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一、實(shí)驗(yàn)原理

油紅O（Oil Red O）脂肪染色法是一種常用于檢測組織或細(xì)胞內(nèi)脂肪情況的方法。油性紅O是一種脂溶性染料，具有很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑特性。其染色原理基于油性紅O與組織或細(xì)胞內(nèi)的中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白的特異性吸附作用，從而使脂肪能夠被染色。

在油紅O染色的過程中，染料能夠高度溶解于脂肪內(nèi)部。當(dāng)染料溶液加入到組織切片或細(xì)胞樣品中時(shí)，染料會(huì)從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)移至組織或細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)中。這種轉(zhuǎn)移過程導(dǎo)致組織內(nèi)的脂肪結(jié)合油性紅O染料而呈現(xiàn)紅色。油性紅O染色方法可用于分析細(xì)胞樣品中脂質(zhì)的狀況。通過顯微鏡觀察，可以清晰地看到染色的脂肪滴，從而評(píng)估細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的含量、分布和形態(tài)。這項(xiàng)技術(shù)在研究脂質(zhì)代謝、肥胖癥、心血管疾病等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1、棄去培養(yǎng)基，用PBS洗滌兩次，再將油紅O固定液添加至培養(yǎng)皿中固定30分鐘（可考慮延長時(shí)間）。

2、制備油紅O染液，將儲(chǔ)備液5%油紅O染液與蒸餾水按3:2稀釋。

3、調(diào)配60%異丙醇，將6毫升異丙醇與4毫升蒸餾水混合。

4、倒掉固定液，用蒸餾水洗滌兩次。

5、加入60%異丙醇浸泡20秒（不要浸泡太久）。

6、在去除60%異丙醇后，加入新配制好的油紅O染色液，浸泡20分鐘。目的是使油紅O從60%異丙醇中轉(zhuǎn)移到脂質(zhì)中，從而使脂肪滴呈現(xiàn)出紅色。

7、棄去染色液，用60%異丙醇漂洗20秒至清晰。使用蒸餾水洗滌2-5次，直至無多余染料。

8、加入蘇木素染色液，對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行1-2分鐘的復(fù)染。清除染色液后，使用蒸餾水洗滌5次。

9、將細(xì)胞浸泡1分鐘于油紅O緩沖液中，然后倒掉。

10、加入蒸餾水以覆蓋細(xì)胞，然后在顯微鏡下觀察和拍攝圖像。

11、使用軟件Image J軟件分析油紅染色中的脂滴面積比。

三、注意事項(xiàng)

1、建議在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中設(shè)計(jì)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。例如，可以選擇脂質(zhì)豐富的肝臟組織作為陽性對(duì)照樣本，而針對(duì)陰性對(duì)照則可參考文獻(xiàn)選擇無脂肪沉積的組織樣本。這樣的設(shè)計(jì)有助于驗(yàn)證染色結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，確保所觀察到的油紅O染色效果與預(yù)期一致。

2、染色結(jié)果應(yīng)盡快觀察及拍照，不能長期保存。

3、油紅O用于染色脂質(zhì)物質(zhì)，但由于石蠟切片處理過程中無法保留脂質(zhì)物質(zhì)，因此石蠟切片不能進(jìn)行油紅O染色。

4、在進(jìn)行油紅染色時(shí)，需要輕柔操作，因?yàn)橹稳菀滓莆弧?/span>

5、蘇木素復(fù)染時(shí)間不能過長。

如圖為肝臟的油紅O染色圖片（對(duì)照組與處理組）

參考資料：

Wang W, Chen S, Xu S, Liao G, Li W, Yang X, Li T, Zhang H, Huang H, Zhou Y, Pan H, Lin C. Jianpi Shengqing Huazhuo Formula improves abnormal glucose and lipid metabolism in obesity by regulating mitochondrial biogenesis. J Ethnopharmacol. 2024 Jan 30;319(Pt 1):117102. doi: 10.1016/j.jep.2023.117102. Epub 2023 Sep 3. PMID: 37660955.

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