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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-08-29 08:51
摘要
隨著司美格魯肽注射液（Ozempic®）以及司美格魯肽片（Rybelsus®）原研藥在我國上市，國內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)按照生物類似藥路徑開發(fā)的司美格魯肽生物類似藥日漸增多。本文梳理了司美格魯肽原研藥及生物類似藥國內(nèi)外注冊與研發(fā)現(xiàn)狀，分析了司美格魯肽質(zhì)量研究和質(zhì)量相似性評價中的挑戰(zhàn)及相關(guān)技術(shù)要求，結(jié)合審評實踐對司美格魯肽生物類似藥的藥學(xué)評價中常見問題進(jìn)行分析探討，以期為此類生物類似藥的藥學(xué)開發(fā)與評價提供參考。
關(guān)鍵詞：司美格魯肽；生物類似藥；質(zhì)量相似性
自從我國 2015 年公布生物類似藥評價指導(dǎo)原則以來，國內(nèi)生物類似藥申報及獲批的品種不斷增多。早期申報的生物類似藥集中在阿達(dá)木單抗、利妥昔單抗、貝伐珠單抗及曲妥珠單抗等原研藥上市較早的品種。自 2019年 2月我國第 1個生物類似藥上市后，奧馬珠單抗、地舒單抗、托珠單抗等生物類似藥近年也陸續(xù)獲批。除單抗生物類似藥外，司美格魯肽成為目前研發(fā)熱度最高的生物類似藥之一。我國司美格魯肽注射液（Ozempic®）和司美格魯肽片（Rybelsus®）原研藥分別于2021年4月和2024年1月批準(zhǔn)上市，主要有2個適應(yīng)證：一是用于2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）成人患者的血糖控制，二是用于降低伴有心血管疾病的 T2DM 成人患者的主要心血管不良事件風(fēng)險。截至 2024 年 2 月，國內(nèi)尚無司美格魯肽生物類似藥申報上市，歐美獲批的體質(zhì)量管理我國也尚未獲批。處于司美格魯肽注射液生物類似藥臨床申報階段的有 10余家，另有多家按化藥申報臨床，口服司美格魯肽的生物類似藥尚無申報。
本文在梳理司美格魯肽原研品種、生物類似藥注冊及申報的基礎(chǔ)上，結(jié)合藥學(xué)審評經(jīng)驗及相關(guān)文獻(xiàn)，對該類產(chǎn)品藥學(xué)開發(fā)中的常見技術(shù)問題進(jìn)行探討。
1、司美格魯肽及其生物類似藥的研發(fā)進(jìn)展
1. 1 司美格魯肽原研產(chǎn)品注冊情況
司美格魯肽是由丹麥諾和諾德公司原研開發(fā)的一種長效胰高血糖素樣多肽‐1受體激動劑（glucagon‐like peptide‐1 rece‐ptor agonists，GLP‐1RA），與人體內(nèi)的
序列同源性GLP‐1 有 94%［1‐2］，注射液2017年 12月于美國首先獲批上市，每周 1 次用藥，用于改善 T2DM 患者的血糖控制，目前已在美國、歐洲、日本等 25個國家或地區(qū)上市銷售。其結(jié)構(gòu)為在 GLP‐1（7‐37）鏈 8 位上用二氨基異丁酸取代了丙氨酸，34位上用精氨酸取代了賴氨酸，26位上的賴氨酸進(jìn)行了酰化，?；瘎┌?2個8‐氨基‐3，6‐二氧雜辛酸基團(tuán)、1個γ‐谷氨酸基團(tuán)，1個1，18‐十八烷脂肪二酸。為了增強(qiáng)司美格魯肽對二肽基肽酶‐4（dipeptidyl peptidase‐4，DPP‐4）的穩(wěn)定性以及降低清除率，對肽鏈骨架第 8位進(jìn)行修飾（丙氨酸置換為氨基異丁酸 Aib），延長了司美格魯肽的血漿半衰期［3‐4］。與利拉魯肽相比，司美格魯肽的脂肪鏈更長，疏水性增加，與白蛋白結(jié)合增加［5］。脂肪酸?；夹g(shù)可能同時影響皮下給藥后吸收速率及通過各種清除途徑的消除速率，可有效延長多肽和蛋白在體內(nèi)的半衰期。作用機(jī)制為與胰腺β細(xì)胞上的GLP‐1R 結(jié)合，通過激活 cAMP／PKA 通路提高葡萄糖敏感性，與天然 GLP‐1 激活下游通路信號的作用機(jī)制一致。以葡萄糖濃度依賴的方式增強(qiáng)胰島素分泌和抑制胰高血糖素的分泌，并可延緩胃排空，調(diào)控大腦食欲調(diào)節(jié)中樞，抑制食欲，減少胃排空，從而達(dá)到降低血糖和減重的作用［6‐7］。由于其對血糖的雙向調(diào)節(jié)作用，與胰島素類藥物相比，GLP‐1RA低血糖風(fēng)險較低。司美格魯肽的結(jié)構(gòu)式見圖1。
▲圖1-司美格魯肽結(jié)構(gòu)式
由于已上市司美格魯肽原研藥有 2 種劑型，多種適應(yīng)證，多個規(guī)格，不同劑型和不同適應(yīng)證在全球的上市時間不同，截至2024年2月，司美格魯肽在全球主要監(jiān)管地區(qū)獲批信息見表1。
▲表1-國內(nèi)外司美格魯肽上市信息匯總
口服司美格魯肽已于2024年1月于國內(nèi)獲批上市，體質(zhì)量管理適應(yīng)證也于 2023 年 6 月于國內(nèi)申報上市，不同劑型、不同適應(yīng)證的獲批時間與歐美監(jiān)管機(jī)構(gòu)基本相差3 ~ 5年。
1. 2 司美格魯肽原研產(chǎn)品臨床研究現(xiàn)狀
T2DM也是心血管病癥、失明、終末期腎衰竭、非創(chuàng)傷性下肢截肢和住院的主要原因。其也與癌癥、認(rèn)知減退、慢性肝病和其他殘疾或致命疾病的風(fēng)險增加相關(guān)［8］。由于 GLP‐1R 存在于許多器官，包括胰腺、大腦、心臟、腎臟和胃腸道［9‐10］，GLP‐1RA具有多種生理作用?；贕LP‐1R在人體內(nèi)多個器官均有分布，除了已上市的DM、心血管不良事件、體質(zhì)量管理等適應(yīng)證，原研企業(yè)在不同國家和地區(qū)分別開展了更廣泛的適應(yīng)證不同階段的臨床試驗［11］，見表 2。由表中可見，司美格魯肽在全球開展了包括不同類型 DM、心血管疾病、腎病、DM 性視網(wǎng)膜病變、代謝相關(guān)疾病、肺病、肝病及胃腸道疾病等 20多種適應(yīng)證的臨床研究，其中還包括兒童肥胖的兒童相關(guān)適應(yīng)證。諾和諾德公司發(fā)布的2023年業(yè)績顯示［12］，全年收入約336. 81億美元，同比增長 31%；其中僅司美格魯肽注射液（Ozempic®）就實現(xiàn)了 139 億美元的營收，同比增長60%；司美格魯肽片（Rybelsus®）銷售額月27億美元，同比增長66%；司美格魯肽注射液體質(zhì)量管理Wegovy銷售額約45億美元，同比增長407%。鑒于司美格魯肽較多的臨床獲益和經(jīng)濟(jì)效益，近兩年，司美格魯肽的研發(fā)一直是廣受關(guān)注的熱點。
▲表2-司美格魯肽臨床研究現(xiàn)狀
2023年3月，諾和諾德公司公布了一項數(shù)據(jù)，證實了口服司美格魯肽（25 和 50 mg）治療 T2DM 成人患者的Ⅲb期 Pioneer plus研究的積極結(jié)果［13］。同年10月，其在歐洲提交了新劑量標(biāo)簽的申請。
2023年11月，在SELECT Ⅲ期試驗中，司美格魯肽2. 4 mg可使成年超重或肥胖癥患者主要不良心血管事件風(fēng)險降低20%。諾和諾德公司已在美國和歐盟遞交了Wegoyy藥品說明書更新申請［14］，已增加在身高質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）≥ 27 kg／m2且確診心血管疾病的成年人中降低主要不良心血管事件風(fēng)險的適應(yīng)證。
2023年7月，歐盟藥品監(jiān)管局（European Medicines Agency，EMA）曾對司美格魯肽、利拉魯肽等GLP‐1RA類藥物可能存在的致甲狀腺癌風(fēng)險提出審查警告，并要求相關(guān)藥企補充說明。EMA提出的安全信號是一種監(jiān)測使用已批準(zhǔn)藥物的潛在不良事件的方式。目前尚不清楚報告的病例是否與藥物本身或患者的基礎(chǔ)疾病或其他因素有關(guān)［15］。諾和諾德公司曾在動物實驗中發(fā)現(xiàn)了甲狀腺癌與活性司美格魯肽之間可能存在聯(lián)系，因此被美國食品藥品監(jiān)督管理局（Foodand Drug Administration，F(xiàn)DA）給予了黑框警告［16］。有研究指出，使用法國國家健康數(shù)據(jù)系統(tǒng)（National Hea‐lth Data System，SNDS）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行嵌套病例對照分析，2006 — 2018 年間接受二線抗 DM 藥物治療的T2DM 患者被納入隊列，研究發(fā)現(xiàn)，使用 GLP‐1RA會增加所有甲狀腺癌和癌癥的風(fēng)險，特別是在治療1 ~3年后[17]。
1.3 原研產(chǎn)品變更情況
司美格魯肽注射液和片劑上市以來，發(fā)生了多次變更。根據(jù)FDA公布的信息［18］，Ozempic®自2019年11月至2023年9月共計進(jìn)行了8次變更，均為包裝標(biāo)簽、新增適應(yīng)證等方面變更；Wegovy自上市以來共計發(fā)生4次包裝標(biāo)簽和新適應(yīng)證方面變更；Rybelsus®自上市以來共計發(fā)生 5 次變更，除 4 次標(biāo)簽方面變更，于 2021 年 4 月發(fā)生 1 次藥學(xué)工藝變更。根據(jù)歐洲藥監(jiān)機(jī)構(gòu)公布的公眾評估報告（European Public Assessment Report，EPAR）所披露的信息［19‐21］，司美格魯肽 3 個規(guī)格自 2018 年上市以來至少進(jìn)行了 30余次不同風(fēng)險等級的變更，包括生產(chǎn)場地、生產(chǎn)規(guī)模、中間品過程控制變化、變更檢測方法及部分起始物料、延長效期、包材供應(yīng)商改變等。根據(jù)藥品再注冊和補充申請等受理情況分析，司美格魯肽原研藥 2個規(guī)格在我國上市后變更僅為新增適應(yīng)證，暫未發(fā)現(xiàn)其關(guān)鍵原材料、生產(chǎn)場地、生產(chǎn)工藝等藥學(xué)方面發(fā)生變更。
1. 4 國內(nèi)外司美格魯肽生物類似藥研發(fā)進(jìn)展
藥品審評中心受理品種目錄信息公開顯示［22］，國內(nèi)自2021 年 7 月 27 日開始，杭州九源基因工程有限公司首先按生物制品 3. 3類進(jìn)行了司美格魯肽注射液的臨床試驗申報，之后麗珠集團(tuán)新北江制藥股份有限公司（2021 年 9 月 13 日）、重慶派金生物科技有限公司（2022 年 4 月 24 日）、重慶宸安生物制藥有限公司（2022 年 6 月 16 日）、北京質(zhì)肽生物醫(yī)藥科技有限公司（2022年 9月 30日）、聯(lián)邦生物科技（珠海橫琴）有限公司（2023年2月9日）、惠升生物制藥股份有限公司（2023 年 4 月 20 日）、江蘇萬邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司（2023 年 4 月 20 日）、正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司（2023年6月7日）、成都倍特生物制藥有限公司（2023年12月27日）等10余家企業(yè)先后申報了不同適應(yīng)證的臨床試驗。
此外，還有多家企業(yè)按照化藥 2. 2類申報，2022年 5 月 25 日，齊魯制藥有限公司首家按化藥申報了司美格魯肽注射液的臨床試驗。之后石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司（2022年 9月 23日）、華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司（2023 年 8 月 26 日）、深圳瀚宇藥業(yè)股份有限公司（2023年9月12日）等幾家企業(yè)先后申報。
從上述國內(nèi)企業(yè)司美格魯肽申報時間可以看出，生物類似藥或化藥 2. 2 類申報時間集中于 2022年之后，90% 的申報集中于 2022 — 2023年，且申報企業(yè)由之前專注于做糖尿病領(lǐng)域的企業(yè)擴(kuò)展到大型綜合研發(fā)企業(yè)，廣泛受到生物制藥領(lǐng)域的關(guān)注。目前，尚無各種劑型司美格魯肽生物類似藥申報上市，尚無口服司美格魯肽按生物制品3. 3類生物類似藥或按化藥2. 2類申報臨床試驗。
國外目前僅有兩家韓國公司在進(jìn)行合成司美格魯肽的研發(fā)［23‐24］，其中 2023 年 8 月 8 日，由韓國大元制藥株式會社和（株）RAPHAS研發(fā)的合成多肽向韓國提交新藥研究（Investigational new drug，IND）申請，用于治療肥胖癥。2023 年 6 月 20 日，由 Peptron Inc開展臨床前研究試驗，用于治療肥胖癥和DM。尚未見國外有司美格魯肽生物類似藥的申報。
2、司美格魯肽相似性評價的挑戰(zhàn)
質(zhì)量相似性研究貫穿于生物類似藥開發(fā)的全過程，全面的藥學(xué)質(zhì)量相似性比對研究是生物類似藥評價的基礎(chǔ)。比對研究結(jié)果顯示，無差異或差異很小，評判為相似的，可減免后續(xù)部分比對試驗研究；對于存在較大差異或不確定因素的，需評估對產(chǎn)品的影響。由于生物制品結(jié)構(gòu)多樣且通常存在較為復(fù)雜的翻譯后修飾及結(jié)構(gòu)多樣的產(chǎn)品有關(guān)雜質(zhì)，以及候選藥生產(chǎn)工藝與原研藥往往存在差異，候選藥的質(zhì)量相似性研究很難做到與原研藥完全一致。當(dāng)候選藥與原研藥的質(zhì)量對比研究存在差異時，應(yīng)分析存在質(zhì)量差異的原因、存在差異的質(zhì)量屬性可能對臨床安全性、有效性、藥物代謝動力學(xué)（pharmaco‐kinetics，PK）、免疫原性等臨床風(fēng)險獲益之間的相關(guān)性，還需結(jié)合非臨床及臨床研究的情況進(jìn)行相似性整體評價［25‐26］。
對按照生物類似藥開發(fā)的司美格魯肽，均于原研在我國上市后進(jìn)行臨床試驗申報，因此不存在部分抗體藥物在原研藥獲得方面的困難。但由于司美格魯肽原研藥開發(fā)了 2種劑型 10個規(guī)格分別對應(yīng) 3種不同適應(yīng)證，對于Ozempic®和 Wegovy®2種注射劑型，考慮到實際臨床應(yīng)用的場景，候選藥在規(guī)格選擇方面最好與原研藥同適應(yīng)證的注射液規(guī)格保持一致，避免造成后續(xù)患者用藥給藥劑量的混亂，帶來不必要的安全性風(fēng)險。對于口服劑型的 3 個規(guī)格，候選藥在開發(fā)過程中還應(yīng)進(jìn)行該劑型特有質(zhì)量屬性與原研藥的充分相似性比對研究，良好的藥學(xué)相似性是體內(nèi)生物利用度相似的基礎(chǔ)。
3、司美格魯肽審評中常見問題的探討
3. 1 表達(dá)系統(tǒng)
原研藥采用釀酒酵母真核表達(dá)系統(tǒng)，部分生物類似藥候選藥采用與原研藥不同的大腸埃希菌原核表達(dá)系統(tǒng)，根據(jù)《生物類似藥研發(fā)與評價技術(shù)指導(dǎo)原則》，對于表達(dá)系統(tǒng)與原研藥不一致的，需進(jìn)行充分驗證，并證明與有效性、安全性等方面無臨床意義的差別。由于大腸埃希菌作為表達(dá)系統(tǒng)具有遺傳背景清晰、操作簡單、抗污染能力強(qiáng)、培養(yǎng)周期短及能在低廉的培養(yǎng)基中高密度培養(yǎng)的特點，其在大多數(shù)科研應(yīng)用中成為高效表達(dá)異源蛋白最常用的原核表達(dá)系統(tǒng)［27］。但大腸埃希菌作為表達(dá)系統(tǒng)存在的主要問題包括：不能象真核蛋白那樣進(jìn)行翻譯后修飾，缺乏將蛋白質(zhì)有效釋放到培養(yǎng)基中的分泌機(jī)制和充分形成二硫鍵的能力。由于司美格魯肽在非糖基化形式下能保留其生物學(xué)活性，因此也可采用大腸埃希菌進(jìn)行表達(dá)。
若候選藥采用大腸埃希菌表達(dá)系統(tǒng)，應(yīng)關(guān)注與原研藥在宿主殘余蛋白及宿主殘余 DNA 的差異，并評估可能造成的安全性風(fēng)險。若采用酵母表達(dá)系統(tǒng)，由于真核表達(dá)系統(tǒng)生物學(xué)過程較復(fù)雜，對分泌的蛋白會進(jìn)行糖基化修飾，結(jié)構(gòu)表征應(yīng)對糖基化修飾進(jìn)行研究，研究內(nèi)容包括糖基化位點、糖型（O 連接糖／N 連接糖）等，應(yīng)關(guān)注糖基化修飾的批間一致性，因為糖基化修飾的一致性在一定程度上反應(yīng)了生產(chǎn)工藝，特別是發(fā)酵工藝的批間一致性。
由于候選藥與原研藥在表達(dá)系統(tǒng)、生產(chǎn)工藝和中間過程控制等方面很難做到完全一致，二者在工藝相關(guān)雜質(zhì)方面可能存在一定差異，應(yīng)優(yōu)先依靠產(chǎn)品純化工藝的優(yōu)化對雜質(zhì)進(jìn)行去除，而非采用非臨床的路徑證實雜質(zhì)的安全性。
3. 2 脂肪酸?；瘋?cè)鏈
脂肪酸酰化側(cè)鏈通常由脂肪酸側(cè)鏈、連接子和間隔子 3部分組成，脂肪酸側(cè)鏈可直接鏈接到肽鏈骨架上或通過連接子和／或間隔子進(jìn)行連接。脂肪酸?；幬锱c白蛋白的親和力隨烷基鏈長度的增加而增強(qiáng)，1，18‐十八烷脂肪二酸和1，20‐二十烷二酸是迄今為止檢測的脂肪酸中與白蛋白親和力最強(qiáng)的兩種脂肪酸側(cè)鏈［4，28‐29］。左旋‐γ‐谷氨酸（L‐γ‐Glu）常可作為連接子，對白蛋白結(jié)合和半衰期以及多肽的自我聚合有重要影響，L‐γ‐Glu帶負(fù)電荷，增加了藥物的親水性，因而可改善藥物制劑的特性，如溶解度和藥物制劑的穩(wěn)定性。間隔子位于肽鏈骨架與連接子之間，主要作用為調(diào)節(jié)肽類與目標(biāo)受體親和力。在所需的受體結(jié)合水平和期望的半衰期間尋求一個平衡點。如通過添加 1個小的親水性間隔子如［Ado（3，8‐二氧‐氨基辛酸）或 AEEA［衍生自2‐（2‐（2氨基乙氧基）乙氧基）乙酸）］，在與白蛋白結(jié)合的同時提供足夠的體內(nèi)活性，同時提供適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)，以防止在體內(nèi)被降解。蛋白質(zhì)或肽類骨架中與脂肪酸側(cè)鏈結(jié)合的位置對于達(dá)到效力和半衰期而言非常重要。同時，最接近脂肪酸?；恢玫臍埢赡芤矔绊懪c白蛋白的相互作用［28‐29］。
司美格魯肽的脂肪酸?；瘋?cè)鏈的脂肪酸側(cè)鏈、連接子和間隔子分別為1個1，18‐十八烷脂肪二酸、1個 γ‐谷氨酸基團(tuán)和 2 個 8‐氨基‐3，6‐二氧雜辛酸基團(tuán)。脂肪酸?；瘋?cè)鏈部分應(yīng)提供?；瘎?、二肽和PyBOP等主要生產(chǎn)用原材料和生產(chǎn)涉及的特殊有機(jī)溶劑的來源、制備工藝、毒性研究背景、結(jié)構(gòu)（包括手性）確證、雜質(zhì)分析以及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和依據(jù)等方面的資料。對脂肪酸?；瘋?cè)鏈的鏈修飾位點進(jìn)行研究確認(rèn)，對?；瘋?cè)鏈進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證和功能研究，應(yīng)對其?；瘋?cè)鏈空間、位置異構(gòu)體和手性異構(gòu)體進(jìn)行充分的鑒定和研究，提升對產(chǎn)品的認(rèn)知及質(zhì)量控制能力。
?；瘋?cè)鏈制備工藝可能引入的毒性溶劑／試劑、潛在致突變雜質(zhì)的殘留，應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)要求樣品進(jìn)行控制。結(jié)合側(cè)鏈制備工藝和起始物料質(zhì)量情況加強(qiáng)側(cè)鏈及其起始物料和中間體的雜質(zhì)譜分析，完善雜質(zhì)檢查方法，關(guān)注檢查方法的專屬性，保證擬定方法對各種潛在雜質(zhì)可有效分離、檢出。根據(jù)各潛在雜質(zhì)在后續(xù)工藝的清除和轉(zhuǎn)化情況并結(jié)合關(guān)鍵臨床試驗用樣品有關(guān)物質(zhì)情況和安評數(shù)據(jù)，合理制定側(cè)鏈及其中間體、起始物料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)限度。還需注意對不同長度脂肪酸、含不同個數(shù)羥乙基乙二胺的考察。
盡早確定小分子修飾物的制備工藝或供應(yīng)商，確保批間質(zhì)量一致以及臨床試驗樣品的代表性。臨床試驗階段，應(yīng)關(guān)注臨床試驗樣品采用的?；瘋?cè)鏈的雜質(zhì)水平應(yīng)不得顯著超出動物安全性試驗數(shù)據(jù)所支持的水平。
3. 3 司美格魯肽前體［Aib8，Arg34 GLP?1（7?37）］
重組表達(dá)的司美格魯肽前體作為本品關(guān)鍵的中間產(chǎn)物，應(yīng)進(jìn)行充分的結(jié)構(gòu)確證、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究，并應(yīng)在關(guān)鍵步驟作為生產(chǎn)過程中控檢查項目確保前體的純度、雜質(zhì)等符合要求，確保中間體質(zhì)量的批間一致性。
據(jù)文獻(xiàn)報道［30］，與天然 GLP‐1（7‐37）相比，司美格魯肽的GLP‐1R親和力約減小2倍。與司美格魯肽相比，司美格魯肽前體 Aib8，Arg34 GLP‐1（7‐37）的GLP‐1R親和力約增加2倍。與無側(cè)鏈Arg34 GLP‐1（1‐37）的類似物相比較，司美格魯肽前體 Aib8，Arg34GLP‐1（7‐37）的 GLP‐1R 親和力約增加 5倍。除受體結(jié)合力，體外功能分析被用于評估不同 GLP‐1 類似物的激動效力。天然GLP‐1 EC50為16. 2 pmol／L，而Aib8，Arg34 GLP‐1（7‐37）（類似物 7，無側(cè)鏈）和司美格魯肽的活力稍強(qiáng)，EC50分別為6. 2和6. 2 pmol／L。Arg34GLP‐1（1‐37）（類似物1，無側(cè)鏈）的EC50為7. 6pmol／L。與Aib8，Arg34 GLP‐1（7‐37）（類似物7，無側(cè)鏈）相比，Arg34 GLP‐1（1‐37）的效力稍減小。研究顯示，脂肪酸部分及其與 GLP‐1 的鏈接化學(xué)是關(guān)鍵特性，以確保高的白蛋白親和力和 GLP‐1R效力，并獲得 GLP‐1類似物的延長暴露和作用。
候選藥開發(fā)過程中，除對司美格魯肽前體進(jìn)行理化質(zhì)量研究外，還應(yīng)關(guān)注?；昂髮Π椎鞍子H和力、GLP‐1R親和力生物學(xué)活性等活性表征的影響。
3. 4 口服制劑
目前國內(nèi)尚無口服司美格魯肽生物類似藥申報，但預(yù)計不久的將來會陸續(xù)出現(xiàn)口服生物類似藥的申報。對于生物制品，存在多種口服吸收屏障，主要包括胃腸道的化學(xué)屏障、蛋白酶屏障、黏液屏障和腸上皮細(xì)胞屏障［31‐33］。其中，腸上皮細(xì)胞被認(rèn)為是最難克服的屏障，因為除了頂側(cè)細(xì)胞膜之外，藥物還需完成胞內(nèi)轉(zhuǎn)運和經(jīng)過基底側(cè)細(xì)胞膜出胞才能達(dá)到促進(jìn)藥物吸收的目的［34］?？紤]到消化道多種口服吸收屏障帶來的生物利用度降低，注射劑是最常見的劑型，通常采用皮下注射的給藥途徑。原研在司美格魯肽的開發(fā)過程中也是先開發(fā)了注射劑型，之后考慮到患者依從性繼而開發(fā)了口服劑型，避免注射給藥帶來的不便和疼痛。
目前，國內(nèi)外上市的口服 GLP‐1RA 僅有丹麥諾和諾德公司的司美格魯肽片，開發(fā)進(jìn)展較快的是以色列 Oramed 醫(yī)藥公司研發(fā)的口服艾塞那肽（代號ORMD‐0901）。這兩款 GLP‐1RA 口服制劑分別采用片劑和腸溶軟膠囊劑兩種不同的劑型，在防止胃腸道內(nèi)消化酶解和促進(jìn)吸收提高生物利用度方面采取了不同的策略。
原研采用 N‐［8‐（2‐羥基苯甲酰）氨基］辛酸鈉（SNAC）作為吸收促進(jìn)劑來提高司美格魯肽透過胃腸道上皮的吸收。SNAC是一種小分子脂肪酸衍生物，能夠提高藥物周圍環(huán)境中的酸堿值，減少胃蛋白酶對藥物的降解，并促進(jìn)藥物在胃壁上皮以濃度依賴的方式吸收［35］。SNAC與司美格魯肽的可逆性結(jié)合，促進(jìn)司美格魯肽片劑在胃內(nèi)的吸收，通過抵抗胃蛋白酶降解，從而延長藥物半衰期，提高司美格魯肽片劑的生物利用度［36］。研究顯示，SNAC含量在300 mg時可獲得最佳吸收效果，因此以此劑量作為口服司美格魯肽藥片中的單劑含量［37］。司美格魯肽口服片劑與注射液相比，生物利用度更低，且患者之間的吸收變異性更大［38］，這也是口服制劑需更高的給藥劑量且每日給藥的原因。
ORMD‐0901 則采用了蛋白質(zhì)口服給藥技術(shù)平臺（PODTM），將 GLP‐1 類似物艾塞那肽制成腸溶軟膠囊。與司美格魯肽片相比，ORMD‐0901采用pH敏感腸溶性涂層膠囊作為吸收促進(jìn)劑，對pH敏感的腸溶性涂層膠囊到達(dá)小腸后開始溶解，在促吸收劑的幫助下，膠囊內(nèi)的艾塞那肽透過腸黏膜進(jìn)入血液循環(huán)，且該產(chǎn)品特有的蛋白酶抑制劑可阻止蛋白酶對活性物質(zhì)的降解，保護(hù)藥物的完整性［39］，在腸溶衣與蛋白酶解抑制劑的雙重保護(hù)下，以期在減少胃腸道酶解的同時，提高生物利用度?？纱龠M(jìn)膠囊內(nèi)容物乳化效果更佳。
對于生物類似藥研發(fā)企業(yè)而言，若考慮開發(fā)口服司美格魯肽生物類似藥，在生產(chǎn)工藝、制劑處方和規(guī)格上，應(yīng)盡可能與原研參照藥一致，對于不一致的，應(yīng)有充分理由，處方若與原研不同，還應(yīng)進(jìn)行充分的處方篩選研究。若采用了新型輔料，應(yīng)提供包括輔料來源、制備工藝、毒性研究背景、結(jié)構(gòu)表征、雜質(zhì)分析、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和依據(jù)、穩(wěn)定性等方面的全部藥學(xué)資料。生產(chǎn)工藝過程中重點關(guān)注制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度，可參考《化藥口服固體制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》。質(zhì)量研究重點關(guān)注不同于注射劑的質(zhì)量屬性，片劑或膠囊劑應(yīng)按《中國藥典》三部（2020版）制劑通則片劑或膠囊劑規(guī)定進(jìn)行全面研究，均應(yīng)進(jìn)行崩解時限、裝量差異及微生物限度的質(zhì)量控制研究。對于腸溶片／膠囊、緩釋片／膠囊、控釋片／膠囊，還應(yīng)分別符合腸溶遲釋制劑、緩釋制劑、控釋制劑的相關(guān)要求，并應(yīng)進(jìn)行釋放度檢查。穩(wěn)定性研究中也應(yīng)重點關(guān)注口服制劑質(zhì)量屬性在放置過程中的影響因素和變化情況，確保在效期內(nèi)的質(zhì)量穩(wěn)定性。
3. 5 相似性研究
3. 5. 1 參照藥的選擇
2015 年，國家藥品監(jiān)督管理局頒布的《生物類似藥研發(fā)與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》明確規(guī)定了參照藥的定義和選擇要求［25］，參照藥的定義：參照藥指已獲國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)注冊的，在生物類似藥研發(fā)過程中與之進(jìn)行比對研究用的原研產(chǎn)品；參照藥的選擇：參照藥應(yīng)為在我國已注冊的原研藥。對于采用非中國市場來源原研藥開展相似性研究的情況，我國監(jiān)管部門2019年第44號公告明確了申報的路徑和相關(guān)要求［40］。藥學(xué)比對研究各階段所使用的參照藥應(yīng)盡可能選擇中國批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品。對不能在國內(nèi)獲得的，可考慮其他合適的途徑。對研發(fā)過程中使用非中國批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品作為參照藥的，應(yīng)與中國批準(zhǔn)上市產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量橋接研究。上市申請時應(yīng)選擇中國批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品作為參照藥開展藥學(xué)比對研究。
由于司美格魯肽的 2 種劑型均已在我國上市，原研參照藥的可及性基本得到解決，在參照藥的選擇方面不存在較大爭議性。需關(guān)注的是體質(zhì)量管理適應(yīng)證的原研截至 2024 年 2 月尚未在我國上市，若申報該適應(yīng)證的生物類似藥，在選擇參照藥時需綜合考慮原研藥在我國的注冊申報狀況及與原研規(guī)格的一致性，若采用歐美市場來源的 Wegovy®一并與我國上市原研作為參照藥，應(yīng)關(guān)注不同規(guī)格之間原研藥的可比性。
3. 5. 2 候選藥規(guī)模
生物類似藥的藥學(xué)研究思路不同于創(chuàng)新藥循序漸進(jìn)的特點，藥學(xué)開發(fā)和工藝優(yōu)化圍繞參照藥的目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況開展。由于生物制品結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性及其固有的異質(zhì)性，應(yīng)選擇代表性批次開展候選藥和參照藥之間全面的質(zhì)量比對研究。藥學(xué)比對研究所使用的候選藥應(yīng)盡可能為商業(yè)化生產(chǎn)代表性工藝批次。原則上臨床試驗樣品采用商業(yè)化工藝生產(chǎn)，可更充分地支持整體相似性評價物質(zhì)基礎(chǔ)的一致性。特別是針對司美格魯肽、利拉魯肽等采用酵母或大腸埃希菌重組表達(dá)多肽部分的藥物，不同于采用 CHO 表達(dá)系統(tǒng)的抗體藥物，司美格魯肽無復(fù)雜的糖基化翻譯后修飾造成的分子異質(zhì)性，但卻有結(jié)構(gòu)多樣的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)往往會因規(guī)模放大而增多，造成產(chǎn)品質(zhì)量的下降，并帶來一定的安全性風(fēng)險。2022 年頒布的《胰島素類生物類似藥藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則》指出［41］，基于現(xiàn)階段常見生產(chǎn)用菌株／細(xì)胞株的表達(dá)水平，鼓勵采用商業(yè)化發(fā)酵規(guī)模和工藝生產(chǎn)樣品開展臨床試驗。因此，結(jié)合司美格魯肽、利拉魯肽等生物類似藥的結(jié)構(gòu)特征及生物類似藥在我國的發(fā)展階段，藥學(xué)比對研究所使用的候選藥應(yīng)盡可能選擇商業(yè)化生產(chǎn)代表性工藝條件制備的批次。
通常，臨床研究批次和商業(yè)化工藝驗證批次應(yīng)納入進(jìn)行比對研究。對于比對研究選擇不同開發(fā)階段候選藥的，應(yīng)充分評估產(chǎn)品開發(fā)期間藥學(xué)變更（如有）對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。候選藥制劑應(yīng)盡可能來源于不同的原液批次，以充分體現(xiàn)產(chǎn)品的批間變異性。
3. 5. 3 參照藥及候選藥批次
2022 年我國頒布的《生物類似藥相似性評價和適應(yīng)證外推技術(shù)指導(dǎo)原則》對于相似性研究中批次數(shù)量描述為“考慮到生物制品結(jié)構(gòu)的異質(zhì)性和批間的變異性，比對研究應(yīng)納入足夠代表性批次的參照藥建立相似性評價可接受范圍，批次數(shù)量的要求取決于質(zhì)量屬性和分析方法的變異程度，應(yīng)能對候選藥和參照藥的質(zhì)量相似性進(jìn)行有意義的比較”［26］。
在批次數(shù)量上，美國FDA要求納入至少10批次具有一定時間跨度的參照藥與 6 ~ 10批商業(yè)化生產(chǎn)和臨床試驗用候選藥進(jìn)行質(zhì)量比對研究，以獲得參照藥的質(zhì)量屬性變異范圍以及充分理解和評估候選藥的批間質(zhì)量差異［42］。我國藥品技術(shù)審評部門結(jié)合我國生物類似藥的研發(fā)現(xiàn)狀，也在積極推進(jìn)相關(guān)工作，期望能夠進(jìn)一步明確規(guī)范質(zhì)量相似性研究批次數(shù)量的要求。
總之，應(yīng)采用具有統(tǒng)計學(xué)意義的足夠批次候選藥及原研參照藥進(jìn)行相似性研究，并合理擬定相似性的評價方法和標(biāo)準(zhǔn)，按相關(guān)指導(dǎo)原則規(guī)范開展相似性評估。
3. 5. 4 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)
產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是候選藥與原研藥需充分進(jìn)行評估的質(zhì)量差異。司美格魯肽的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包括聚體、降解雜質(zhì)、修飾／偶聯(lián)基團(tuán)相關(guān)雜質(zhì)、不對稱碳立體異構(gòu)體、修飾變異體（如甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脫酰胺／異構(gòu)化）中間體殘留及工藝副產(chǎn)物等。對于酵母發(fā)酵表達(dá)的產(chǎn)物可能還存在甲基化、乙?；?、糖基化等翻譯后修飾產(chǎn)物，宏觀上表現(xiàn)為分子大小異質(zhì)體、電荷異質(zhì)體及糖基化異質(zhì)體等。通過高溫、酸堿條件、光照、機(jī)械強(qiáng)降解和潛在的氧化還原反應(yīng)，將司美格魯肽的降解樣品暴露于上述極端條件，可能會產(chǎn)生降解片段，通過聚合產(chǎn)生二聚體及多聚體，異構(gòu)化產(chǎn)生立體異構(gòu)體，N‐末端脫除二肽產(chǎn)生截短型等。由于司美格魯肽分子中存在多個不對稱碳原子，立體異構(gòu)體的研究還應(yīng)明確立體異構(gòu)體位點。上述產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)可能與表達(dá)體系、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)時間、下游純化工藝、過程控制、貯存運輸?shù)让芮邢嚓P(guān)，生產(chǎn)工藝操作及分析方法本身的系統(tǒng)誤差等因素也是產(chǎn)品質(zhì)量批間差異性的主要原因。
產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是脂肪酸鏈修飾重組多肽類藥物的重要質(zhì)量屬性，也是相似性研究重點關(guān)注的內(nèi)容之一。對于候選藥而言，生產(chǎn)工藝和分析方法往往無法做到與原研一致，在充分研究產(chǎn)品有關(guān)雜質(zhì)（分離／純化／制備、鑒別／結(jié)構(gòu)確證、活性研究等）和分析生產(chǎn)工藝與產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)相關(guān)性的基礎(chǔ)上，應(yīng)盡可能采用多種方法，包括但不限于反相高效液相色譜、分子排阻色譜、離子交換色譜、疏水色譜等對產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行分離，采用質(zhì)譜／質(zhì)譜聯(lián)用等方法進(jìn)行產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的鑒別，并與原研藥進(jìn)行頭對頭對比研究，以消除由分析方法的不同而造成的差異。當(dāng)產(chǎn)品中出現(xiàn)與參照藥同時具有的同種雜質(zhì)，其含量應(yīng)不高于參照藥。當(dāng)產(chǎn)品中出現(xiàn)參照藥中不存在的新雜質(zhì)，其含量超出 0. 1% 時，應(yīng)通過富集進(jìn)行定性或定量研究；其含量超出 0. 5% 時，需通過富集開展定量研究并進(jìn)行分析鑒定及安全性評價和免疫原性研究。如雜質(zhì)中存在具有潛在的遺傳毒性的物質(zhì)，應(yīng)嚴(yán)格按照 ICH M7對其進(jìn)行風(fēng)險評估［41］。
3. 5. 5 穩(wěn)定性研究
開展穩(wěn)定性對比研究時，應(yīng)盡可能使用與參照藥效期相近的候選藥進(jìn)行。對于司美格魯肽及脂肪酸鏈修飾重組多肽，除長期穩(wěn)定性和加速穩(wěn)定性對比研究外，還應(yīng)選擇敏感的條件（如高溫、光照、氧化、酸、堿、振蕩等）和適當(dāng)?shù)目疾熘笜?biāo)開展候選藥和參照藥穩(wěn)定性變化趨勢的比對研究，并采用作圖／列表的方式定量分析候選藥和原研藥的降解途徑、降解趨勢和降解速率的異同。為準(zhǔn)確、全面地研究穩(wěn)定性的異同，建議采用至少 3 批我國市場來源的原研及擬上市商業(yè)化工藝候選藥進(jìn)行頭對頭穩(wěn)定性相似性研究與分析。候選藥降解途徑與降解趨勢應(yīng)與參照藥一致，候選藥主要增長雜質(zhì)種類與增長趨勢均應(yīng)與參照藥相似，加速過程中新增的雜質(zhì)也應(yīng)在參照藥的雜質(zhì)譜內(nèi)，降解速率應(yīng)不快于參照藥，否則可認(rèn)為候選藥的質(zhì)量與參照藥存在一定差異。
3. 5. 6 質(zhì)量相似性評價
質(zhì)量相似性是生物類似藥整體相似性的基礎(chǔ)，也是適應(yīng)證外推的前提［26］。首先，基于對參照藥蛋白結(jié)構(gòu)、理化特性、純度和雜質(zhì)、生物學(xué)功能、免疫學(xué)特性等質(zhì)量屬性與生物活性、PK／藥物效應(yīng)動力學(xué)（pharmacodynamics，PD）、有效性、安全性和免疫原性等相關(guān)性的認(rèn)知，采用合適的風(fēng)險評估工具對質(zhì)量屬性進(jìn)行風(fēng)險評估與分級，對于質(zhì)量屬性權(quán)重的評估應(yīng)有合理的研究數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)支持；其次，根據(jù)質(zhì)量屬性的特征與變異性以及風(fēng)險分級情況，采用合適的分析方法對具有統(tǒng)計學(xué)意義的足夠批次的候選藥和原研藥進(jìn)行定量和／或定性研究，根據(jù)研究結(jié)果建立相似性評價方法和標(biāo)準(zhǔn)；最后，對候選藥和參照藥之間的質(zhì)量差異進(jìn)行充分的研究，可結(jié)合產(chǎn)品不同質(zhì)量屬性制檢的相關(guān)性已有認(rèn)知并進(jìn)行評估，或進(jìn)一步通過非臨床／臨床研究重點關(guān)注質(zhì)量差異是否對產(chǎn)品安全性、有效性和免疫原性等產(chǎn)生影響。對質(zhì)量差異與臨床風(fēng)險獲益之間的相關(guān)性認(rèn)知尚不充分或存在不確定性的，需結(jié)合非臨床／或臨床證據(jù)科學(xué)論證質(zhì)量差異是否具有臨床意義。
在司美格魯肽的生物類似藥實際審評中發(fā)現(xiàn)存在如下問題：①結(jié)構(gòu)表征不充分：缺少流體動力學(xué)半徑、脂肪酸側(cè)鏈結(jié)構(gòu)、氧化、天冬氨酸脫酰胺／異構(gòu)化、白蛋白親和力、GLP‐1R親和力、司美格魯肽前體等方面的研究及與原研的對比研究；②產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)研究不完善：對產(chǎn)品結(jié)構(gòu)、修飾／偶聯(lián)基團(tuán)相關(guān)雜質(zhì)、工藝中間體殘留、工藝副產(chǎn)物、降解雜質(zhì)的認(rèn)知和研究不充分；③批間一致性存在差異：鼓勵采用先進(jìn)的工藝開發(fā)方法理解候選藥關(guān)鍵物料屬性、關(guān)鍵工藝參數(shù)和關(guān)鍵質(zhì)量屬性之間的相關(guān)性，有針對性地開發(fā)工藝和制定產(chǎn)品控制策略，建立起綜合物料、生產(chǎn)工藝、設(shè)施設(shè)備、過程控制、放行和穩(wěn)定性檢測等要素的有效質(zhì)量風(fēng)險控制體系；④穩(wěn)定性相似性研究不全面：強(qiáng)制降解條件不全面，除高溫、光照、振蕩、凍融之外，常缺少還原／氧化、酸性條件、堿性條件下產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的研究，缺少在強(qiáng)制降解條件下對產(chǎn)品純度、分子量、高分子量雜質(zhì)、比活性等的分析研究及與原研參照藥的比對研究。
另外，司美格魯肽作為具有多種獲批適應(yīng)證且原研仍在進(jìn)行多種適應(yīng)證臨床試驗的藥物，當(dāng)原研藥獲批新的適應(yīng)證后，生物類似藥在進(jìn)行適應(yīng)證外推時，如增加或改變臨床作用機(jī)制，則質(zhì)量屬性風(fēng)險評級和權(quán)重可能會需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，質(zhì)量差異所帶來的臨床獲益‐風(fēng)險也需重新進(jìn)行評估。候選藥是否可以進(jìn)行適應(yīng)證外推，取決于對與適應(yīng)證外推相關(guān)關(guān)鍵產(chǎn)品質(zhì)量屬性與原研藥的相似性。
3. 6 國外生物類似藥新發(fā)布指南
美國 FDA 于 2023 年 11 月發(fā)布了司美格魯肽注射液豁免人體生物等效性研究指南，體內(nèi)生物等效性試驗豁免要求［43‐44］，指出候選藥豁免體內(nèi)生物等效性研究的藥學(xué)研究要求。EMA于2024年1月發(fā)布的“制定關(guān)于生物類似藥開發(fā)中定制臨床方法的思考性文件的概念文件”中提出對于結(jié)構(gòu)簡單作用機(jī)制明確的生物類似藥，當(dāng)生物類似藥在分析和功能水平上與參照藥高度相似時，就有可能減免部分臨床研究。在概念文件中表示，即將發(fā)表的思考性文件將論證“明確定義的分析／功能性（質(zhì)量）數(shù)據(jù)如何預(yù)測臨床結(jié)果”［45］。
歐美監(jiān)管機(jī)構(gòu)認(rèn)為，隨著知識的不斷增長及分析和功能表征可能性的不斷增加，重新審視生物類似藥（尤其是重組蛋白和單克隆抗體）臨床療效試驗的必要性有待進(jìn)一步商榷，以保持生物類似藥途徑對開發(fā)者和市場的吸引力，同時保證患者未來能獲得安全有效的生物制品?；谏鲜稣J(rèn)知，歐美監(jiān)管機(jī)構(gòu)陸續(xù)推出生物類似藥基于藥學(xué)高度相似性減免臨床研究的相關(guān)指南，對藥學(xué)質(zhì)量相似性研究提出了更高的要求。
4、小結(jié)及展望
近兩年，隨著口服制劑的上市以及體質(zhì)量管理適應(yīng)證陸續(xù)獲批，具有多種適應(yīng)證臨床獲益的司美格魯肽日益成為生物類似藥研發(fā)領(lǐng)域新的熱點。2022 年原研專利到期后，我國多家研發(fā)機(jī)構(gòu)／申辦方先后積極投入生物類似藥的研究探索，以期提高國內(nèi)患者用藥的可及性，降低用藥成本。
我國司美格魯肽生物類似藥的開發(fā)尚處于臨床或臨床前階段，由于改構(gòu)，本品相對利拉魯肽與人GLP‐1同源性進(jìn)一步降低，加之其更長效，導(dǎo)致可能產(chǎn)生免疫原性反應(yīng)風(fēng)險更高，臨床試驗過程中應(yīng)進(jìn)行充分關(guān)注。
本文基于對多個司美格魯肽品種的審評實踐經(jīng)驗，結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研等對司美格魯肽多個劑型及規(guī)格的國內(nèi)外注冊、申報情況及其產(chǎn)品特異性的質(zhì)量屬性與質(zhì)量相似性評價等問題進(jìn)行了系統(tǒng)闡述，以期通過研發(fā)生產(chǎn)方和監(jiān)管方的共同努力，加強(qiáng)產(chǎn)品研發(fā)不同階段共性問題和技術(shù)層面的交流，盡量與歐美等國家的監(jiān)管能力與研發(fā)水平保持一致，盡早為患者提供安全有效、質(zhì)量可控的司美格魯肽藥物。
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來源：中國生物制品學(xué)雜志
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