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凋亡早期，細(xì)胞線粒體膜通透性增加，線粒體膜電位下降甚至消失。因此，線粒體膜電位的變化可以反映細(xì)胞凋亡水平。以下以JC-1為例介紹膜電位的檢測(cè)。

JC-1是一種常用的熒光探針，用于檢測(cè)線粒體膜電位的變化。當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成紅色熒光；當(dāng)線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中，呈現(xiàn)綠色熒光。

實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1、細(xì)胞準(zhǔn)備（貼壁細(xì)胞）：將細(xì)胞傳至共聚焦皿，并緩慢搖動(dòng)至均勻，培養(yǎng)至80-90%。

2、JC-1染色工作液配制：取50μL JC-1(200×)加入8mLPBS稀釋JC-1，再加入2mL JC-1染色緩沖液(5×)，混勻后即為JC-1染色工作液。

3、洗滌：棄去培養(yǎng)基，用PBS洗2-3次。

4、染色：加入1mL JC-1染色工作液，并充分混勻。

5、孵育：細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20min。

6、配制JC-1染色緩沖液(1×)：將JC-1染色緩沖液(5×)用PBS稀釋至1×，并置于冰上。

7、洗滌：孵育結(jié)束后，棄去上清，用JC-1染色緩沖液(1×)洗滌2-3次后，加入2mL PBS或培養(yǎng)基（可含血清）。

8、觀察拍照：熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)通常為488nm，發(fā)射波長(zhǎng)為紅色熒光590nm，綠色熒光530nm。細(xì)胞凋亡水平降低時(shí)，線粒體膜電位升高，即紅色熒光較強(qiáng)；當(dāng)細(xì)胞凋亡水平升高時(shí)，線粒體膜電位降低，即紅色熒光減弱，或者呈現(xiàn)綠色熒光。

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注意事項(xiàng)：

1、洗滌時(shí)，不可將槍頭對(duì)著細(xì)胞，以免沖掉細(xì)胞。

2、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，注意避光。

3、染色結(jié)束后，須用JC-1染色緩沖液(1×)洗滌，不可用PBS代替。

4、JC-1染料應(yīng)完全溶解并混勻后使用，但要避免反復(fù)凍融。

5、JC-1染料在低溫下會(huì)凝固，可以在20-25℃水浴中溫育片刻至全部融解后再使用。

6、對(duì)于不同類型的細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞），需要分別處理。例如，對(duì)于懸浮細(xì)胞，需先將細(xì)胞重懸于培養(yǎng)液中，孵育一段時(shí)間，再用JC-1染色緩沖液洗滌并離心沉淀細(xì)胞，最后用JC-1染色緩沖液重懸并觀察。