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良好細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范之無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)解析

嘉峪檢測(cè)網(wǎng)        2024-10-20 13:25

什么是無(wú)菌技術(shù)

 

無(wú)菌技術(shù)是良好細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范(GCCP)的一個(gè)重要環(huán)節(jié),所謂無(wú)菌技術(shù),就是建立一個(gè)嚴(yán)格的操作規(guī)范,并確保所有人都遵照?qǐng)?zhí)行,以此來(lái)實(shí)現(xiàn)建立一個(gè)屏障,把有微生物的外部環(huán)境和無(wú)污染干凈的培養(yǎng)物隔開(kāi)。

 

其關(guān)鍵點(diǎn)在于:

 

1 要做到所有與培養(yǎng)物直接接觸的物品都是無(wú)菌的

 

2 培養(yǎng)物和外部有微生物的環(huán)境不能有直接聯(lián)系。

 

其實(shí),說(shuō)白了就是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)微生物無(wú)處不在,空氣中、任何設(shè)備的表面、操作者本身都是有大量微生物的,如果不做任何準(zhǔn)備,直接打開(kāi)培養(yǎng)皿的蓋子,微生物就肯定飄進(jìn)去了。

 

所以,在你做任何操作之前,都先問(wèn)自己一句:我是不是已經(jīng)做好了準(zhǔn)備,把培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿周圍上上下下的空間做到無(wú)菌了。沒(méi)有做到或不確定,就別動(dòng),想好了準(zhǔn)備好了再開(kāi)蓋操作。

 

無(wú)菌技術(shù)的要點(diǎn)

 

那如何才能做到無(wú)菌呢?答案是要有標(biāo)準(zhǔn)化操作。我將從以下2方面詳細(xì)講解。

 

1、 首先,是操作者個(gè)人衛(wèi)生

 

進(jìn)入細(xì)胞房,要穿專用的實(shí)驗(yàn)服、戴好口罩和手套。專用的實(shí)驗(yàn)服,是指這件實(shí)驗(yàn)服只在細(xì)胞房?jī)?nèi)使用,不會(huì)再用于其他實(shí)驗(yàn)室。如果是在GMP規(guī)定的環(huán)境下工作,則還要穿戴有帽子的長(zhǎng)外衣實(shí)驗(yàn)服,并配套面罩。但一般來(lái)說(shuō),我們并不需要做到這個(gè)程度。

 

如果頭發(fā)較長(zhǎng)的操作者,需要把頭發(fā)扎在腦后。手套的選擇應(yīng)該為外科手套,穿戴時(shí)應(yīng)該讓手套開(kāi)口處與實(shí)驗(yàn)服的袖口重疊套在一起,手套在外,袖口在內(nèi)。每隔一段時(shí)間,就應(yīng)該對(duì)手套進(jìn)行擦拭消毒,手只要離開(kāi)了生物安全柜,重新伸入安全柜之前要消毒。如果在操作之前不確定手部是否安全,可以先消毒后再操作。

 

當(dāng)離開(kāi)細(xì)胞房后,手套必須脫掉扔棄,重新回到細(xì)胞房前必須更換新的手套,絕對(duì)不可以反復(fù)使用手套。如操作過(guò)程中,手套出現(xiàn)破裂,應(yīng)馬上離開(kāi)操作臺(tái)面,扔棄手套,并徹底清洗消毒手部后,重新再戴上手套才能繼續(xù)操作。

 

戴上口罩后是否可以說(shuō)話?

 

可以,因?yàn)樯锇踩裼胁A琳?,隔開(kāi)了實(shí)驗(yàn)操作者和操作臺(tái)面,但仍建議大家少說(shuō)。如果身體不舒服例如感冒了,則最好再戴上面罩或暫時(shí)不要去細(xì)胞房操作。同樣,口罩不能重復(fù)使用!

 

2、 第二方面是生物安全柜內(nèi)的無(wú)菌操作

 

分為臺(tái)面布置和臺(tái)面操作。生物安全柜內(nèi)的臺(tái)面是我們的工作區(qū)間,務(wù)必保持干凈整潔,和本次實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品不要放在臺(tái)面上,正式實(shí)驗(yàn)前,使用含70%-75%乙醇的酒精棉球擦拭臺(tái)面,并提前打開(kāi)紫外照射30分鐘。

 

圖片來(lái)源:https://x.com/GIBCO/status/681976757256237056

 

如果你是習(xí)慣用右手操作的話,建議把試劑瓶、離心管架、吸頭等可能會(huì)使用左手握取或打開(kāi)的物品放在臺(tái)面左側(cè)集中放置,而移液器、記號(hào)筆、廢液缸等用右手或向右側(cè)操作的物品放右邊集中放置。樣品的話建議放在中間靠后的位置。 

 

凡是在生物安全柜內(nèi)使用的耗材均需要提前滅菌或購(gòu)買一次性滅菌的規(guī)格。因此,習(xí)慣左手操作的同學(xué),就可以用相反的規(guī)則來(lái)指導(dǎo)自己。

 

開(kāi)始操作時(shí),人坐中間位置,盡可能讓臺(tái)面的物品和自己保持一定距離,有條件的實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)該準(zhǔn)備一輛小推車,把實(shí)驗(yàn)所需要的物品放在車內(nèi)靠近操作者的位置。這樣一來(lái)可以減少操作臺(tái)面擺放物品的數(shù)量,二來(lái)減少來(lái)回走動(dòng)取拿物品的次數(shù)。

 

臺(tái)面上的東西太多是不利于操作的,東西多,就可能離自身太近,就可能會(huì)造成誤觸碰污染卻不知道。

 

凡是從小推車或外面拿進(jìn)去的物品,都要在生物安全柜外拆掉外包裝,然后用酒精棉球擦拭外表面后再放進(jìn)去。

 

開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前,可以提前把等會(huì)要用到的試劑瓶蓋、培養(yǎng)瓶蓋擰松但不要擰開(kāi),這樣可以提高操作效率。

 

如果要從試劑瓶里吸液出來(lái),應(yīng)該一手拿移液器,另一只手的尾指和手掌連接處夾住瓶蓋拿起瓶蓋,然后等液體吸完后,立即蓋回蓋子。

 

有同學(xué)問(wèn),蓋子如果實(shí)在拿不住或需要另一只手配合做其他事情,蓋子怎么辦?可以在開(kāi)蓋之前,提前把試劑瓶旁的臺(tái)面進(jìn)行酒精棉球擦拭,然后把蓋子放在臺(tái)面上。

 

圖片來(lái)源:http://www.cztopeak.com/product/99.html

 

那么,蓋子的口朝上還是朝下呢?我認(rèn)為都行,但應(yīng)該是朝下會(huì)更安全的。因?yàn)槭植吭谂_(tái)面上操作時(shí),是有可能經(jīng)過(guò)蓋子上方的,口朝上的風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)該會(huì)比朝下的風(fēng)險(xiǎn)更大。

 

剛才提到了一點(diǎn),為什么要如此介意手部越過(guò)物品上方的行為呢?

 

因?yàn)槲覀兩爝M(jìn)去操作的手部不是整個(gè)都無(wú)菌的,可能真正無(wú)菌的只有手套的那部分,那么在操作時(shí),手部在臺(tái)面上的移動(dòng),就可能會(huì)帶來(lái)污染物的掉落,如果經(jīng)過(guò)的位置有瓶口、蓋子、培養(yǎng)物的話,就可能造成污染。因此,要特別注意。

 

另外,要確保你的所有操作都必須在自己的視線內(nèi)。舉個(gè)例子,移液管是經(jīng)常要在生物安全柜內(nèi)用到的一種耗材,它在用之前要安裝到電動(dòng)吸液器或洗耳球上,但移液管特別長(zhǎng),有的同學(xué)可能就會(huì)習(xí)慣性的握住移液管的末端然后套上去電動(dòng)吸液器或助吸器上,如果此時(shí)移液管的尖端是靠近你自己的話,這個(gè)尖端就很可能會(huì)誤觸到手部實(shí)驗(yàn)服的位置,造成污染。

 

圖片來(lái)源:https://toolbox.igus.com/7145/improving-pipetting-reliability-efficiency-with-automation

 

因此移液管要時(shí)刻保持和手臂垂直,這樣它的整段都會(huì)在你的視線范圍內(nèi)。同理,細(xì)胞培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板這類敞口特別大的耗材,污染風(fēng)險(xiǎn)是很高的,要對(duì)其進(jìn)行操作的話,能盡量以小的角度打開(kāi)就盡量小,操作完后盡可能快的蓋回去。這也是另一種避免污染的思路。

 

由于在臺(tái)面上的操作注意細(xì)節(jié)很多,我剛才提到的這些只是一些大方向上的原則和標(biāo)準(zhǔn),真正操作時(shí),還有很多細(xì)節(jié)要注意。而且,新手操作時(shí)也難免會(huì)出錯(cuò),一旦發(fā)現(xiàn)出問(wèn)題,應(yīng)該立即停止當(dāng)前的操作,并馬上想辦法消除污染的風(fēng)險(xiǎn)。

 

例如,無(wú)法確定是否安全的觸碰,統(tǒng)一默認(rèn)為有風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)扔棄有風(fēng)險(xiǎn)的耗材,例如,液體滴落在臺(tái)面,應(yīng)馬上停止當(dāng)前操作,并使用酒精棉球徹底擦拭干凈污染臺(tái)面,例如,不確定手部是不是污染了,統(tǒng)一默認(rèn)為有風(fēng)險(xiǎn),先進(jìn)行消毒再考慮后續(xù)操作。

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來(lái)源:實(shí)驗(yàn)老司機(jī)

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