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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-08-12 19:39
目的：比較我國現(xiàn)行《血液制品病毒去除/滅活驗(yàn)證指導(dǎo)原則》[國藥監(jiān)注（2002）160號]與世界衛(wèi)生組織（WHO）《血液制品病毒去除/滅活驗(yàn)證指南》，旨在推動我國血液制品病毒風(fēng)險控制與管理水平的提高及血液制品的合理應(yīng)用。
方法：從去除/滅活病毒方法的選擇、常用去除/滅活病毒方法評價、特定的去除/滅活病毒方法驗(yàn)證、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力、去除/滅活病毒方法再驗(yàn)證、臨床試驗(yàn)、輸血用病毒滅活血漿和正在開發(fā)的新型病毒滅活方法等幾個方面進(jìn)行比較，對血漿及其制品生產(chǎn)工藝中病毒滅活/去除的相關(guān)方法及其驗(yàn)證進(jìn)行研究。
結(jié)果與結(jié)論：我國現(xiàn)行《血液制品病毒去除/滅活驗(yàn)證指導(dǎo)原則》與WHO《血液制品病毒去除/滅活驗(yàn)證指南》總體要求基本一致，對我國血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法與驗(yàn)證工作仍具有適用性和指導(dǎo)性。
血液制品（Blood Products）指源自人類血液或血漿的治療產(chǎn)品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白和人凝血因子等[1]，是由健康人的血漿或特異免疫人血漿分離、提純制成的治療產(chǎn)品，用于診斷、治療或被動免疫預(yù)防。但通過血漿和純化血漿制品傳播血源性病毒仍然被認(rèn)為對使用者構(gòu)成風(fēng)險。歷史上與血液制品相關(guān)的主要具有威脅性的病毒主要有乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）、丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）、人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）、甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus，HAV）和細(xì)小病毒B19等[2]。因此，血液制品病毒的安全性控制尤為重要。目前，指導(dǎo)我國血液制品病毒去除/滅活工作的主要依據(jù)為《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注[2002]160號）（以下簡稱《指導(dǎo)原則》）[3]。國際上主要參考世界衛(wèi)生組織（WHO）技術(shù)報(bào)告中的《病毒去除/滅活驗(yàn)證指南》（以下簡稱《WHO指南》）[2]及歐盟和美國各自的有關(guān)規(guī)定。為此，本文對我國《指導(dǎo)原則》與《WHO指南》中有關(guān)去除/滅活病毒方法的選擇、常用去除/滅活病毒方法評價、特定的去除/滅活病毒方法驗(yàn)證、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力、去除/滅活病毒方法再驗(yàn)證、臨床試驗(yàn)、輸血用病毒滅活血漿以及正在開發(fā)的新型病毒滅活方法等方面進(jìn)行比較和闡述，以期為血液制品病毒安全性提供參考。
1、我國血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則的歷史沿革
20世紀(jì)80年代前后，法國、日本、加拿大和英國等國家相繼發(fā)生因血液制品中含有艾滋病病毒和丙型肝炎病毒等導(dǎo)致成千上萬人群感染艾滋病和丙型肝炎的重大事件[4]。為了提高我國血液制品的安全性，使我國血液制品病毒去除/滅活工作與WHO血液制品病毒去除/滅活指南接軌，中華人民共和國衛(wèi)生部和國家藥品監(jiān)督管理局組織有關(guān)專家先后對“衛(wèi)藥政發(fā)（1994）第264號”和“衛(wèi)藥生發(fā)（1997）第443號”做了進(jìn)一步修改和完善，對國內(nèi)在血液制品病毒去除/病毒滅活方法及其驗(yàn)證和論證程序方面提出初步要求。國家藥品監(jiān)督管理局于2002年發(fā)布了《指導(dǎo)原則》，從不同制品去除/滅活病毒方法的選擇、常用的去除/滅活病毒方法評價以及去除/滅活病毒的方法驗(yàn)證等5個方面進(jìn)行了規(guī)范。
2、去除/滅活病毒方法的選擇
《指導(dǎo)原則》中對不同類血液制品選擇的去除/滅活病毒方法側(cè)重點(diǎn)提出大致要求，基本原則是應(yīng)有特定的能去除/滅活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一種或多種方法聯(lián)合。
《WHO指南》雖然沒有對不同血液制品類別明確提出側(cè)重點(diǎn)建議，但在已上市血液制品已建立的專用病毒滅活和清除程序匯總表中進(jìn)行了舉例。這些舉例對生產(chǎn)企業(yè)來說參考性和實(shí)用性更強(qiáng)。
3、常用去除/滅活病毒的方法評價
《指導(dǎo)原則》中主要提供了5種常用的滅活/去除病毒方法，包括巴氏消毒法、干熱法、有機(jī)溶劑/去污劑處理法、膜過濾法和低pH孵放法等，并對每種方法的參數(shù)、技術(shù)要點(diǎn)有明確要求，具體見表1。
表1 常用去除/滅活病毒方法
其中，膜過濾法是《指導(dǎo)原則》中唯一的病毒去除的方法，該方法的主要作用機(jī)制是粒徑排阻分子篩和吸附。在生產(chǎn)過程中企業(yè)常采用35～50 nm孔徑的膜去除病毒，隨著制品生產(chǎn)過程中純化水平的提高，目前15～20 nm孔徑的膜也常有應(yīng)用。該方法可去除大部分病毒，尤其對細(xì)小病毒B19可有效去除。該方法可串聯(lián)、針對性強(qiáng)、下游污染少、蛋白回收率高，便于整合到工藝過程的多個工段。但由于過濾器濾膜只能一次性使用，成本較高。隨著人們對濾膜研究的深入了解，不同濾膜生產(chǎn)企業(yè)的濾膜性能存在差異，預(yù)過濾層和精密截留層應(yīng)考慮不同品牌濾膜和不同批次過濾器濾膜性能的一致性和適用性。如果工藝中有可能使用預(yù)過濾器，在設(shè)計(jì)驗(yàn)證研究時，必須確定是否使用了預(yù)過濾器以及如何將其納入研究設(shè)計(jì)。一些蛋白呈現(xiàn)出時間依賴性的聚體傾向，尤其會在凍存過程產(chǎn)生聚體，因此，應(yīng)考慮放置時間與凍存的影響。無論是高流速低通量還是低流速高通量，除病毒過濾的過程一般要保證連續(xù)過濾，壓力中斷可能導(dǎo)致病毒穿透的風(fēng)險外，還應(yīng)考慮膜過濾去除病毒過程中出現(xiàn)的壓力釋放情況，需如何評價和處理。
《WHO指南》中對公認(rèn)的病毒去除/滅活方法進(jìn)行了比較詳盡的綜述，分為病毒滅活和病毒去除兩部分，并在病毒滅活方法部分增加蒸汽加熱法，在病毒去除方法部分增加沉淀法和色譜法，并對每種方法在優(yōu)點(diǎn)、注意事項(xiàng)和需記錄的關(guān)鍵參數(shù)方面進(jìn)行了詳細(xì)匯總。見表2、表3。
表2 公認(rèn)的病毒滅活方法特點(diǎn)匯總
表3 公認(rèn)的病毒去除方法特點(diǎn)匯總
4、特定的去除/滅活病毒方法驗(yàn)證
《指導(dǎo)原則》在方法驗(yàn)證部分包括指示病毒的選擇、方案設(shè)計(jì)、觀察指標(biāo)和效果判定。
4.1指示病毒的選擇
《指導(dǎo)原則》和《WHO指南》中均列舉了HIV、HBV和HCV 3種主要的指示病毒，并在基因組、脂包膜和大小等特性方面進(jìn)行了描述。所選擇的指示病毒至少應(yīng)包括HIV-1、HBV和HCV模擬病毒以及非脂包膜病毒?！吨笇?dǎo)原則》和《WHO指南》的匯總見表4。
表4 經(jīng)血液傳播疾病的相關(guān)病毒及驗(yàn)證可選用的指示病毒（舉例）
塞姆利基森林病毒是一種與疾病的關(guān)系尚未明確的披膜病毒科蟲媒病毒，從很多種蚊蟲和某些沒有臨床癥狀的鳥和動物宿主中分離出來。病毒學(xué)和血清學(xué)研究結(jié)果表明，該病毒廣泛分布于非洲，可能也分布于南亞和南歐。由于國內(nèi)研究甚少，國內(nèi)未選擇將其作為指示病毒。黃熱病毒與登革病毒、寨卡病毒、西尼羅病毒和乙型腦炎病毒抗體等有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，我國是登革熱和乙型腦炎流行區(qū)，人群中有較高的抗體背景，因此，黃熱病毒也不適合作為指示病毒。
4.2方案設(shè)計(jì)
《指導(dǎo)原則》從8個方面對方案設(shè)計(jì)進(jìn)行了明確要求，《WHO指南》則分散在不同段落予以描述?？傮w來講，二者的要求基本一致，但我國的《指導(dǎo)原則》要求更具體，參考性和操作性更強(qiáng)。二者的比較見表5。
表5 《指導(dǎo)原則》與《WHO 指南》在方案設(shè)計(jì)方面的比較
4.3觀察指標(biāo)
《指導(dǎo)原則》分別在病毒方面、病毒去除/滅活各參數(shù)允許變化范圍、蛋白質(zhì)方面進(jìn)行了相關(guān)規(guī)定，《WHO指南》未對觀察指標(biāo)進(jìn)行總上體的明確要求，在一般注意事項(xiàng)和各滅活方法部分進(jìn)行部分描述。二者的比較見表6。
表6 《指導(dǎo)原則》與《WHO指南》在觀察指標(biāo)方面的比較
4.4效果的判定
《指導(dǎo)原則》中對病毒去除/滅活驗(yàn)證的效果判定標(biāo)準(zhǔn)有明確規(guī)定，《WHO指南》中未明確表明判定標(biāo)準(zhǔn)，在一般注意事項(xiàng)和傳染源等部分有相關(guān)描述。二者的比較見表7。
表7 《指導(dǎo)原則》與《WHO指南》在效果判定的比較
5、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力的驗(yàn)證需要特殊考慮的問題
《指導(dǎo)原則》從6方面強(qiáng)調(diào)了生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力驗(yàn)證過程中需要特殊考慮的問題。歸納為步驟選擇、工藝參數(shù)、病毒選擇、核酸擴(kuò)增技術(shù)、有效病毒去除步驟的判定及驗(yàn)證目的?！禬HO指南》未明確列出，在一般注意事項(xiàng)及方法描述各部分有所提及。二者的比較見表8。
表8 驗(yàn)證需要特殊考慮的問題
6、研發(fā)中的新型去除/滅活病毒方法
隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，一些新的去除/滅活病毒技術(shù)也在血液制品生產(chǎn)中有所應(yīng)用，可提供更廣泛的病毒覆蓋范圍、補(bǔ)充現(xiàn)有方法、降低成本和/或提高新鮮冷凍血漿（Fresh Frozen Plasma，F(xiàn)FP）的適用性。我國《指導(dǎo)原則》中未具體涉及這部分內(nèi)容，《WHO指南》中對研發(fā)中的新型去除/滅活病毒方法進(jìn)行了綜述，例如采用補(bǔ)骨脂素S-59聯(lián)合使用A波段紫外線（Ultra-violet A，UVA）處理，可滅活血漿中的病毒；254 nm波長紫外照射（Ultra-violet C，UVC）在人血白蛋白和人免疫球蛋白滅活病毒中的應(yīng)用；60Coγ射線輻照；碘濃度為1.05 mg·mL-1的淀粉結(jié)合碘導(dǎo)致模型脂質(zhì)包膜和非包膜病毒失活7 logs以上等方法。在許多情況下，這些方法幾乎沒有臨床驗(yàn)證，故在實(shí)際血液制品生產(chǎn)中的使用意義不大。因此，我國《指導(dǎo)原則》中未具體提及這些方法。雖然我國有的血液制品企業(yè)也在研究60Coγ射線輻照、UVC等新型病毒滅活/去除方法，但是由于照射可能會造成蛋白質(zhì)損害、蛋白活性失活、制品存儲期間穩(wěn)定性降低、污染環(huán)境等多方面影響，限制了這些新方法的應(yīng)用和國家藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。
7、其他比較
除了上述幾大方面比較外，本文還從其他細(xì)節(jié)方面對我國《指導(dǎo)原則》和《WHO指南》進(jìn)行比較，具體見表9。
表9 《指導(dǎo)原則》和《WHO指南》的其他比較
8、討 論
經(jīng)過數(shù)十年的努力，關(guān)于供血漿者篩查、供血漿者和血漿檢測、生產(chǎn)工藝引入特定去除/滅活病毒方法3方面，我國相繼發(fā)布了各種法規(guī)條例，通過多種控制措施確保血液制品的病毒安全性，包括《血液制品管理?xiàng)l例》、GMP、《單采血漿站管理辦法》《關(guān)于實(shí)施血液制品生產(chǎn)用原料血漿檢疫期的通知》[5-8]《指導(dǎo)原則》等。另外，2020年版《中國藥典》新增“生物制品病毒安全性控制”相關(guān)內(nèi)容[1]，對生物制品病毒安全性控制從風(fēng)險評估、全過程控制和全生命周期管理3方面進(jìn)行了指導(dǎo)，不同類別生物制品病毒安全性控制要點(diǎn)中明確表明，人血液制品起始原材料為健康人血漿，存在經(jīng)血液傳播病毒的安全性風(fēng)險，人血液制品的病毒安全性控制應(yīng)包含生物制品病毒安全性控制的所有要素，重點(diǎn)應(yīng)考慮人血漿來源的病毒風(fēng)險控制和生產(chǎn)工藝的病毒清除能力，必要時應(yīng)實(shí)施對上市產(chǎn)品病毒安全性的追溯。
《指導(dǎo)原則》自2002年發(fā)布以來，在去除/滅活病毒技術(shù)方法研究方面不斷取得進(jìn)展，如使用核黃素和基于紫外線的光化學(xué)處理法[9-10]、過氧化氫和電子束輻照法[11]、阿莫沙林/紫外線A光或阿莫他林/谷胱甘肽法[12-13]、氧依賴性激光滅活法[14]、鐵電絮凝法[15]、連續(xù)蛋白A層析法[16]和脈沖電暈放電等離子體法[17]等。近年來，新的去除/滅活病毒技術(shù)發(fā)展積累了新的病毒清除驗(yàn)證認(rèn)識，檢驗(yàn)檢測技術(shù)也有了提高，質(zhì)量控制和監(jiān)管理念也有所創(chuàng)新?！吨袊镏破芬?guī)程》也已并入《中國藥典》2005年版三部，經(jīng)過2010、2015和2020年版《中國藥典》三部不斷升級改版，其中血液制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也不斷提升。因此，在下一版《指導(dǎo)原則》修訂時，建議考慮對新的去除/滅活病毒技術(shù)方法如蒸汽加熱法、補(bǔ)骨脂素S-59 聯(lián)合UVA法的考量，對S/D法處理后有機(jī)溶劑/去污劑殘留量的考量，去除/滅活病毒方法再驗(yàn)證情況增加更換新生產(chǎn)線、新去除/滅活病毒設(shè)備，以及涉及再驗(yàn)證的工藝變更的界定等，以提高《指導(dǎo)原則》的適用性和指導(dǎo)性。
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本文作者徐宏山，岳廣智，楊立宏，劉欣玉，李玉華，中國食品藥品檢定研究院，來源于中國藥事，僅供交流學(xué)習(xí)。
來源：Internet
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