要強調(diào)的是，由于理論推導(dǎo)大多需要研究者有較深厚的合成背景，因而需要質(zhì)量分析人員與合成人員的密切配合，深入了解藥物的結(jié)構(gòu)特定和詳細的合成路線。另外，由于理論推導(dǎo)需要對合成路線中所有的雜質(zhì)進行分析，因此需要了解每一步反應(yīng)。對于采用外購中間體進行一步或幾步反應(yīng)得到的產(chǎn)品，由于缺乏必要的信息，對于有關(guān)物質(zhì)的定性研究十分不利，因此一般不建議采用這種合成方法。

理論推導(dǎo)法可以采用以下幾種方式：

（1）分析起始原料中可能存在的雜質(zhì)

起始原料對于藥物中的雜質(zhì)譜的種類具有決定作用，通過對起始原料中雜質(zhì)的分析，可以推測部分中間體及終產(chǎn)物中可能存在雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。例如：苯環(huán)衍生物的4-位鹵化物中常會混有1-位鹵化物，以其為起始原料則終產(chǎn)品中可能會生成1-位鹵代的副產(chǎn)物。如氟哌啶醇結(jié)構(gòu)為4-氟產(chǎn)物，通過對其起始原料的分析推測1-氟取代物是其可能的有關(guān)物質(zhì)之一。

（2）分析中間體雜質(zhì)

化學反應(yīng)一般不可能實現(xiàn)100％的轉(zhuǎn)化，上一步反應(yīng)的原料就可能成為后續(xù)反應(yīng)乃至終產(chǎn)品中的雜質(zhì)。例如：鹽酸普魯卡因的合成，由于還原反應(yīng)的不徹底，硝基卡因混入后續(xù)步驟中，最后成為終產(chǎn)品中的一個主要雜質(zhì)。

（3）分析副反應(yīng)及副反應(yīng)產(chǎn)物

化學反應(yīng)往往會存在副反應(yīng)，因此分析可能的副反應(yīng)路線，就可以推測某些雜質(zhì)的形成途徑。分析副反應(yīng)及副反應(yīng)產(chǎn)物是推測終產(chǎn)品中雜質(zhì)類型和結(jié)構(gòu)的最為重要的途徑之一。例如：如在某結(jié)構(gòu)中引入反式雙鍵，如果采用Wittig反應(yīng)，則可能會產(chǎn)生一定量的順式產(chǎn)物，該順式產(chǎn)物及其后續(xù)衍生物即成為終產(chǎn)品中可能存在的有關(guān)物質(zhì)。

（4）推測降解產(chǎn)物

通過對藥物本身的性質(zhì)的分析可以推測可能的降解產(chǎn)物。通過對藥物中的不穩(wěn)定基團和活潑基團進行分析，可以初步推測藥物的降解途徑和降解產(chǎn)物。如常見的酯鍵（包括內(nèi)酯）、酰胺鍵（包括內(nèi)酰胺）、季銨鍵等不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)以及酚羥基、噻吩基、吡啶基、醛基等活潑基團都容易生成降解物。例如：二肽藥物甘氨酰-谷氨酰胺，在水溶液中易發(fā)生環(huán)合反應(yīng)生成環(huán)-（甘氨酰-谷氨酰胺），酰胺鍵水解后生成的谷氨酸還可能會生成雜質(zhì)焦谷氨酸，這些雜質(zhì)都是質(zhì)控研究的重點。再如：阿曲庫銨結(jié)構(gòu)中有酯鍵和季銨機構(gòu)，通過分析其機構(gòu)即可預(yù)測酯水解產(chǎn)物和Hofmann消除反應(yīng)產(chǎn)物是其主要的有關(guān)物質(zhì)，需要進行相應(yīng)的控制。

2、直接測定法

理論推導(dǎo)法是有關(guān)物質(zhì)定性研究的重要途徑，通過對化合物結(jié)構(gòu)和合成路線的深入分析，可以為后續(xù)的研究提供非常重要的信息，起到事半功倍的效果。但理論推導(dǎo)法僅僅是對藥物中可能存在的有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)的預(yù)測，有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)最終還是需要通過一系列的試驗測定來確定。測定方法可分為直接測定法和間接測定法。

直接測定法是直接從藥物中分離得到特定雜質(zhì)，然后再像原料藥結(jié)構(gòu)確證一樣通過四譜分析來確定有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。直接測定法是確定有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)的最直觀、最有效的手段，其優(yōu)點是準確，提供的證據(jù)充分，如有可能應(yīng)盡可能進行直接測定。但直接測定法的缺點是：費時費力，當藥物中的雜質(zhì)種類較多、性質(zhì)接近時，會給雜質(zhì)的分離純化工作帶來較大困難，而且當雜質(zhì)的量較小時難以獲得充足的樣品進行測定。

有關(guān)物質(zhì)的獲得可通過制備HPLC法獲得，還可通過制備TLC法獲得，當有關(guān)物質(zhì)的量較大或與主成分分離情況較好時，還可以采用柱分離的方法或改變結(jié)晶條件的方法獲得。

可以探索通過各種強制降解試驗刻意增加某些雜質(zhì)的量，也可在合成研究中模擬最差工藝條件進行合成，以獲得盡可能多的雜質(zhì)進行下一步的研究工作。

3、間接測定法

直接測定法適用于雜質(zhì)的量較大時進行測定，當樣品中的雜質(zhì)量較小，且雜質(zhì)的分離較為困難時，可以通過間接測定法確定雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。需要指出的是：由于間接測定只能提供雜質(zhì)的部分信息，因而需要至少2種以上的間接證據(jù)，并與理論推導(dǎo)法進行結(jié)合才能初步確定化合物的結(jié)果，其結(jié)構(gòu)的最終確定仍需要富集一定量的雜質(zhì)進行直接測定。間接測定有以下幾種方法：

（1）HPLC峰保留時間對比法

HPLC峰保留時間對比法對有關(guān)物質(zhì)的研究具有重要的意義。在雜質(zhì)量很小的情況下，我們首先可以推測有關(guān)物質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)，然后取預(yù)測的已知化合物與取含雜質(zhì)的藥物，在同樣的色譜條件下看已知化合物與該雜質(zhì)的保留時間是否一致。也可以取已知化合物添加入含雜質(zhì)的藥物中，在擬確定雜質(zhì)的峰面積是否有變化。

HPLC峰保留時間法的另一個重要作用是“作標記”，當新藥的臨床前研究中顯示某特定雜質(zhì)在多批樣品中固定出現(xiàn)，且在HPLC圖譜中位置相對固定，但尚不能完全確定其結(jié)構(gòu)時，可將其作為“特定的未知雜質(zhì)”，在質(zhì)量標準中用相當保留時間（RRT）表示該雜質(zhì)的情況，進行后續(xù)的毒理學研究和臨床研究，不影響該藥物的研發(fā)向前推進。待積累多批樣品的數(shù)據(jù)和一定量的樣品后再進行定性研究。

（2）UV法

UV法是利用二極管陣列檢測器，觀察擬定性有關(guān)物質(zhì)的紫外吸收情況，并測定該雜質(zhì)的最大吸收和最小吸收的數(shù)據(jù)，初步確定該雜質(zhì)結(jié)構(gòu)中可能存在的官能團，也可以與已知化合物進行紫外吸收情況的對比，為有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)的最終確定提供有用信息。

（3）LC-MS/GC-MS法

 液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）和氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）是在不得到純的雜質(zhì)的情況下獲得的該雜質(zhì)的質(zhì)譜信息。LC-MS/GC-MS是獲得雜質(zhì)信息的有效手段，也為定性分析提供較為可信的證據(jù)。通過LC-MS/GC-MS，我們可以獲得各個雜質(zhì)的可能分子量，或進一步通過二級質(zhì)譜獲得各雜質(zhì)的裂解情況，為解析化合物的結(jié)構(gòu)提供直接證據(jù)。

（4）其他新方法

目前國外還有LC-IR和LC-HMR等聯(lián)用技術(shù)，在不分離雜質(zhì)的情況下可以在線獲得雜質(zhì)的IR圖譜甚至是核磁共振圖譜，獲得與直接測定法相近的效果，這些聯(lián)用技術(shù)具有方便、快捷、高效、準確的特點，是有關(guān)物質(zhì)定性研究的理想方法。目前LC-IR或LC-HMR儀器的使用還不普及，測定方法也有待完善。但由于在線聯(lián)用技術(shù)的極大優(yōu)勢，可能成為將來有關(guān)物質(zhì)定性研究的主流方法。