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qPCR技術(shù)重復(fù)的副孔是為了避免操作失誤帶來的數(shù)據(jù)錯(cuò)誤。理論上，如果每一次操作都完全一致，那么CT值的差異理論上會(huì)為0，但實(shí)際操作中幾乎不可能，所以我們追求的是CT值的差異越小越好。那差異應(yīng)該在什么范圍內(nèi)才屬于可以接受的結(jié)果呢？

一般情況下，一個(gè)樣本會(huì)設(shè)置三個(gè)復(fù)孔，最終該樣本會(huì)得到3個(gè)CT值。此時(shí)，使用excel表格內(nèi)的公式：STDEV(x1,x2,x3)，就可以獲得這三個(gè)CT值的標(biāo)準(zhǔn)差，也就是SD值，SD小于0.5，則認(rèn)為是可以接受的實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果。SD越小，代表三個(gè)數(shù)值之間的差異越小，如果三個(gè)數(shù)值都一樣，那它們的SD值就為0。

此外，復(fù)孔CT值的差異大小，除了和操作因素有關(guān)，還受其他因素影響。這里，我們挑2個(gè)來講：

1 孔間反應(yīng)的差異。如果使用一些比較老舊的設(shè)備進(jìn)行反應(yīng)，而復(fù)孔剛好落在加熱板的邊緣位置，那么邊緣的孔的反應(yīng)效率就會(huì)和非邊緣孔的不一致，進(jìn)而造成最終的CT值差異。因此，應(yīng)該盡量避開這種位置進(jìn)行反應(yīng)。

2 樣本質(zhì)量較差。例如，如果樣本cDNA濃度不夠高，跑出來的CT值會(huì)較大，當(dāng)CT大于30之后，復(fù)孔的SD值會(huì)開始變得更大，而理想的CT值范圍是25-30之間。