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在高效液相色譜分析中，基線是指色譜柱經(jīng)流動(dòng)相沖洗，與流動(dòng)相達(dá)到平衡后，檢測器在一段時(shí)間內(nèi)測出的信號(hào)曲線。在色譜儀各項(xiàng)檢測條件正常的情況下，基線應(yīng)平行于時(shí)間軸。然而，高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致，這些因素涉及液相色譜系統(tǒng)的多個(gè)組成部分。以下是一些常見的原因及其相應(yīng)的解決方法：

 

一、色譜柱相關(guān)因素

 

1、色譜柱未平衡：

 

原因：色譜柱在更換流動(dòng)相或長時(shí)間未使用后，需要一定的時(shí)間來達(dá)到平衡狀態(tài)。在平衡過程中，基線可能會(huì)出現(xiàn)波動(dòng)。

 

解決方法：使用中等強(qiáng)度的溶劑沖洗色譜柱，特別是在更換流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)先用10到20倍體積的新流動(dòng)相進(jìn)行沖洗，以確保色譜柱充分平衡。

 

2、色譜柱內(nèi)有氣泡：

 

原因：色譜柱中的氣泡會(huì)影響流動(dòng)相的流動(dòng)性和色譜峰的形狀，從而導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。

 

解決方法：在檢測器的水池出口加負(fù)壓調(diào)節(jié)器，以減少氣泡的生成。同時(shí)，檢查色譜柱的連接處是否緊密，防止空氣進(jìn)入。

 

二、流動(dòng)相相關(guān)因素

 

1、流動(dòng)相溶解氣體：

 

原因：流動(dòng)相中的溶解氣體會(huì)在色譜柱內(nèi)析出，形成微小氣泡，影響基線穩(wěn)定性。

 

解決方法：對流動(dòng)相進(jìn)行超聲波脫氣處理，時(shí)間一般為15-30分鐘?；蛘咄ㄟ^充氮等方式去除溶解氣體。

 

2、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化：

 

原因：流動(dòng)相的配比或流速的變化會(huì)直接影響色譜峰的分離效果和基線穩(wěn)定性。

 

解決方法：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整流動(dòng)相的配比和流速，并定期檢查流動(dòng)相的組成及流速，確保其穩(wěn)定性。

 

三、泵相關(guān)因素

 

1、高壓泵止回閥堵塞：

 

原因：止回閥堵塞會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相流動(dòng)不暢，引起基線波動(dòng)。

 

解決方法：拆除單向閥，用超聲波在純水中浸泡20分鐘以上，清除堵塞物。

 

2、高壓泵墊片損壞：

 

原因：墊片損壞會(huì)導(dǎo)致泵壓不穩(wěn)，進(jìn)而影響基線穩(wěn)定性。

 

解決方法：更換高壓泵的密封墊，確保泵壓穩(wěn)定。

 

3、泵中有氣泡：

 

原因：泵中的氣泡會(huì)隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱，影響基線穩(wěn)定性。

 

解決方法：檢查泵的進(jìn)液口和排液口，確保無氣泡產(chǎn)生。如有必要，可拆開泵體進(jìn)行清洗和排氣。

 

四、檢測器相關(guān)因素

 

1、檢測器波長設(shè)置不當(dāng)：

 

原因：如果檢測器的波長沒有設(shè)置在樣品的最大吸收波長處，會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。

 

解決方法：將探測器的測試波長調(diào)整到樣品的最大吸收波長處。

 

2、檢測器污染：

 

原因：長期使用后，檢測器內(nèi)部可能會(huì)積累污染物，影響基線穩(wěn)定性。

 

解決方法：定期清洗檢測器，去除污染物?？梢允褂眉状蓟蚱渌麖?qiáng)極性溶劑進(jìn)行沖洗。

 

五、其他因素

 

1、柱溫波動(dòng)：

 

原因：柱溫的微小變化都可能引起基線的波動(dòng)。

 

解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器來穩(wěn)定溫度。

 

2、系統(tǒng)漏液：

 

原因：系統(tǒng)中可能存在漏液點(diǎn)，導(dǎo)致流動(dòng)相流失和基線不穩(wěn)定。

 

解決方法：檢查管路接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液等，確保系統(tǒng)密封性良好。

 

綜上所述，高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致。在解決問題時(shí)，需要綜合考慮色譜柱、流動(dòng)相、泵、檢測器以及系統(tǒng)其他部分的狀況，并采取相應(yīng)的措施進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。