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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-08-07 21:33
作者：王玉 楊陽 鄭秀娥 崔濤 李國勇 耿友軍 夏文龍
單位：山東省食品藥品審評查驗中心 （山東 濟南 250014）
內(nèi)容提要：文章主要針對按照第二類醫(yī)療器械管理的臨床化學體外診斷試劑產(chǎn)品，以堿性磷酸酶測定試劑盒為例，從適用范圍、性能評估、臨床評價等方面，深入探討產(chǎn)品注冊申報過程中的技術(shù)審評規(guī)范，進一步提高審評審批時效，為企業(yè)注冊人員和審評人員提供參考和幫助。
關(guān)鍵詞：臨床化學體外診斷試劑 技術(shù)審評 審評規(guī)范
體外診斷產(chǎn)業(yè)是醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)的重要分支，是臨床醫(yī)生決定后續(xù)治療方案的科學依據(jù)，在疾病的診療過程中發(fā)揮重要的作用[1]。臨床化學體外診斷試劑主要用于血常規(guī)、糖代謝、血脂、肝功能、腎功能、心血管疾病、微量元素等物質(zhì)的檢測，是國內(nèi)起步早、技術(shù)成熟、市場格局穩(wěn)定的細分領(lǐng)域。因該類產(chǎn)品進入門檻和技術(shù)壁壘較低，在產(chǎn)品注冊申報中仍占較大比重，規(guī)范此類產(chǎn)品的技術(shù)審評規(guī)范，可進一步提升技術(shù)審評時效。本文主要依托于本單位承擔的國家藥品監(jiān)督局器械技術(shù)審評中心指導原則項目，對全國范圍內(nèi)部分從事生化診斷產(chǎn)品研制及生產(chǎn)的企業(yè)開展調(diào)研，深入探討此類產(chǎn)品研發(fā)及注冊申報過程中的常見問題。
1.適用范圍
本文所指臨床化學體外診斷試劑，是指基于分光光度法原理，體外定量檢測臨床化學相關(guān)檢測項目所用的體外診斷試劑，并提供治療監(jiān)測、輔助診斷、健康狀況評估等信息[2]。
2.分析性能評估
應在產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確定的基礎(chǔ)上，采用滿足質(zhì)量管理體系要求下生產(chǎn)的產(chǎn)品進行分析性能評估[3]。分析性能評估，應選擇預期使用的真實臨床樣本，采用多批產(chǎn)品進行研究。若申請人聲稱該產(chǎn)品適用于不同機型，則需要在其聲稱的所有適用機型上進行性能評估。
2.1 樣本穩(wěn)定性
注冊申請人應充分考慮樣本采集、處理、運輸及保存等過程中的條件，分別進行評價研究。評價內(nèi)容主要包括建議的保存條件、允許的凍融次數(shù)、抗凝劑、防腐劑等。臨床檢驗中，如堿性磷酸酶的檢測，血清樣本2?C~8?C保存可保存4d，-20?C可保存6 個月，需對不同保存條件及時間的樣本進行檢測，設(shè)計合理的檢測時間，確定樣本穩(wěn)定性。對于可冷凍保存的樣本，還需研究樣本的凍融次數(shù)。對于穩(wěn)定性差、易降解的樣本，如血漿樣本中的葡萄糖檢測，因在室溫條件下，易發(fā)生糖酵解作用，建議采樣后及時檢測。
2.2 適用的樣本類型
血清、血漿、尿液等是臨床化學體外診斷試劑檢測常用的樣本類型，需對產(chǎn)品樣本采集過程中常用的抗凝劑、防腐劑等添加劑進行確認。對堿性磷酸酶的檢測，由于乙二胺四乙酸鈉鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽等對堿性磷酸酶活性有干擾作用，血清、肝素抗凝血漿則是堿性磷酸酶測定的適宜樣本。對于同源樣本，如血清和血漿，可采用一定數(shù)量的血清、血漿同源樣本進行對比試驗的方法，證明不同樣本類型是否可比[3]。如果選擇具有代表性的樣本類型代替其他可比的樣本類型進行分析性能評估，應說明原因并提供證據(jù)支持。
2.3 分析靈敏度
采用已知濃度/ 活性的樣本，在試劑聲稱的參數(shù)下進行檢測，記錄產(chǎn)生的吸光度變化。換算為n 單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化（ΔA/min）。建議選擇正常參考值附近樣本或病理高值樣本進行分析靈敏度研究[4]。
2.4 空白限、檢出限及定量限
空白限指空白樣本（如生理鹽水、純化水等）可能觀察到的最高測量值；檢出限指儀器能檢測的被測物最低濃度，一般由多個獨立的低濃度（含被測物）樣本的檢測結(jié)果獲得；定量限是指在規(guī)定測量條件下，滿足申請人聲稱的正確度及精密度，能測量的樣本中可被檢測量的最低濃度。申請人應根據(jù)產(chǎn)品的具體情況，選擇適用的方法進行空白限、檢出限、定量限建立及驗證。在臨床化學體外診斷試劑的前期研發(fā)過程中，申請人可根據(jù)產(chǎn)品情況和臨床試劑應用需求，對產(chǎn)品不適用的情況，應提供充分說明。
2.5 正確度
正確度是評價系統(tǒng)誤差的性能特征，通常用偏倚來表示。正確度評價中常見的研究方法包括參考物質(zhì)檢測、方法學比對或回收試驗，申請人可選擇適合的方法進行研究。
推薦的參考物質(zhì)包括有證參考物質(zhì)或國家/ 國際標準品、參考品，具有互換性的正確度控制物質(zhì)，由參考方法賦值的臨床樣本等。質(zhì)控品、產(chǎn)品校準品不可用于正確度評價。若所研究的被測物有國家標準品，如總膽紅素、肌酐等，應優(yōu)先采用國家標準品進行正確度評價。
方法學比對研究中，優(yōu)先選擇參考測量程序或標準方法，其次可選擇臨床廣泛應用、質(zhì)量普遍認可的已上市同類產(chǎn)品進行比對。應選擇可覆蓋試劑測量范圍的臨床樣本進行檢測，臨床樣本濃度并盡可能在測量范圍內(nèi)均勻分布。每個樣本可一次檢測，也可重復多次檢測，并評價醫(yī)學決定水平附近濃度的偏倚。
回收試驗是通過在臨床樣本中加入標準溶液或純品，配制成回收樣本，進行檢測。為盡量減小樣本基質(zhì)效應對檢測的影響，回收試驗中加入溶液的體積一般不超過10%。
2.6 精密度
精密度主要反映隨機測量誤差，通常用方差、標準差或變異系數(shù)來表示。申請人根據(jù)產(chǎn)品情況和臨床實際應用需求，進行重復性、實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度等的研究。重復性是在測量條件基本不變的情況下產(chǎn)生的變異，為使評估更符合臨床應用場景，可采用20×2×2 的試驗設(shè)計，即檢測20d，每天檢測2 批，每批重復測量2 次。實驗室間精密度研究中應考慮操作人員、設(shè)備、環(huán)境條件、時間等可變因素的影響。樣本濃度應包括測量區(qū)間高、中、低至少3 個濃度水平，適用時，應由醫(yī)學決定水平附近或參考值附近樣本的檢測點。
2.7 線性區(qū)間
線性區(qū)間建立時，建議配制出較預期線性區(qū)間更寬的9個左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本檢測3 次，計算平均值。根據(jù)申請人選擇的統(tǒng)計分析方法，計算線性方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷統(tǒng)計結(jié)果是否滿足可接受標準。對線性區(qū)間的驗證，可采用接近線性區(qū)間的高值、低值樣本按比例稀釋獲得至少5 個稀釋濃度，每一濃度至少測定2 次，計算檢測結(jié)果的均值，求出線性方程。
超出線性區(qū)間濃度的樣本，如可稀釋后進行檢測，申請人需要研究適用的稀釋液和稀釋倍數(shù)，并確定試劑的可報告區(qū)間。
2.8 校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）
臨床化學體外診斷試劑若包含校準品、質(zhì)控品，應提供校準品量值溯源資料和質(zhì)控品賦值資料。校準品量值溯源資料應明確校準品溯源鏈、詳細說明校準品的溯源頂端選擇的有證參考物質(zhì)或參考測量程序，溯源鏈的逐級傳遞過程、校準品不確定度、產(chǎn)品校準品互換性資料等。質(zhì)控品賦值資料應提供質(zhì)控品在不同適用機型上賦值及驗證的資料。若校準品/ 質(zhì)控品的基質(zhì)與產(chǎn)品預期適用的臨床真實樣本不一致，應進行基質(zhì)效應的相關(guān)研究。
2.9 干擾物質(zhì)研究
研究者應對與待測樣本具有潛在干擾作用的物質(zhì)進行研究，并結(jié)合臨床實際需求選擇適用的干擾物質(zhì)進行評價，并提供相關(guān)資料。干擾物質(zhì)評價的方法可采用添加干擾物的方式進行，也可使用臨床樣本進行評價。常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、膽固醇、類風濕因子、抗壞血酸等；常見的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（如抗凝劑、防腐劑等）、患者服用的藥物、食物及其代謝物等，同時應充分考慮文獻報道中的關(guān)于類似試劑或測量程序中存在的干擾物質(zhì)。
3.穩(wěn)定性
應包括研究方案、研究報告和研究數(shù)據(jù)。穩(wěn)定性研究包括實時穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性等。試劑穩(wěn)定性研究應考慮可能影響試劑性能或效果的因素，考慮環(huán)境因素的變化，充分驗證在最不利條件下的產(chǎn)品穩(wěn)定性。
實時穩(wěn)定性也稱貨架穩(wěn)定性，在制造商聲稱的儲存條件下，保存至失效期的時間內(nèi)，評估體外診斷試劑的各項性能特性。需要選擇至少3批申報試劑開展穩(wěn)定性研究。申請人應根據(jù)實際情況設(shè)定合適的檢驗試驗間隔，若產(chǎn)品有效期為1 年，可選擇每隔3~4個月進行檢驗。
使用穩(wěn)定性應對試劑所包含的所有組分的開封穩(wěn)定性進行評估，應至少提交一批申報產(chǎn)品的開封穩(wěn)定性研究資料。若試劑中包含凍干粉，應提供復溶穩(wěn)定性研究資料。若試劑可冷凍保存且可多次使用，需提供試劑凍融次數(shù)的研究資料。如試劑中包含校準品，還應提供校準穩(wěn)定性或校準頻率的研究資料。明確試劑在使用過程中需滿足的環(huán)境條件。堿性磷酸酶的測定，在堿性條件下進行，開封試劑可能因吸收空氣中的二氧化碳而使pH降低，影響測定結(jié)果，應注意開封試劑的使用時間，采用合適的校準計劃。
運輸穩(wěn)定性主要評估體外診斷試劑運輸過程中環(huán)境條件的變化對其實時穩(wěn)定性及使用穩(wěn)定性的影響。需要選擇至少1 批申報試劑進行運輸穩(wěn)定性，并提交相應的研究資料，應充分考慮試劑運輸過程中可能遭遇的各種條件，如高溫、低溫、反復凍融、濕度、堆放、跌落、振動等影響因素。運輸穩(wěn)定性可結(jié)合實時穩(wěn)定性研究開展，即將運輸后的試劑按照企業(yè)聲稱保存條件，保存至有效期末，根據(jù)設(shè)定的時間間隔進行評估，以確定試劑穩(wěn)定性是否受到運輸條件的影響。
4.參考區(qū)間
參考區(qū)間是產(chǎn)品的重要屬性，是被測物在正常人群中的測量值范圍。參考區(qū)間相關(guān)研究應在產(chǎn)品完成前期研發(fā)且產(chǎn)品定型以后完成。申請人可以選擇建立或驗證的方式確定申報產(chǎn)品的參考區(qū)間。參考區(qū)間的建立一般包括如下過程：參考人群的選擇、樣本量計算與確定、樣本檢測、檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析、計算參考限值、得出參考區(qū)間[5]。參考區(qū)間研究過程中，申請人應根據(jù)檢測結(jié)果的分布情況（正態(tài)分布或偏態(tài)分布），選擇合理的統(tǒng)計學方法建立參考區(qū)間[5]。臨床化學檢測項目為常規(guī)檢測項目，應在滿足相關(guān)法規(guī)及指導原則相關(guān)要求的情況下，引用臨床診療共識、診療指南等普遍認可的參考區(qū)間，采用驗證的方法確定試劑的參考區(qū)間。通過此種方法確定的參考區(qū)間既可保證檢驗結(jié)果的權(quán)威性，也可實現(xiàn)不同檢驗實驗室間的檢驗結(jié)果互認，但申請人應進行充分的驗證[6]。
無論是建立或驗證參考區(qū)間，都要保證參考區(qū)間的可溯源性。記錄參考區(qū)間研究過程中的所有步驟，如參考個體選擇、分析前因素、樣本檢測、統(tǒng)計分析方法等。由于參考區(qū)間研究中受所選人群受地域、人種等因素的限制，因此在臨床應用中，建議各臨床實驗室建立自己的參考范圍。
5.臨床評價
臨床評價包括臨床評價和臨床試驗兩種評價途徑[7]。對生產(chǎn)工藝成熟、技術(shù)原理明確，且屬于列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》的項目，可開展免于進行臨床試驗的臨床評價，相關(guān)資料應符合《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導原則》的相關(guān)要求。對于未列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》、涉及自測的產(chǎn)品，申請人應進行臨床試驗，試驗過程應符合《醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》的相關(guān)要求、試驗設(shè)計、數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析等應符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的要求。
5.1 受試人群及樣本要求
臨床評價應選擇納入預期用途聲稱的適用人群樣本，同時考慮干擾因素，樣本濃度覆蓋試劑測量區(qū)間，并注意各濃度水平均應包含一定數(shù)量的樣本。盡量覆蓋各類適用人群，如性別、年齡等。例如，對血糖檢測建議納入不同年齡、不同糖尿病類型的人群。入組樣本數(shù)量方面應滿足統(tǒng)計學要求，一般不少于100 例。
臨床評價中應采用真實臨床樣本。如堿性磷酸酶測定試劑盒進行臨床評價，若臨床血清樣本無法覆蓋其測量區(qū)間，應在充分說明無法獲得的依據(jù)的情況下，可采用人工制備樣本。人工制備樣本可以是稀釋或者處理去除堿性磷酸酶獲得的低濃度樣本、或添加堿性磷酸酶獲得的高濃度樣本，需要注意人工制備樣本不可超出總樣本量的20%，稀釋或添加過程中要考慮基質(zhì)效應。
5.2 方法學比對
臨床化學體外診斷試劑多為常規(guī)檢測項目，在臨床廣泛應用，已有較多產(chǎn)品上市，采用同品種方法學比對是較為經(jīng)濟合理的研究方法。對比試劑應選擇已獲批準上市的、與待評價試劑具有相同預期用途的產(chǎn)品。此外，申請人需提供對比試劑和待評價試劑的基本原理、性能指標、參考區(qū)間等內(nèi)容的比對分析，并說明可能存在的差異對臨床樣本性能檢測的影響。
5.3 統(tǒng)計學分析
收集臨床樣本的檢測數(shù)據(jù)后，首先繪制散點圖和差異圖，對數(shù)據(jù)進行分析，通過散點圖和差異圖，來觀察檢測數(shù)據(jù)是否覆蓋了被測物檢測范圍，是否存在離群值等。根據(jù)散點圖和差異圖判斷數(shù)據(jù)滿足的假設(shè)前提，選擇確定最佳的回歸分析方法，評估待評價試劑和對比試劑的檢測結(jié)果的一致性，并對評價指標進行假設(shè)檢驗。
6.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告
6.1 主要性能指標
臨床化學體外診斷試劑產(chǎn)品作為定量檢測試劑，應包含以下性能指標：試劑外觀、裝量、空白吸光度、準確度、精密度、分析靈敏度、線性區(qū)間等。如產(chǎn)品包含校準品和質(zhì)控品，可設(shè)定下列性能指標：校準品性狀、正確度、均勻性等，質(zhì)控品外觀性狀、預期結(jié)果、均勻性等。產(chǎn)品技術(shù)要求的制定可參照相應的行業(yè)標準的要求，具體性能指標需結(jié)合產(chǎn)品方法學特性。
6.2 檢驗方法
申請人需根據(jù)產(chǎn)品的具體特征、性能指標等設(shè)定產(chǎn)品的檢驗方法，推薦優(yōu)先選擇已建立的、廣為接受的標準檢驗方法；也可采用申請人自建的檢驗方法。檢驗方法應有可操作性、可重復性，需明確檢驗過程中的試驗步驟、檢測次數(shù)、檢測結(jié)果的計算方法和表示方式等，此外還需明確檢測過程中所用樣本的制備方法。
6.3 產(chǎn)品檢驗報告
檢驗用產(chǎn)品應在原材料和工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)。產(chǎn)品適用于國家標準品的，應當使用國家標準品對產(chǎn)品檢驗。申請人可提交滿足相關(guān)要求的自檢報告，也可提交委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)出具的檢驗報告。
7.說明書
說明書作為體外診斷試劑產(chǎn)品注冊證附件，是注冊申報中最重要的資料之一。說明書中載明了關(guān)于產(chǎn)品檢驗方法、檢測樣本要求、產(chǎn)品儲存條件預期使用人群、產(chǎn)品技術(shù)原理、產(chǎn)品性能指標等重要信息，用于指導檢驗人員正確使用產(chǎn)品。說明書中的儲存條件及有效期、樣本要求、參考區(qū)間、干擾物質(zhì)、性能指標等數(shù)據(jù)相關(guān)信息，應提供相應支持性資料，并與研究結(jié)果保持一致。說明書編寫過程中應注意如下問題：①明確試劑各組分的含量或濃度，對于包含多組分的試劑盒應說明不同批次試劑盒中各組成成分是否可以互換。②對于產(chǎn)品中的非試劑組分應明確其此相關(guān)信息，如部分臨床化學體外診斷試劑盒中不含校準品、質(zhì)控品，應明確推薦使用的校準品、質(zhì)控品信息。③明確樣本是否可稀釋后測定，若可稀釋，需說明稀釋液成分及最大可稀釋比例。④性能指標應概況總結(jié)分析性能評估及臨床評價的內(nèi)容，并與申報資料的研究結(jié)果保持一致。
8.小結(jié)
臨床化學體外診斷試劑技術(shù)趨于成熟，市場發(fā)展穩(wěn)定，試劑國產(chǎn)化率高，提高產(chǎn)品質(zhì)量，創(chuàng)新研發(fā)新產(chǎn)品，是該類產(chǎn)品的主要發(fā)展方向。在技術(shù)審評中，應充分考慮產(chǎn)品的技術(shù)原理，分析性能研究內(nèi)容、校準品量值溯源、參考區(qū)間確定、以及臨床評價的檢測數(shù)據(jù)結(jié)論，結(jié)合已發(fā)布的行業(yè)標準、指導原則等進行綜合評估，對申請人提交的說明書、技術(shù)要求、臨床評價資料等予以充分重視及關(guān)注，提升產(chǎn)品質(zhì)量，降低潛在風險。
來源：中國醫(yī)療器械信息
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