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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-10-19 10:43
摘 要： 建立高效液相色譜測定含有蜂王漿成分化妝品中10-羥基-2-癸烯酸（10-HDA）的方法。在1.000 g樣品中加入8 mL甲醇，超聲提取10 min，靜置至室溫，用甲醇定容至10 mL，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，在35 ℃柱溫下，采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）進(jìn)行分離。以甲醇-0.12%磷酸溶液（體積比為55∶45）為流動相進(jìn)行等度洗脫，流量為1.0 mL/min，進(jìn)樣體積為10 μL，以二極管陣列檢測器檢測，檢測波長為210 nm。10-HDA的質(zhì)量濃度在0.22～54.19 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，方法檢出限和定量限分別為0.65、2.17 μg/g。樣品加標(biāo)回收率為96.59%～102.09%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%～1.33%（n=6）。該方法高效，靈敏度高，可用于含蜂王漿成分化妝品中10-HDA的含量檢測。
關(guān)鍵詞： 化妝品； 蜂王漿； 10-羥基-2-癸烯酸； 高效液相色譜法
隨著我國化妝品市場的快速發(fā)展和大眾消費(fèi)理念的轉(zhuǎn)變，“天然化妝品”應(yīng)運(yùn)而生，并深受消費(fèi)者的追捧[1]。蜂王漿等天然蜂產(chǎn)品成為化妝品原料的關(guān)注熱點(diǎn)[2]。
蜂王漿含有大量的氨基酸、維生素、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，具有提高免疫力、抗感染、調(diào)節(jié)血糖等功效[3?4]。此外，蜂王漿富含超氧化物歧化酶、黃酮類化合物和微量元素等輔酶因子，可有效地清除、抑制自由基[5]，還可以通過Akt/mTOR/HIF-1α/NF-κB信號通路促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，促進(jìn)、增強(qiáng)皮膚細(xì)胞的活力，改善細(xì)胞的新陳代謝[6]。同時(shí)，蜂王漿中10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)可以抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞中酪氨酸酶的活性，在動物模型局部使用具有明顯的脫色活性[7]。此外，蜂王漿具有保濕，乳化和穩(wěn)定特性[8]，因此，添加蜂王漿的化妝品具有保濕、抗皺、祛痘抗痤瘡和防止色素沉積等功效[9]。蜂王漿作為天然化妝品原料，其市場需求不斷擴(kuò)大。部分化妝品生產(chǎn)廠家在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，采用不含蜂王漿的配方生產(chǎn)宣稱蜂王漿為主要成分或標(biāo)注蜂王漿成分的產(chǎn)品，該行為違反了我國《化妝品標(biāo)識管理規(guī)定》，對市場秩序和消費(fèi)者權(quán)益造成不良影響。目前，化妝品中蜂王漿的檢測方法尚未有公開報(bào)道。
10-HDA是蜂王漿特有的主要脂肪酸，是衡量蜂王漿質(zhì)量的重要指標(biāo)，也可用來判定蜂王漿的真?zhèn)蝃10?11]。目前已有基于銀(I)和四甲基聯(lián)苯胺的比色傳感法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定10-HDA的文獻(xiàn)報(bào)道[12?13]。比色傳感法簡便易操作，適用性廣，但基質(zhì)干擾較大，結(jié)果準(zhǔn)確度低。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有高分辨率和靈敏度，但檢測成本昂貴，對操作者專業(yè)水平要求較高。高效液相色譜法作為10-HDA的主要檢測方法，廣泛應(yīng)用于測定蜂王漿口服液、腦心舒口服液等藥品及保健品中10-HDA的測定[14?16]。對于化妝品而言，由于其成分復(fù)雜，通常包含多種脂類、烴類以及其他添加劑，往往以乳液、膏霜等半流體或半固體形態(tài)存在。鑒于這種多樣性和復(fù)雜性，化妝品中10-HDA的檢測仍需要進(jìn)一步研究。筆者通過對流動相、柱溫、提取溶劑、超聲時(shí)間的比較分析，建立了高效液相色譜法測定含蜂王漿化妝品中10-HDA。該方法為含蜂王漿化妝品的質(zhì)量檢測提供了科學(xué)有效的技術(shù)手段。
1、 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
高效液相色譜儀：Agilent 1260 LC型，配二極管陣列檢測器，美國安捷倫科技有限公司。
電子天平：AE-240型，感量為0.01 mg/0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器公司。
臺式高速離心機(jī)：HT16MW-1型，湖南赫西儀器裝備有限公司。
智能型數(shù)控超聲清洗器：KQ-500DE型，昆山市超聲儀器有限公司。
10-HDA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為97.2%，批號為21120829，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。
甲醇：色譜純，霍尼韋爾(中國)有限公司。
磷酸、鹽酸：均為分析純，中國醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。
化妝品樣品：市售。
1.2 溶液配制
10-HDA標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：精密稱量10-HDA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)11.15 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容至標(biāo)線，混勻。
10-HDA系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密量取10-HDA標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、2、5、10、50 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.3 色譜條件
色譜柱：MN C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，德國Macherey-Nagel有限責(zé)任公司)；柱溫：35 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器；流動相：甲醇-0.12%(體積分?jǐn)?shù)，下同)磷酸水溶液(體積比為55∶45)，流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；檢測波長：210 nm。
1.4 樣品處理
稱取樣品1.0 g (精確到0.001 g)，置于具塞比色管中，加入甲醇8 mL，渦旋混勻，超聲提取10 min，靜置至室溫，用甲醇定容至10 mL，搖勻，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為樣品溶液。
1.5 實(shí)驗(yàn)方法
取10-HDA系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品溶液，按1.3色譜條件測定，根據(jù)系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積及質(zhì)量濃度，建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，采用色譜峰面積外標(biāo)法計(jì)算樣品中10-HDA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
2、 結(jié)果與討論
2.1 流動相選擇
分別以甲醇-0.09%(體積分?jǐn)?shù)，下同)鹽酸溶液、乙腈-0.09%鹽酸溶液、甲醇-0.12%磷酸溶液為流動相[3,17]，考察10-HDA標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜分離情況。以甲醇-0.12%磷酸溶液和甲醇-0.09%鹽酸溶液作為流動相時(shí)，10-HDA的色譜峰形尖銳、對稱，基線噪聲低，干擾小。磷酸與鹽酸相比，其毒性低，不易揮發(fā)，具有良好的緩沖能力，對色譜柱和其他色譜系統(tǒng)部件的損害較小，因此選擇甲醇-0.12%磷酸溶液為流動相。
2.2 柱溫選擇
在同一條件下，分別設(shè)置柱溫為30、35、40 ℃，測定10-HDA標(biāo)準(zhǔn)溶液，觀察色譜峰分離情況，結(jié)果如圖2所示。
圖2 不同柱溫下10-HDA的色譜峰面積
Fig. 2 Chromatographic peak area of 10-HDA at different column temperatures
由圖2可以看出，當(dāng)柱溫為35 ℃時(shí)，10-HDA的色譜峰面積均高于柱溫為30、40 ℃時(shí)10-HDA的色譜峰面積，因此選擇柱溫35 ℃。
2.3 提取溶劑選擇
選擇加標(biāo)樣品為待測對象，分別以甲醇、甲醇-水、甲醇-0.12%磷酸溶液為提取溶劑，提取樣品中的10-HDA，按1.3色譜條件測定，結(jié)果如圖3所示。由圖3可以看出，以甲醇為提取溶劑時(shí)，10-HDA的回收率最大(98.5%)，故選擇甲醇作為提取溶劑。
圖3 不同提取溶劑時(shí)10-HDA的回收率
Fig. 3 Recoveries of 10-HDA in different extraction solvents
A—甲醇；B—甲醇-水；C—甲醇-0.12%磷酸溶液
2.4 超聲時(shí)間選擇
以甲醇作為提取溶劑，設(shè)置超聲時(shí)間分別為5、10、20、30 min，測定加標(biāo)樣品中10-HDA的含量。結(jié)果顯示，超聲時(shí)間為5、10、20、30 min時(shí)，10-HDA的回收率分別為90.3%、98.5%、98.1%、98.6%，表明樣品在超聲10 min時(shí)已經(jīng)提取完全，故選擇超聲時(shí)間為10 min。
2.5 專屬性試驗(yàn)
分別取10-HDA標(biāo)準(zhǔn)工作溶液、樣品溶液和加標(biāo)樣品溶液，按1.3色譜條件進(jìn)行測定。10-HDA的保留時(shí)間約為6.7 min，其色譜峰峰形良好，且樣品溶液基質(zhì)無干擾，滿足測定要求，表明該方法專屬性良好。
2.6 線性方程與檢出限、定量限
在1.3色譜條件下，分別測定10-HDA系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，得10-HDA不同質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得線性方程y=52 394x-9 601.9，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。結(jié)果表明，10-HDA的質(zhì)量濃度在0.22～54.19 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好。
精密量取10-HDA標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇逐步稀釋后測定，分別以3倍信噪比和10倍信噪比對應(yīng)的質(zhì)量濃度為方法檢出限和定量限，根據(jù)樣品質(zhì)量和定容體積換算成樣品中的含量，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，得檢出限為0.65 μg/g，定量限為2.17 μg/g。
2.7 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)
準(zhǔn)確稱取18份樣品，各約1.0 g，分別置于具塞比色管中，6份為一組，分別加入10-HDA標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液25、100、500 μL，制得低、中、高3種濃度水平的加標(biāo)樣品。根據(jù)1.4樣品處理方法制備加標(biāo)樣品溶液，按1.3色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算10-HDA的回收率和測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見表1。由表1可知，10-HDA的平均回收率為96.71%～102.29%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%～1.33%，表明該方法準(zhǔn)確度和精密度均良好，滿足分析要求。
表1 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 1 Results of the recovery and the precision test
2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)
選擇2.7中10-HDA加標(biāo)量為21.68 μg的加標(biāo)樣品溶液，分別于第0、2、6、10、24、36、48 h時(shí)進(jìn)行液相色譜分析，結(jié)果見表2。由表2可知，色譜峰面積測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.23%，表明加標(biāo)樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 2 Results of the stability test
3、 結(jié)語
建立了高效液相色譜法測定化妝品中10-羥基-2-癸烯酸的含量。以甲醇為提取溶劑、甲醇-0.12%磷酸溶液為流動相，利用C18色譜柱分離待測目標(biāo)物，在210 nm處采集色譜信息。該方法簡便、易操作，耗時(shí)短，靈敏度高，適用于化妝品中10-HDA的測定，為含蜂王漿成分的化妝品的質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。
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引用本文： 王倩，賈建忠，羅晶 . 高效液相色譜法測定化妝品中10-羥基-2-癸烯酸［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2024，33（9）：7. (WANG Qian, JIA Jianzhong, LUO Jing. Determination of 10-hydroxy-2-decenoic acid in cosmetics by high performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(9): 7.)
來源：化學(xué)分析計(jì)量
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