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一、腫瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備

 

1、細(xì)胞株選擇

 

選擇適合的腫瘤細(xì)胞株，如乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或結(jié)直腸癌細(xì)胞等，確保這些細(xì)胞株在小鼠模型中已被驗(yàn)證能夠成瘤。

 

2、細(xì)胞的活力和狀態(tài)

 

確保接種的腫瘤細(xì)胞具有高活力和良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。在接種前，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、臺(tái)盼藍(lán)染色等方法評(píng)估細(xì)胞的存活率，一般來(lái)說(shuō)，存活率應(yīng)在90%以上。如果細(xì)胞存活率較低，可能會(huì)導(dǎo)致接種后成瘤效率降低甚至不成瘤。

 

3、細(xì)胞的濃度

 

選擇合適的細(xì)胞濃度進(jìn)行接種。通常，每只小鼠的接種量在1×10?至1×10?個(gè)細(xì)胞之間，但具體濃度可能因腫瘤細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩悺Ｄ承盒猿潭容^高的腫瘤細(xì)胞可能在較低濃度下就能成瘤，而一些生長(zhǎng)較為緩慢的細(xì)胞可能需要更高的濃度，如某些低度惡性的甲狀腺腫瘤細(xì)胞、部分前列腺癌的腫瘤細(xì)胞等。

 

4、細(xì)胞的培養(yǎng)條件

 

維持腫瘤細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)，包括培養(yǎng)基的成分、溫度、CO?濃度等。

 

二、小鼠的選擇和準(zhǔn)備

 

1、品系

 

不同品系的小鼠對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性可能不同。常用的小鼠品系如BALB/c、C57BL/6等，根據(jù)腫瘤細(xì)胞株的特點(diǎn)選擇免疫缺陷或免疫健全的小鼠品系。如BALB/c 小鼠在乳腺癌模型中可能更容易成瘤。

 

2、年齡和性別

 

一般選擇6-8周齡的小鼠，雌性或雄性均可，但要保持實(shí)驗(yàn)中性別和年齡的一致性。

 

老年小鼠的免疫系統(tǒng)可能相對(duì)較弱，對(duì)腫瘤細(xì)胞的抵抗力也會(huì)有所不同。

 

3、免疫狀態(tài)

 

如果需要研究免疫相關(guān)的腫瘤發(fā)生機(jī)制，可以選擇免疫健全的小鼠；如果要排除免疫系統(tǒng)的影響，可以使用免疫缺陷小鼠，如裸鼠或NOD/SCID小鼠。

 

4、小鼠的健康狀況

 

確保小鼠健康，無(wú)感染和其他疾病，以免影響腫瘤細(xì)胞的接種和生長(zhǎng)。

 

5、小鼠環(huán)境準(zhǔn)備

 

在接種前將小鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，確保環(huán)境溫度、濕度和光照等條件適宜。

 

三、接種方法

 

1、皮下接種

 

這是最常見的接種方法之一，操作簡(jiǎn)單且腫瘤易于測(cè)量。在小鼠的側(cè)腹或背部皮下注射腫瘤細(xì)胞懸液，注射時(shí)要注意避免注入血管。

 

方法：先固定小鼠，右手持注射器，使針頭與小鼠皮膚呈約45度角刺入皮下，當(dāng)針頭進(jìn)入皮下后，會(huì)感到阻力減小，此時(shí)輕輕推動(dòng)注射器活塞，將腫瘤細(xì)胞懸液緩慢注入皮下，一般注射量為0.1-0.2mL左右，具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整，注射完畢后，輕輕拔出針頭，用酒精棉球再次擦拭注射部位，防止感染。

 

2、原位接種

 

根據(jù)腫瘤的類型，選擇相應(yīng)的器官進(jìn)行原位接種，如肺癌細(xì)胞可以接種到肺，乳腺癌細(xì)胞可以接種到乳腺。這種方法更能模擬腫瘤在體內(nèi)的自然生長(zhǎng)環(huán)境，但操作難度相對(duì)較高。

 

3、尾靜脈注射

 

用于建立轉(zhuǎn)移模型，將腫瘤細(xì)胞注射至小鼠尾靜脈，觀察腫瘤細(xì)胞的血液傳播和轉(zhuǎn)移。

 

四、接種后的護(hù)理和觀察

 

1、觀察小鼠的健康狀況

 

每天觀察小鼠的飲食、飲水、活動(dòng)情況、體重變化等，及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常。

 

2、測(cè)量腫瘤大小

 

定期使用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮下腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算腫瘤體積。 

 

如圖為不同處理組皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。

 

五、注意事項(xiàng)

 

1、必要時(shí)可對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉，以減少痛苦和應(yīng)激反應(yīng)。常用異氟烷或戊巴比妥鈉麻醉。

 

2、細(xì)胞注射：使用無(wú)菌注射器和細(xì)針頭（如26G或27G），將腫瘤細(xì)胞懸液緩慢注射至預(yù)定部位。皮下接種時(shí)，注射時(shí)注意避免過(guò)深或過(guò)淺，以確保細(xì)胞位于皮下組織中。

 

3、確保所有操作都在無(wú)菌條件下進(jìn)行，減少細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。接種時(shí)腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)直接影響成瘤效率，細(xì)胞應(yīng)處于活躍增殖期。小鼠的個(gè)體差異可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，盡可能保證實(shí)驗(yàn)的同質(zhì)性。

 

總之，要高效地給小鼠接種腫瘤細(xì)胞成瘤，需要綜合考慮腫瘤細(xì)胞的質(zhì)量、小鼠的選擇和接種方法等多個(gè)因素，并在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行精心的護(hù)理和觀察。