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常見無菌實驗操作的注意事項

嘉峪檢測網(wǎng)        2024-10-09 09:01

這一期我們分享細(xì)胞培養(yǎng)中,幾個常見實驗操作的注意事項。包括:擦拭、加蓋、灼燒、移液。

 

1、 擦拭

 

實驗過程中需要擦拭的對象有工作臺面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。

 

對于工作臺面,在實驗開始前、結(jié)束后都需要試用70%乙醇擦拭,如果實驗過程中出現(xiàn)液體滴落在臺面,也需要擦拭臺面后才能繼續(xù)實驗;

 

對于手套,除了佩戴一次性滅菌處理過的手套外,整個實驗過程都應(yīng)間隔一段時間就擦拭手套一次;

 

對于瓶皿/孔板,如果實驗過程中被拿出過生物安全柜范圍以外,那么再次放回生物安全柜或培養(yǎng)箱之前,都應(yīng)該用70%乙醇進(jìn)行外表面擦拭;

 

對于耗材/器械表面,如果是一次性耗材,觸碰了實驗臺面、或其他實驗耗材/器械/手套等的外表面,都應(yīng)該扔棄不再試用;如果是非一次性的器械,出現(xiàn)上述誤觸,則應(yīng)該立即用70%乙醇擦拭整個可能被污染的區(qū)域。

 

2、 加蓋

 

對于需要反復(fù)使用的含蓋的器皿,當(dāng)實驗結(jié)束后,清洗瓶蓋時,應(yīng)該注意徹底清潔瓶蓋內(nèi)側(cè),包括含橡膠墊的部分。

 

有條件的實驗室,可以在器皿蓋上蓋子后,使用70%乙醇擦拭外表面,然后再通過外層包裹錫箔紙的方式,來盡可能降低外部環(huán)境灰塵沉積在蓋子和器皿之間縫隙的現(xiàn)象。

 

3、 灼燒

 

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法,火焰也會造成附近的氣流上升,避免灰塵沉降。

 

但是,在生物安全柜內(nèi),點燃酒精燈進(jìn)行灼燒是不合適的。

 

生物安全柜工作時,會為內(nèi)部空間提供一個穩(wěn)定的層流,但酒精燈的火焰會對它產(chǎn)生干擾,進(jìn)而影響內(nèi)部的無菌環(huán)境,提高了生物污染的風(fēng)險。

 

4、 移液

 

移液部分,我們分為小體積移液、大體積移液和溶液傾倒轉(zhuǎn)移來講解。

 

對于小體積移液,一般特指小于1mL的液體轉(zhuǎn)移,因為其體積小,通常需要使用移液器來操作。

 

而小體積的移液吸頭比較短,在吸液的過程中有可能出現(xiàn)移液器下端也進(jìn)入瓶皿內(nèi)部的情況。

 

此時就需要特別注意,不能讓移液器碰觸到瓶皿內(nèi)壁,如果碰觸了,則應(yīng)該立即使用70%乙醇清潔移液器下端,然后才可以繼續(xù)往下進(jìn)行實驗操作。

 

對于大體積移液,例如5/10/25mL或以上的液體轉(zhuǎn)移,可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動移液器輔助移液。

 

但不管是什么體積的移液,都應(yīng)該確保吸頭或移液管的末端內(nèi)是含有棉花或透氣膠塞的,這樣可以有效避免因為移液過程中,液體吸入移液器內(nèi)部造成污染。

 

但由于大體積移液的液體轉(zhuǎn)移速度快、量大,有時候即使有棉花,也會出現(xiàn)液體被吸入移液器內(nèi)的現(xiàn)象,這時就只能停止實驗,或改用其他未被污染的移液器來操作了。

 

關(guān)于溶液傾倒,有時液體的轉(zhuǎn)移不需要特別精準(zhǔn),會把溶液從一個瓶內(nèi)直接倒入另一個瓶內(nèi)或管內(nèi)。

 

在操作時,需要注意溶液從原來的容器中倒入新的容器時,瓶口應(yīng)保持懸空,而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來完成液體轉(zhuǎn)移。

 

因為后者會容易出現(xiàn)液橋,即液體在兩個挨得很近的接觸面之間形成的水柱,這樣的水柱容易被微生物進(jìn)入;同時,在傾倒的時候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面,因為這樣也會提高微生物污染的風(fēng)險。

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來源:實驗老司機(jī)

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