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摘 要： 建立超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定增乳膏中6種成分（鹽酸水蘇堿、王不留行黃酮苷、鹽酸益母草堿、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷）。樣品經(jīng)甲醇超聲提取，采用Waters XBridge BEH C18色譜柱分離，流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，流量為0.3 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣體積為2 μL。采用電噴霧電離源（ESI源）、正負(fù)離子同時監(jiān)測、多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式掃描。6種成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與對應(yīng)色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均不小于0.999 8，方法檢出限為0.035～0.535 ng/mL，定量限為0.100～1.605 ng/mL。樣品加標(biāo)平均回收率為98.08%～103.11%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.94%～3.67%（n=6）。該方法適用于同時測定增乳膏中6種成分的含量，可為增乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考。

關(guān)鍵詞： 增乳膏； 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法； 鹽酸水蘇堿； 王不留行黃酮苷； 鹽酸益母草堿； 芍藥苷； 阿魏酸； 毛蕊花糖苷

 

增乳膏是由王不留行、通草、熟地黃、當(dāng)歸、白芍、川芎、益母草、天花粉8味中藥材組成的中藥復(fù)方制劑[1]，具有補(bǔ)血活血、通絡(luò)催乳的功效[2]，主治婦女產(chǎn)后氣血虛弱所致的乳汁不行。鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿、王不留行黃酮苷、芍藥苷、阿魏酸及毛蕊花糖苷為《中華人民共和國藥典》中上述各味藥材的質(zhì)量控制成分。隨著現(xiàn)代分析儀器的發(fā)展進(jìn)步，中藥復(fù)方制劑正在從傳統(tǒng)的單一指標(biāo)檢測發(fā)展到多指標(biāo)檢測[3]。增乳膏現(xiàn)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS-5163(B-0163)—2014Z]中，僅采用高效液相色譜(HPLC)法測定芍藥苷的含量，目前尚無多成分檢測的報道。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)集色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高專屬性于一體，具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、分離能力好等優(yōu)點(diǎn)[4]，在多組分同時檢測方面相比二極管陣列檢測器具有明顯的優(yōu)勢[5]，近年來已廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑的定量分析[6]。筆者建立超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法同時測定增乳膏中鹽酸水蘇堿、王不留行黃酮苷、鹽酸益母草堿、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷6種成分的含量，可以為增乳膏的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

 

1、 實驗部分

 

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：Waters XEVO TQ-S型，沃特世科技(上海)有限公司。

電子分析天平：(1)XS204型，感量為0.1 mg；(2)XPR205/A型，感量為0.01 mg，梅特勒-托利多國際貿(mào)易上海有限公司。

超聲波清洗儀：KQ-600VSM型，昆山市超聲儀器有限公司。

對照品：鹽酸水蘇堿(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于99.2%)、王不留行黃酮苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于97.1%)、鹽酸益母草堿(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于98.1%)、芍藥苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于94.6%)、阿魏酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于99.4%)、毛蕊花糖苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于95.2%)，中國食品藥品檢定研究院。

乙腈、甲醇：均為色譜純，德國默克股份聯(lián)合公司。

增乳膏樣品：漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司。

實驗用水：蒸餾水，屈臣氏集團(tuán)(香港)有限公司。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜儀

色譜柱：Waters XBridge BEH C18色譜柱[100 mm×2.1 mm，2.5 μm，沃特世科技(上海)有限公司]；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸水溶液(體積比為18∶82)，流量為0.3 mL/min；進(jìn)樣體積：2 μL。

1.2.2 質(zhì)譜儀

離子源：ESI源；監(jiān)測模式：正負(fù)離子同時監(jiān)測；掃描模式：MRM模式；離子源溫度：150 ℃；毛細(xì)管電壓：0.5 kV；脫溶劑氣溫度：500 ℃；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；各目標(biāo)成分的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1   目標(biāo)成分質(zhì)譜參數(shù)

Tab. 1   Mass spectrometry parameters of target components

注：帶*號的為定量離子。

 

1.3 樣品處理

取增乳膏約5 g，精密稱定，加適量甲醇于100 mL容量瓶中，超聲處理30 min (功率為300 W，頻率為40 kHz)，冷卻后用甲醇定容至標(biāo)線，搖勻，以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，精密吸取上清液1 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，制得樣品溶液。

1.4 溶液配制

單成分對照品儲備液：精密稱取鹽酸益母草堿對照品10.34 mg、阿魏酸對照品10.72 mg及毛蕊花糖苷對照品10.17 mg，分別置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至標(biāo)線，精密吸取上述溶液各1 mL，分別置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，分別制成質(zhì)量濃度為1.014 4 μg/mL的鹽酸益母草堿溶液、1.065 6 μg/mL的阿魏酸溶液和0.968 2 μg/mL的毛蕊花糖苷溶液。精密稱取對鹽酸水蘇堿照品11.11 mg、芍藥苷照品12.02 mg，分別置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至標(biāo)線，分別制成質(zhì)量濃度為110.211 2 μg/mL的鹽酸水蘇堿溶液、113.709 2 μg/mL的芍藥苷溶液。精密稱取王不留行黃酮苷對照品11.02 mg，置于200 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至標(biāo)線，制成質(zhì)量濃度為53.502 1 μg/mL的王不留行黃酮苷溶液。

混合對照品溶液：分別精密吸取單成分對照品儲備液鹽酸水蘇堿溶液2 mL、王不留行黃酮苷溶液0.5 mL、鹽酸益母草堿溶液5 mL、芍藥苷溶液2 mL、阿魏酸溶液5 mL、毛蕊花糖苷溶液1.5 mL，置于同一只50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，搖勻，制成含鹽酸水蘇堿4.408 4 μg/mL、王不留行黃酮苷0.535 0 μg/mL、鹽酸益母草堿0.101 4 μg/mL、芍藥苷4.548 4 μg/mL、阿魏酸0.106 6 μg/mL、毛蕊花糖苷0.029 0 μg/mL的混合對照品溶液。

系列混合對照品溶液：精密吸取混合對照品溶液0.5、2.5、5、10、25、50 mL，分別置于50 mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，搖勻，配制成系列混合對照品溶液，各溶液的質(zhì)量濃度見表2。

表2   系列混合對照品溶液質(zhì)量濃度

Tab. 2   The mass concentration of series mixed reference solution ( μg/mL )

 

1.5 實驗方法

取系列混合對照品溶液及樣品溶液，按1.2儀器工作條件進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積，按外標(biāo)法計算增乳膏中6種成分的含量。

 

2、 結(jié)果與討論

 

2.1 提取溶劑和提取時間選擇

分別選擇甲醇、體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液、體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇水溶液為提取溶劑，分別超聲提取30、45、60 min，考察增乳膏中6種成分的提取效果。結(jié)果表明，相同超聲時間下，甲醇的提取效果最好，30 min即可提取完全，故選擇甲醇為提取溶劑，提取時間為30 min。

2.2 流動相選擇

分別考察甲醇-0.1%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸銨)、乙腈-0.1%甲酸水溶液及乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸銨) 4種流動相體系。結(jié)果表明，在甲醇-0.1%甲酸水溶液和甲醇-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸銨)流動相體系中，鹽酸益母草堿、王不留行黃酮苷和毛蕊花糖苷色譜峰形較差且峰寬較大，而在乙腈-0.1%甲酸水溶液和乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸銨)流動相體系中，各待測成分響應(yīng)均較高，色譜峰形良好，由于甲酸銨對離子響應(yīng)的提高作用不大，且容易對儀器造成污染，因此選擇乙腈-0.1%甲酸水溶液作為流動相。

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

通過查閱鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿[7?9]、王不留行黃酮苷[10]、芍藥苷[11?12]、阿魏酸[13?15]、毛蕊花糖苷[16]相關(guān)文獻(xiàn)及調(diào)諧質(zhì)譜參數(shù)，選擇響應(yīng)較大、色譜峰形較好的離子對及參數(shù)作為各成分的定量離子對和定性離子對，優(yōu)化結(jié)果見1.2.2。

2.4 專屬性試驗

取混合對照品溶液及樣品溶液，按1.2儀器工作條件進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，樣品溶液各成分色譜峰形良好，對應(yīng)色譜峰保留時間與相應(yīng)對照品溶液一致，無其他干擾，專屬性良好?；旌蠈φ掌啡芤杭皹悠啡芤旱腗RM色譜圖如圖1所示。

圖1   混合對照品溶液及樣品溶液MRM色譜圖

Fig. 1   MRM chromatograms of mixed reference solution and sample solution

A—混合對照品溶液；B—樣品溶液

 

2.5 線性方程、檢出限與定量限

按1.2儀器工作條件測定系列混合對照品溶液，記錄色譜峰面積。以各對照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸，計算線性方程和相關(guān)系數(shù)。

將各單成分對照品儲備液不斷稀釋，按1.2儀器工作條件進(jìn)樣分析，以信噪比為3∶1時的質(zhì)量濃度為各成分的檢出限；信噪比為10∶1時的質(zhì)量濃度為各成分的定量限。各成分質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表3。

表3   質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

Tab. 3   Linear range of mass concentration，linear equation，correlation coefficient，detection limit and quantitative limit

 

2.6 精密度試驗

精密稱取同一批增乳膏樣品(編號S1)，按1.3方法平行制備6份樣品溶液，并按1.2儀器工作條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表4。由表4可知，鹽酸水蘇堿、王不留行黃酮苷、鹽酸益母草堿、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.98%、2.95%、2.49%、1.94%、2.02%、3.67%，表明方法精密度良好。

表4   精密度試驗結(jié)果

Tab. 4   Results of precision test

 

 

 

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一增乳膏樣品(編號S1)溶液，分別于室溫放置0、2、4、6、8、12、24 h后進(jìn)樣測定，結(jié)果見表5。由表5可知，鹽酸水蘇堿、王不留行黃酮苷、鹽酸益母草堿、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.21%、1.41%、0.99%、2.11%、2.52%、3.51%，表明樣品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表5   穩(wěn)定性試驗結(jié)果

Tab. 5   Results of stability test

 

2.8 樣品加標(biāo)回收試驗

精密稱取9份已知含量的增乳膏樣品(編號S1)各約2.5 g，精密稱定，分別加入相當(dāng)于各目標(biāo)成分已知量的80%、100%、120%的對照品，每個水平各3份，按1.3方法制備加標(biāo)樣品溶液，并按1.2儀器工作條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表6。由表6可知，各目標(biāo)成分的加標(biāo)平均回收率為98.08%～103.11%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

表6   加標(biāo)回收試驗結(jié)果

Tab. 6   Results of spiked recovery test

 

3、 結(jié)語

 

建立超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法可以同時測定增乳膏中6種成分的含量。該方法穩(wěn)定、可靠、簡便快捷，彌補(bǔ)了增乳膏現(xiàn)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS-5163(B-0163)—2014Z]只檢測單一成分的不足，可為增乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考。

 

參考文獻(xiàn)：

1 吳麗璇.高效液相色譜法測定增乳膏中芍藥苷的含量［J］.中國藥師，2009，12（9）：1 259.

    WU Lixuan. Determination of paeonifiorin in Zengru Ointment by HPLC［J］. China Pharmacist，2009，12（9）：1 259.

 

2 鄭金華，何玉婷，羅秀針.增乳膏治療產(chǎn)后缺乳療效Meta分析［J］.社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2020，18（16）：1 165.

    ZHENG Jinhua，HE Yuting，LUO Xiuzhen. Meta analysis of the effect of Zengru Gao treating postpartum breast milk deficiency［J］. Journal of Community Medicine，2020，18（16）：1 165.

 

3 趙冬青.中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法探討［J］.中醫(yī)藥管理雜志，2022，30（3）：200.

    ZHAO Dongqing. Exploration of quality control methods for traditional Chinese medicine compound preparations［J］. Journal of Traditional Chinese Medicine Management，2022，30（3）：200.

 

4 張黎媛.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用［J］.世界中醫(yī)藥，2018，13（2）：513.

    ZHANG Liyuan. Research progress on the quality control of chinese herbal medicine by liquid chromatography coupled with mass spectrometry［J］. World Chinese Medicine，2018，13（2）：513.

 

5 祁昆，王洋，陳濤，等.液質(zhì)聯(lián)用在中藥復(fù)方制劑研究中的應(yīng)用［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2017，36（5）：396.

    QI Kun，WANG Yang，CHEN Tao，et al. Application of LC-MS in the research of traditional Chinese medicine prescriptions［J］. Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，2017，36（5）：396.

 

6 王迪，俞佳，詹固，等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2022，40（2）：68.

    WANG Di，YU Jia，ZHAN Gu，et al. Advances in application of liquid chromatography-mass spectrometry technology in study of traditional chinese medicine［J］. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine，2022，40（2）：68.

 

7 譚亞杰，濮宗進(jìn)，唐于平，等.基于UPLC-QTRAP®/MS2方法評價不同干燥方式對益母草中化學(xué)成分的影響［J］.中草藥，2019，50（7）：1 576.

    TAN Yajie，PU Zongjin，TANG Yuping，et al. Effects of different drying methods on multiple chemical components in Leonurus japonicus based on UPLC-QTRAP®/MS2［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2019，50（7）：1 576.

 

8 周超，張聿梅，何軼，等. HPLC-MS法同時測定益母草及其顆粒劑中鹽酸水蘇堿與鹽酸益母草堿的含量［J］.藥物分析雜志，2016，36（5）：830.

    ZHOU Chao，ZHANG Yumei，HE Yi，et al. Simultaneous contents determination of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride in Herba Leonuri and Yimucao granules by HPLC-MS［J］. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2016，36（5）：830.

 

9 宋珊，郭紅麗，康江鵬. HPLC-ESI-MS/MS同時測定八珍益母丸中9種有效成分［J］.中草藥，2019，50（2）：402.

    SONG Shan，GUO Hongli，KANG Jiangpeng. Simultaneous determination of nine bioactive components in Bazhen Yimu Pills by HPLC-ESI-MS/MS［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2019，50（2）：402.

 

10 趙志國，張曉夢，張敏敏，等. HPLC-DAD-ESI-TOF/MS鑒別和測定前列欣膠囊中多種成分及其多指標(biāo)定量指紋圖譜研究［J］.藥物分析雜志，2017，37（10）：1 810.

    ZHAO Zhiguo，ZHANG Xiaomeng，ZHANG Minmin，et al. Identification and determination of multiple components in Qianliexin capsules by HPLC-ESI-TOF/MS and study on the quantitative fingerprint［J］. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2017，37（10）：1 810.

 

11 吳丹，王靜，劉龍，等. UPLC-MS/MS法同時檢測參芪健胃顆粒中芍藥苷、橙皮苷、甘草酸銨的含量［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2020，22（10）：698.

    WU Dan，WANG Jing，LIU Long，et al. Determination of paeoniflorin，hesperidin，ammonium glycyrrhizinate in shenqi jianwei granules by UPLC-MS/MS［J］. Chinese Journal of Medicinal Guide，2020，22（10）：698.

 

12 鄭敏霞，陳喆，劉培，等.白芍中芍藥苷及其衍生物的UPLC-MS/MS分析［J］.中國中藥雜志，2011，36（12）：1 641.

    ZHENG Minxia，CHEN Zhe，LIU Pei，et al. Analysis and identification of glycosides in Paeonia lactiflora by UPLC-MS/MS［J］. China Journal of Chinese Materia Medica，2011，36（12）：1 641.

 

13 路千里，鄭茶鳳. HPLC-MS/MS法同時測定天麻頭風(fēng)靈膠囊中天麻素、阿魏酸、哈巴俄苷及肉桂酸的含量［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2014，31（12）：984.

    LU Qianli，ZHENG Chafeng. Simultaneous determination of gastrodine，ferulic acid，harpgoside and cinnamic acid in Tianma Toufengling capsule by HPLC-MS/MS［J］. Journal of Shenyang Pharmaceutical University，2014，31（12）：984.

 

14 任園宇，魏東偉，孫武勇，等. HPLC-MS法測定高溫脅迫前后玉米幼苗6種酚酸類化合物含量［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用，2020，32（5）：795.

    REN Yuanyu，WEI Dongwei，SUN Wuyong，et al. Determination of six phenolic compounds in corn seedlings before and after high temperature stress by HPLC-MS［J］. Chemical Research and Application，2020，32（5）：795.

 

15 林敏. HPLC-MS/MS法同時測定丹梔逍遙丸中六個成分的含量［J］.海峽藥學(xué)，2021，33（12）：74.

    LIN Min. Simultaneous determination of six constituents in Danzhi Xiaoyao Pills by HPLC-MS/MS［J］. Strait Pharmaceutical Journal，2021，33（12）：74.

 

16 張波泳，江振作，王躍飛，等. UPLC/ESI-Q-TOF/MS法分析鮮地黃、生地黃、熟地黃的化學(xué)成分［J］.中成藥，2016，38（5）：1 104.

    ZHANG Boyong，JIANG Zhenzuo，WANG Yuefei，et al. Analysis of chemical constituents in fresh，dried and prepared Rehmanniae Radix by UPLC/ESI-Q-TOF/MS［J］. Chinese Traditional Patent Medicine，2016，38（5）：1 104.

 

引用本文： 黃淑芬 . 超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定增乳膏中6種成分［J］. 化學(xué)分析計量，2024，33（9）：22. (HUANG Shufen. Simultaneous determination of six components in Zengru Gao by UPLC-MS/MS[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(9): 22.)