中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

摘 要： 建立羥丙基-β-環(huán)糊精修飾的毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定兒童藥品中6種著色劑的含量。選擇未涂層石英毛細(xì)管柱（68.5 cm×75 μm），分離緩沖液為10 mmol/L硼酸鹽緩沖液（含20 mmol/L的聚乙二醇4000和20 mmol/L的羥丙基-β-環(huán)糊精，pH 8.0），檢測波長為210 nm，電泳電壓為20 kV，進(jìn)樣壓力為5 kPa，進(jìn)樣時間為5 s。酸性橙7、誘惑紅、酸性藍(lán)74、莧菜紅、檸檬黃、麗春紅4R分離效果良好，其質(zhì)量濃度在0.3～3.0 mg/L范圍內(nèi)與對應(yīng)的電泳峰面積線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均不小于0.999 0，檢出限為0.001～0.004 mg/L，定量限為0.003～0.013 mg/L，樣品加標(biāo)平均回收率為94.0%～99.9%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%～3.2%（n=6）。該方法操作簡單、分析速度快、成本低、有實際應(yīng)用價值，適用于兒童藥品多種著色劑的同時分離和檢測。

 

關(guān)鍵詞： 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法； 著色劑； 兒童藥品； 羥丙基-β-環(huán)糊精

 

著色劑廣泛應(yīng)用于藥品行業(yè)，可作為輔料用于兒童藥品中，起到易于辨識、增加藥品穩(wěn)定性、提高患病兒童用藥的依從性等作用[1]。目前有研究表明，兒童的多動行為與著色劑有關(guān)，卡莫紅、日落黃、酒石黃等均已證實可造成兒童多動癥[2]。制藥行業(yè)中使用的著色劑多為偶氮化合物染料，常見的有檸檬黃、日落黃、麗春紅4R、偶氮紅(胭脂紅)、莧菜紅、亮藍(lán)和誘惑紅等[3]。許多偶氮染料顯示出致癌性和過敏反應(yīng)，部分著色劑有潛在的遺傳毒性作用[4]，因此需要控制兒童藥品中著色劑的添加量。著色劑的測定方法主要有高效液相色譜(HPLC)法[5?8]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法[9?11]和毛細(xì)管電泳(CE)法[12?14]。利用HPLC法或LC-MS法測定著色劑時，被測物質(zhì)容易被樣品中的其他雜質(zhì)干擾，往往需要進(jìn)行樣品的預(yù)處理和凈化。CE法具有分離效率高，操作簡便，溶劑及樣品消耗量小，成本低，柱效高，分析速度快等特點，樣品可不用經(jīng)過處理直接溶解后進(jìn)樣測定，該方法已成功應(yīng)用于食品和藥品中多種著色劑的測定[15?16]，但未曾有對兒童藥品中著色劑的研究報道。為了深入了解兒童藥品中著色劑的添加情況，確保兒童用藥安全，筆者利用羥丙基-β-環(huán)糊精修飾毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定兒童藥品中著色劑的含量，樣品經(jīng)過簡單溶解后可直接測定，且樣品基質(zhì)不干擾測定結(jié)果，具有操作簡單易行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、環(huán)保等特點，可作為兒童藥品質(zhì)量安全監(jiān)管的重要技術(shù)手段。

 

1、 實驗部分

 

1.1 主要儀器與試劑

電子分析天平：XD205DU型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。

毛細(xì)管電泳儀：CE7100型，配DAD檢測器，美國安捷倫科技有限公司。

超純水儀：Milli-Q3800型，默克化工技術(shù)(上海)有限公司。

麗春紅4R、酸性藍(lán)74、誘惑紅、莧菜紅、檸檬黃、酸性橙7對照品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為86.2%、94.2%、86.9%、84.6%、93.4%、93.2%，廣州佳途科技股份有限公司。

兒童藥品樣品：小兒七星茶顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒退熱洗劑、健兒消食口服液、退熱口服液、山麥口服液、健兒樂口服液、五維他口服溶液、板藍(lán)根口服液，共18批次，來自全國12個生產(chǎn)企業(yè)。

硼酸：分析純，廣東光華科技股份有限公司。

十水合四硼酸鈉：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

羥丙基-β-環(huán)糊精：分析純，上海源葉生物科技有限公司。

聚乙二醇4000：分析純，廣州醫(yī)藥站化學(xué)試劑公司。

1.2 電泳條件

毛細(xì)管柱：未涂層石英毛細(xì)管柱(68.5 cm×75 μm，美國安捷倫科技有限公司)；分離緩沖液：10 mmol/L硼酸鹽緩沖液(含20 mmol/L的聚乙二醇4000和20 mmol/L的羥丙基-β-環(huán)糊精，pH 8.0)；檢測波長：210 nm；電泳電壓：20 kV；進(jìn)樣壓力：5 kPa；進(jìn)樣時間：5 s。

1.3 溶液配制

單一著色劑對照品儲備溶液：質(zhì)量濃度均約為600 mg/L。分別精密稱取麗春紅4R、酸性藍(lán)74、誘惑紅、莧菜紅、檸檬黃、酸性橙7對照品適量，置于不同的25 mL容量瓶中，用20% (體積分?jǐn)?shù)，下同)乙腈溶液溶解并稀釋至標(biāo)線。

混合對照品儲備溶液：各組分質(zhì)量濃度均約為30 mg/L。精密量取單一著色劑對照品儲備溶液各1 mL，置于同一只20 mL容量瓶中，用20%乙腈溶液溶解并稀釋至標(biāo)線。

混合對照品溶液：各組分質(zhì)量濃度均約為1.2 mg/L。精密量取混合對照品儲備溶液0.4 mL，置于10 mL容量瓶中，用20%乙腈溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過。

系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別精密量取混合對照品儲備溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL，分別置于不同的10 mL容量瓶中，用20%乙腈溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過，得各組分質(zhì)量濃度均分別為0.3、0.6、1.2、2.4、3.0 mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

樣品溶液：精密稱取兒童藥品樣品1.0 g，置于10 mL容量瓶中，用20%乙腈溶液溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過。

1.4 樣品測定

取混合對照品溶液、系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液、樣品溶液及20%乙腈溶液，在1.2電泳條件下測定，記錄電泳圖及電泳峰面積，按外標(biāo)法計算6種著色劑的含量。

 

2、 結(jié)果與討論

 

2.1 分離緩沖體系選擇

毛細(xì)管區(qū)帶電泳是最常用的毛細(xì)管電泳技術(shù)，特別適用于分離離子和小分子。其分離原理是通過施加電場，在毛細(xì)管中形成電場梯度，使樣品中的帶電化合物根據(jù)其電荷性質(zhì)和大小異速遷移，從而實現(xiàn)分離。在電泳測定過程中，可通過調(diào)整電場強(qiáng)度、溶液pH值、溫度和添加緩沖劑等因素，改變帶電分子的遷移速度，從而實現(xiàn)對樣品中化合物的分離。分別考察乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH 4.0)、硼酸-硼砂緩沖液(pH 8.0)、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液(pH 8.0)、硼砂-氫氧化鈉緩沖液(pH 8.0) 4種不同組成的緩沖液體系對目標(biāo)成分的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，硼酸-硼砂緩沖液(pH 8.0)的分離效果最佳，目標(biāo)成分的峰形最理想，故選擇硼酸-硼砂緩沖液(pH 8.0)。

2.2 分離緩沖體系pH值的選擇

在毛細(xì)管電泳中，利用電滲流可將正、負(fù)離子或中性分子一起向同一方向運動，產(chǎn)生差速遷移，可實現(xiàn)在同一次電泳操作中同時完成正、負(fù)離子的分離分析。如果改變電滲流的大小和方向，即可改變電泳的分離效率和選擇性。通常改變電滲流的手段主要是改變分離緩沖體系的pH值或改變添加劑?？疾炫鹚猁}緩沖液的pH值(通過改變硼酸溶液和硼砂溶液的比例調(diào)整pH值)分別為7.4、8.0、8.4、9.0、9.3時目標(biāo)成分的遷移時間和分離效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pH值越大，6種著色劑的遷移時間越長，麗春紅4R的峰形隨分離緩沖液的pH值的增大而變好。綜合分析時間及峰形兩個因素，最終選擇pH值為8.0。

2.3 聚乙二醇4000與羥丙基-β-環(huán)糊精濃度的選擇

在毛細(xì)管電泳法測定時，可適當(dāng)添加離子型表面活性劑、有機(jī)溶劑、環(huán)糊精等來控制電滲流，從而改善分離效果。在緩沖液pH值已確定的條件下，考察添加表面活性劑聚乙二醇4000的濃度分別為10、20、30、40 mmol/L時的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聚乙二醇4000濃度越大，誘惑紅與酸性藍(lán)之間的分離度越差，綜合考慮，最終選擇聚乙二醇4000濃度為20 mmol/L。

當(dāng)聚乙二醇4000的濃度為20 mmol/L時，考察羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度分別為10、20、30、40 mmol/L時的分離效果。結(jié)果表明，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度越大，誘惑紅與酸性藍(lán)之間的分離度越差，綜合考慮，最終選擇羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為20 mmol/L。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

在1.2電泳條件下，分別取混合對照品溶液、健兒消食口服液樣品溶液、加標(biāo)樣品溶液(健兒消食口服液樣品)依次進(jìn)樣分析，電泳圖如圖1所示。結(jié)果顯示，6種著色劑的分離度均大于2.0，表明該方法專屬性符合要求。

圖1   混合對照品溶液、樣品溶液及加標(biāo)樣品溶液電泳圖

Fig. 1   Electropherogram of mixed reference solution，sample solution，and spiked sample solution

 

采用該方法分別對小兒七星茶顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒化痰止咳顆粒、小兒退熱洗劑、健兒消食口服液、退熱口服液、山麥口服液、健兒樂口服液、五維他口服溶液、板藍(lán)根口服液12批次樣品進(jìn)行測定，樣

品基質(zhì)均不影響測定結(jié)果，表明該方法可適用于上述12種兒童藥品中著色劑的測定。

2.5 線性關(guān)系、定量限及檢出限

取系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在1.2電泳條件進(jìn)樣測定，以各目標(biāo)物的質(zhì)量濃度(x，mg/L)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的電泳峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)。取0.3 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用20%乙腈溶液逐級稀釋，在1.2電泳條件進(jìn)樣測定，記錄電泳峰面積，以3倍信噪比對應(yīng)的質(zhì)量濃度作為各目標(biāo)物的檢出限，以10倍信噪比對應(yīng)的質(zhì)量濃度作為各目標(biāo)物的定量限。各目標(biāo)物質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢出限及定量限見表1。

表1   質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

Tab. 1   Linear ranges of mass concentration，linear equations，correlation coefficients，detection limits and quantitation limits

2.6 加標(biāo)回收與精密度試驗

精密稱取健兒消食口服液樣品0.5 g，置于10 mL容量瓶中，精密加入混合對照品儲備液0.4 mL，用20%乙腈溶液使溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過，

平行制備6份加標(biāo)樣品溶液，按1.2電泳條件進(jìn)樣測定，根據(jù)各目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計算加標(biāo)回收率和測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。由表2可知，樣品加標(biāo)平均回收率為94.0%～99.9%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%～3.2%，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。

表2   加標(biāo)回收與精密度試驗結(jié)果

Tab. 2   Result of spiked recoveries and precision test

 

2.7 穩(wěn)定性試驗

取2.6項下的加標(biāo)樣品溶液，于室溫下放置，分

別在配制完成后第0、2、4、8、16、24 h時進(jìn)樣測定，計算各目標(biāo)物電泳峰面積，結(jié)果見表3。由表3可知，6種著色劑峰面積測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于2.41%，表明在24 h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性良好。

表3   穩(wěn)定性試驗結(jié)果

Tab. 3   Results of stability tests

 

3、 結(jié)語

 

建立羥丙基-β-環(huán)糊精修飾毛細(xì)管膠束電動色譜法測定兒童藥品中酸性橙7、誘惑紅、酸性藍(lán)74、莧菜紅、檸檬黃、麗春紅4R 6種著色劑。該方法操作簡便，重復(fù)性、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性良好，樣品溶液的其他成分不影響測定，可用于監(jiān)管兒童藥品中著色劑的非法添加情況，也可為兒童藥品的質(zhì)量安全提供技術(shù)保障。

 

參考文獻(xiàn)：

 

1 孫健，胡青，馮睿，等.色素在藥品中使用的監(jiān)管及檢測方法［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2022，41（3）：377

    SUN Jian，HU Qing，F(xiàn)ENG Rui，et al. Supervision and detection methods of colorants in drugs［J］. Herald of Medicine，2022，41（3）：377.

 

2 趙麗華，應(yīng)育潔.藥用輔料不良反應(yīng)概述［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2020，27（17）：25.

    ZHAO Lihua，YING Yujie. Overview of adverse reactions of pharmaceutical excipients［J］. China Modern Medicine，2020，27（17）：25.

 

3 鄒志飛，蒲民，李建軍，等.各國（地區(qū)）食用色素的使用現(xiàn)況與比對分析［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2010，22（2）：112.

    ZOU Zhifei，F(xiàn)U Min，LI Jianjun，et al. Usage status and comparison analysis of the food colour in some countries （regions）［J］. Chinese Journal of Food Hygiene，2010，22（2）：112.

 

4 葛建鴻，魏雪濤，肖瀟，等.我國批準(zhǔn)使用的食品著色劑理論風(fēng)險評估［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2022，34（1）：98.

    GE Jianhong，WEI Xuetao，XIAO Xiao，et al. Theoretical risk assessment of food colorants approved in China［J］. Chinese Journal of Food Hygiene，2022，34（1）：98.

 

5 孔蘭芬，高敏.飲料中合成著色劑測定方法研究進(jìn)展［J］.化學(xué)分析計量，2022，31（9）：94.

    KONG Lanfen，GAO Min. Research progress on determination methods of synthetic colorants in beverages［J］. Chemical Analysis and Meterage，2022，31（9）：94.

 

6 劉芳.高效液相色譜法測定糕點中的檸檬黃、日落黃［J］.化學(xué)分析計量，2014，23（5）：78.

    LIU Fang. Determination of lemon yellow and sunset yellow in pastry by high performance liquid chromatography［J］. Chemical Analysis and Meterage，2014，23（5）：78.

 

7 張海瑞，劉靜，楊麗萍，等. UPLC法測定食品中10種合成著色劑的含量［J］.云南化工，2018，45（9）：50.

    ZHANG Hairui，LIU Jing，YANG Liping，et al. Determination of 10 synthetic colorants in food by UPLC［J］. Yunnan Chemical Technology，2018，45（9）：50.

 

8 王婷，程國棟，李娜，等.高效液相色譜法同時測定食品中9種合成著色劑［J］.食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2022，13（2）：483.

    WANG Ting，CHENG Guodong，LI Na，et al. Simultaneous determination of 9 kinds of synthetic colorants in foods by high performance liquid chromatography［J］. Journal of Food Safety and Quality，2022，13（2）：483.

 

9 張春娥，廖若宇，孫悅，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定谷類食品中5種合成著色劑［J］.糧油食品科技，2021，29（3）：163.

    ZHANG Chun′e，LIAO Ruoyu，SUN Yue，et al. Determination of five synthetic colorants in grain food by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrum［J］. Science and Technology of Cereals，Oils and Foods，2021，29（3）：163.

 

10 顏春榮，高惠敏，林慧，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測干制水產(chǎn)品中9種酸性偶氮類著色劑［J］.食品科技，2020，45（11）：301.

    YAN Chunrong，GAO Huimin，LIN Hui，et al. Determination of nine acid azo dyes in dried aquatic products by ultra-Performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry［J］. Food Science and Technology，2020，45（11）：301.

 

11 祝世軍，高卓瑤，蔣玲波，等. HPLC-MS/MS法測定水產(chǎn)品中11種水溶性合成著色劑［J］.食品工業(yè)，2023，44（6）：316.

    ZHU Shijun，GAO Zhuoyao，JIANG Lingbo，et al. Simultaneous determination of 11 kinds of water-soluble synthetic colorants in aquatic products by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry［J］. The Food Industry，2023，44（6）：316.

 

12 王立衛(wèi)，閆正，邢超，等.高效毛細(xì)管電泳法測定葡萄酒中的莧菜紅及亮藍(lán)［J］.化學(xué)分析計量，2013，22（6）：43.

    WANG Liwei，YAN Zheng，XING Chao，et al. Determination of amaranth and brilliant blue in wine by high performance capillary electrophoresis［J］. Chemical Analysis and Meterage，2013，22（6）：43.

 

13 王利剛，馮鋒，陳澤忠.毛細(xì)管電泳法檢測飲料中的色素［J］.廣東化工，2019，46（3）：39.

    WANG Ligang，F(xiàn)ENG Feng，CHEN Zezhong. Determination of colorants in beverages by capillary electrophoresis［J］. Guangdong Chemical Industry，2019，46（3）：39.

 

14 胡江濤，吳小波，何成艷，等.固相萃取-高效毛細(xì)管電泳法測定食品和飲料中9種禁用磺酸類偶氮色素［J］.食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019，10（19）：6 449.

    HU Jiangtao，WU Xiaobo，HE Chengyan，et al. Determination of 9 banned sulfonic acid azo pigments in foods and beverages by solid phase extraction-high performance capillary electrophoresis ［J］. Journal of Food Safety & Quality，2019，10（19）：6 449.

 

15 譚鳳玉，王姍姍，謝天堯.攪拌棒膜萃取-毛細(xì)管電泳分離檢測果醬中合成色素胭脂紅和莧菜紅［J］.食品科技，2022，47（4）：322.

    TANG Fengyu，WANG Shanshan，XIE Tianyao. Sensitive determination of synthetic colorants of carmine and amaranth in jam by membrane solid phase extraction using capillary［J］. Food Science and Technology，2022，47（4）：322.

 

16 方益，戴意飛，何鵬飛，等.人工合成色素檢測方法研究進(jìn)展［J］.山東化工，2020，49（20）：44.

    FANG Yi，DAI Yifei，HE Pengfei，et al. Research progress of synthetic pigment detection methods［J］. Shandong Chemical Industry，2020，49（20）：44.

引用本文： 鄭美玲，劉濤，李丹鳳，等 . 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定兒童藥品中6種著色劑［J］. 化學(xué)分析計量，2024，33（9）：33. (ZHENG Meiling, LIU Tao, LI Danfeng, et al. Determination of 6 synthetic colorants in children's medicine by capillary zone electrophoresis[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(9): 33.)