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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2024-10-17 08:31
摘 要： 建立氣相色譜法測(cè)定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑。采用乙酸乙酯作為提取溶劑，HP-1701毛細(xì)管色譜柱分離，分流比為10∶1，用氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）檢測(cè)，色譜峰面積外標(biāo)法定量。5種抗氧化劑能實(shí)現(xiàn)完全分離，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0～100 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為2.0~4.0 mg/kg，定量限為5.0~9.0 mg/kg。樣品加標(biāo)回收率為89.36%～95.92%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8%（n=6）。該方法可滿足鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑含量的檢測(cè)。
關(guān)鍵詞： 氣相色譜法； 鹽酸氯丙嗪注射液； 抗氧化劑
鹽酸氯丙嗪注射液是一種吩噻嗪類抗精神病藥，對(duì)興奮躁動(dòng)、幻覺妄想、思維障礙及行為紊亂等陽(yáng)性癥狀有較好的療效，用于治療精神分裂癥，躁狂癥或其他精神病性障礙，也可治療各種原因所致的嘔吐或頑固性呃逆[1?4]。
鹽酸氯丙嗪具有吩噻嗪母核，環(huán)中的S和N原子都是良好的電子給予體，易被氧化。鹽酸氯丙嗪注射液在日光作用下可引起氧化反應(yīng)，使注射液pH降低[2?6]，因此鹽酸氯丙嗪注射液中常需加入一定量的抗氧化劑，用以阻止其氧化變質(zhì)。然而，某些抗氧化劑的不當(dāng)使用可能會(huì)影響藥效甚至誘發(fā)一些疾病。為規(guī)范抗氧化劑的科學(xué)使用，建立相應(yīng)的檢測(cè)方法具有十分重要的意義[7]。
目前，對(duì)于食品、飼料等產(chǎn)品中抗氧化劑含量檢測(cè)文獻(xiàn)甚多[8?15]，但針對(duì)藥物制劑中多種抗氧化劑的檢測(cè)方法較為鮮見，已有藥品中的檢測(cè)方法局限于少數(shù)幾類抗氧化劑。筆者建立了氣相色譜（GC）法同時(shí)測(cè)定鹽酸氯丙嗪注射液中丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)、植酸、硫代二丙酸甘油酯5種抗氧化劑，該方法大幅縮短分析時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，為保障鹽酸氯丙嗪注射液的質(zhì)量安全以及避免抗氧化劑在鹽酸氯丙嗪注射液中的濫用提供技術(shù)手段。
1、 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
氣相色譜儀：GC-2030型，配FID檢測(cè)器，日本島津公司。
純水/超純水一體化系統(tǒng)：Milli-Q Direct-Q8型，美國(guó)密理博公司。
電子分析天平：BSA224S型，感量為0.1 mg，德國(guó)賽多利斯公司。
丙酮、乙酸乙酯：均為色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。
氯化鈉：分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。
丁基羥基茴香醚(BHA)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100 mg，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為IR-20908，北京壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
二丁基羥基甲苯(BHT)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：1 000 μg/mL，溶劑為甲醇，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為GBW (E)100651，北京壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ) 溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：1 000 μg/mL，溶劑為甲醇，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為90984JC，北京壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
植酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100 mg，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為1ST2315，北京壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
硫代二丙酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100 mg，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99%,，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為MFCD00002780，德國(guó)默克公司。
鹽酸氯丙嗪注射液樣品：武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)有限公司。
實(shí)驗(yàn)用水為二級(jí)純水。
1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
1.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液
分別準(zhǔn)確稱取BHA、植酸、硫代二丙酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0 mg于10 mL容量瓶中，再分別準(zhǔn)確移取BHT、TBHQ溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.0 mL于同一10 mL容量瓶中，以丙酮溶解并定容，渦旋混勻，得到各組分質(zhì)量濃度為100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。
1.2.2 系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液
分別準(zhǔn)確移取0、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于1.0 mL容量瓶中，以丙酮稀釋并定容，得到各組分質(zhì)量濃度均分別為0、10、20、40、50、100 μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.3 氣相色譜條件
色譜柱：HP-1701型毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；分流比：10∶1；升溫程序：初始溫度為50 ℃，保留1 min，然后以5 ℃/min速率升溫至150 ℃，再以10 ℃/min速率升溫至280 ℃，保持6 min；FID溫度：300 ℃。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
準(zhǔn)確稱取鹽酸氯丙嗪注射液樣品2 g，置于塑料離心管中，加入1 mL蒸餾水與1 g氯化鈉溶解后，再加入5.0 mL乙酸乙酯提取，以5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液，將殘?jiān)貜?fù)提取1次，合并上清液，氮吹至近干，加入1.0 mL丙酮溶解，過0.22 μm濾膜后，供氣相色譜分析。同時(shí)進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，以外標(biāo)法定量。
2、 結(jié)果與討論
2.1 提取溶劑的選擇
BHA、BHT、TBHQ、植酸、硫代二丙酸甘油酯5種抗氧化劑屬中等極性化合物，實(shí)驗(yàn)室常見可供選擇的提取試劑有乙醚、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷等?？疾焐鲜?種常見有機(jī)溶劑對(duì)鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑的提取效率見圖1。由圖1可知，在相同加標(biāo)水平（10 mg/kg）下，采用乙酸乙酯作為提取溶劑，5種抗氧化劑的加標(biāo)回收率均較為理想，水平均90%以上，其整體提取效率要優(yōu)于其他4種有機(jī)試劑，因此選擇乙酸乙酯作為提取溶劑。
圖1 使用不同提取溶劑時(shí)5種抗氧化劑的回收率（n=3）
Fig. 1 Effect of different extraction solvents on the recovery rates of 5 antioxidants with spiking （n=3）
2.2 提取溶劑體積
提取溶劑體積的選擇需同時(shí)考慮取樣量與檢測(cè)靈敏度兩個(gè)因素。當(dāng)提取溶劑體積較小時(shí)，組分的濃度就較高，檢測(cè)靈敏度自然也高；而當(dāng)提取溶劑體積偏小時(shí)，樣品被提取不完全，回收率不能滿足試驗(yàn)要求，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。試驗(yàn)考察提取溶劑體積分別為1、2、5、10 mL時(shí)，5種抗氧化劑的檢測(cè)靈敏度及回收率。結(jié)果表明，當(dāng)提取溶劑體積分別為1、2 mL時(shí)，5種抗氧化劑的回收率均低于80%；當(dāng)提取溶劑體積分別為5、10 mL時(shí)，5種抗氧化劑的回收率均高于90%?？紤]到檢測(cè)靈敏度、經(jīng)濟(jì)成本等因素，最終設(shè)定取樣質(zhì)量為2 g，提取溶劑的體積為5 mL。
2.3 氯化鈉添加量
氯化鈉的加入能夠降低5種抗氧化劑在試樣中的溶解程度，從而更容易被提取出來。向空白試樣中加入一定量的5種抗氧化劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，保持其他條件不變，考察5種抗氧化劑的回收率，結(jié)果見圖2。由圖2可知，隨著氯化鈉添加量的逐步增加，5種抗氧化劑的色譜峰面積均有所增大。當(dāng)氯化鈉加入質(zhì)量為1 g時(shí)，樣品溶液中氯化鈉已趨于飽和，5種抗氧化劑加標(biāo)回收率達(dá)到最高，因此選擇氯化鈉添加量為1.0 g。
圖2 不同氯化鈉添加量對(duì)應(yīng)的5種抗氧化劑回收率（n=3）
Fig. 2 Effect of sodium chloride addition on the recovery rates of 5 antioxidants with added standards （n=3）
2.4 色譜柱的篩選
采用HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-INNOWAX毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3種常見毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，HP-1701毛細(xì)管色譜柱對(duì)5種抗氧化劑分離效果良好，HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱分離效果最差，而HP-5毛細(xì)管色譜柱對(duì)于植酸、TBHQ兩個(gè)組分的分離效果較差。因柱箱升溫程序?qū)Ω髂繕?biāo)物的分離也有一定影響，經(jīng)過多次試驗(yàn)摸索發(fā)現(xiàn)，依據(jù)1.3色譜條件，5種抗氧化劑分離效果佳，各組分峰形良好，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖3。
4—植酸；5—硫代二丙酸甘油酯圖3 5種抗氧化劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖
Fig. 3 Gas chromatograms of 5 mixed standard solutions of antioxidants
t/min ；1—BHA；2—BHT；3—TBHQ；
2.5 分流比的選擇
一般來說，分流比設(shè)置得越低，檢測(cè)的靈敏度越高。在氣相色譜圖上TBHQ與植酸出峰位置接近，互相間容易產(chǎn)生干擾，從而影響兩者的分離效果，造成二者檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。通過反復(fù)試驗(yàn)摸索，最終設(shè)置分流比為10∶1時(shí)效果較佳，不僅提高了檢測(cè)靈敏度，同時(shí)保證了目標(biāo)物的分離度，提升檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，因此設(shè)置分流比為10∶1。
2.6 線性關(guān)系、檢出限及定量限
取一定量的5種抗氧化劑系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于進(jìn)樣小瓶中，采用所建方法進(jìn)行分析，分別以5種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。以3倍信噪比對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度折算成樣品中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為方法檢出限，以10倍信噪比對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度折算成樣品中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為定量限。5種抗氧化劑質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表1。由表1可知，5種抗氧化劑的質(zhì)量濃度在0～100 mg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。檢出限為2.0~4.0 mg/kg，定量限為5.0~9.0 mg/kg。
表1 5種抗氧化劑線性關(guān)系、檢出限及定量限
Tab. 1 Linear relationship, detection limit, and quantification limit of 5 antioxidants
2.7 樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)
取未檢出5種抗氧化劑的空白鹽酸氯丙嗪注射液，以10、20、100 mg/kg水平分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.4步驟處理并平行測(cè)定6次，試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，5種抗氧化劑回收率為89.36%~95.92%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8%，表明該方法準(zhǔn)確度較高且精密度良好。
表2 樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）
Tab. 2 Precision and spiked recovery test results (n=6)
3、 結(jié)語(yǔ)
通過優(yōu)化提取溶劑、氯化鈉添加量、色譜柱型號(hào)以及分流比等試驗(yàn)參數(shù)，建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑含量。該方法具有靈敏、快速、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，可應(yīng)用于鹽酸氯丙嗪注射液中抗氧化劑成分的快速定量檢測(cè)，為保障藥物制劑的質(zhì)量安全提供技術(shù)手段。
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引用本文： 朱玉婷，李燦，武蕊，等 . 氣相色譜法測(cè)定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2024，33（8）：7. (ZHU Yuting, LI Can, WU Rui, et al. Determination of 5 antioxidants in chlorpromazine hydrochloride injection by gas chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(8): 7.)
來源：化學(xué)分析計(jì)量
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