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樹脂半薄切片是一種以樹脂作為支撐載體，經(jīng)過取材固定、清洗、脫水、滲透、包埋、切片染色獲得的組織切片，與石蠟切片相比，其厚度更?。?00nm-1um之間）、分辨率更高、染色不用脫樹脂等特點(diǎn)。

LR White樹脂是一種多羥基丙烯酸樹脂，具有較高的親水性，易于滲透和切片，對(duì)于染液的親和性良好，廣泛用于組織結(jié)構(gòu)研究。

具體操作流程如下：

1、取材固定

選取觀測(cè)目標(biāo)位置，用雙面刀片切取2mm左右的組織，于固定液中浸泡固定24h。固定完成后于4℃冰箱保存，待不同處理全部取樣完畢后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

固定液可以采用2.5%戊二醛、4%多聚甲醛或者二者的混合液，對(duì)于不易滲透的組織，固定時(shí)可采用抽真空的方式加速固定液滲透。

2、脫水

脫水顧名思義，就是將組織中的水分去除，便于樹脂滲透。脫水不徹底，樹脂滲透受阻，組織結(jié)構(gòu)受損，嚴(yán)重的在切片時(shí)就直接在水面上碎成粉末狀；脫水過度會(huì)造成組織內(nèi)含物抽提過度。不管是哪一種狀態(tài)都對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保存不利。

具體操作流程：吸棄原有溶液，向離心管中分別加入30%-50%-70%-90%-100%-100%乙醇，每級(jí)脫水30min。

3、滲透

滲透是指采用樹脂和乙醇的混合液以及純樹脂逐步將組織內(nèi)的有機(jī)試劑取代成純樹脂。

具體操作流程：分別配置LR White樹脂與乙醇的梯度混合液（30%、50%、70%）進(jìn)行滲透，其中30%樹脂1h-50%樹脂3h-70%樹脂5h-100%樹脂5h兩次。

4、聚合

將滲透好的組織調(diào)整方向后放入包埋模具中，于60℃烘箱聚合24h。

注意，在放置組織時(shí)可以采用牙簽挑取，利用牙簽尖端附著的微量樹脂液滴，將組織包裹移動(dòng)。盡量不要使用鑷子，鑷子夾取的力度不合適，會(huì)造成組織變性，從而影響結(jié)構(gòu)。

5、切片

聚合好的組織，先用刀片將多余的樹脂去掉，暴露組織后于切片機(jī)上進(jìn)行切片。切片采用玻璃刀，切下的片子于水槽中展開，利用撈片環(huán)將切片撈起，置于載玻片上45℃烤干。

注意：玻璃刀需要用玻璃刀制刀機(jī)進(jìn)行制備，制備好的玻璃刀粘上水槽后即可進(jìn)行切片，玻璃刀制備的狀態(tài)會(huì)影響切片效果（褶皺、刀痕、卷曲等）。

6、染色鏡檢

染色時(shí)先將載玻片置于烤片機(jī)上進(jìn)行預(yù)熱（45℃），根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選取不同的染液進(jìn)行染色即可。切好的片子可以統(tǒng)一放置在切片盒中，待所有實(shí)驗(yàn)組織都切完后進(jìn)行統(tǒng)一染色。

本文以甲苯胺藍(lán)為例：滴加1%甲苯胺藍(lán)5ul，于烤片機(jī)上進(jìn)行恒溫染色，待染液液滴周圍出現(xiàn)金色環(huán)帶后，用蒸餾水清洗掉多余染液，于烤片機(jī)上烤干后鏡檢。