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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-10-30 16:05
國家藥監(jiān)局組織起草了《化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗方法》等5項檢驗方法，經(jīng)國家藥監(jiān)局化妝品標準化技術委員會主任會議審查通過，現(xiàn)予以發(fā)布。
《化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗方法》《化妝品中非那西丁的檢驗方法》《化妝品中羥基癸酸的檢驗方法》等3項檢驗方法為新增的化妝品檢驗方法，納入《化妝品安全技術規(guī)范（2015年版）》，自2025年7月1日起施行。
《化妝品中石棉的檢驗方法》《化妝品中葡糖醛酸等14種原料的檢驗方法》為修訂的化妝品檢驗方法，替換《化妝品安全技術規(guī)范（2015年版）》中原有檢驗方法；自2025年7月1日起，化妝品注冊、備案及抽樣檢驗等相關檢驗應當采用本通告發(fā)布的上述兩個檢驗方法。
《化妝品安全技術規(guī)范》5項標準制修訂項目匯總表
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序號 |
項目名稱 |
類型 |
建議納入《化妝品安全技術規(guī)范》的章節(jié) |
同時廢止的《化妝品安全技術規(guī)范》中原章節(jié)內(nèi)容 |
|---|---|---|---|---|
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1 |
化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗方法 |
新增檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法8 其他原料檢驗方法8.4 化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗方法 |
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2 |
化妝品中非那西丁的檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法2 禁用組分檢驗方法2.39 化妝品中非那西丁的檢驗方法 |
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3 |
化妝品中羥基癸酸的檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法3 限用組分檢驗方法3.14 化妝品中羥基癸酸的檢驗方法 |
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4 |
化妝品中石棉的檢驗方法 |
修訂后替換原檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法2 禁用組分檢驗方法2.27 化妝品中石棉的檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法2 禁用組分檢驗方法2.27 石棉 |
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5 |
化妝品中葡糖醛酸等14種原料的檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法3 限用組分檢驗方法3.1 化妝品中葡糖醛酸等14種原料的檢驗方法 |
第四章理化檢驗方法3 限用組分檢驗方法3.1 α-羥基酸（國家藥品監(jiān)督管理局2019年第12號通告） |
化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗方法
Determination of Azelaic Acid and its salts in Cosmetics
1 范圍
本方法規(guī)定了高效液相色譜法測定化妝品中壬二酸及其鹽類（以壬二酸計）的含量。
本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、粉劑類、泥類、貼膜類化妝品中壬二酸及其鹽類（以壬二酸計）的測定。
2 方法提要
樣品提取凈化后，經(jīng)高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，根據(jù)保留時間和紫外光譜定性，峰面積定量，以標準曲線法計算含量。
本方法壬二酸的檢出限為0.05 μg，定量下限為0.17 μg；當取樣量為1.0 g，稀釋定容體積為20 mL時壬二酸的檢出濃度為0.005%，最低定量濃度為0.017%。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 甲醇。
3.2 氨水。
3.3 磷酸。
3.4 乙腈，色譜純。
3.5 氨溶液：量取氨水（3.2）1 mL，用水稀釋至100 mL。
3.6 2%磷酸甲醇溶液：量取磷酸（3.3）2 mL，用甲醇（3.1）稀釋至100 mL。
3.7 0.1%磷酸溶液：量取磷酸（3.3）1.0 mL，用水稀釋至1000 mL。
3.8 標準品：壬二酸（英文名稱：Azelaic Acid，分子式：C9H16O4；分子量：188.22；CAS號：123-99-9）。
3.9 壬二酸標準儲備溶液：稱取壬二酸標準品40 mg（精確到0.00001 g）于10 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度[可先加少量甲醇（3.1）超聲助溶]，搖勻，即得濃度為4 mg/mL的壬二酸標準儲備溶液，避光密封保存，20日內(nèi)穩(wěn)定。
4 儀器和設備
4.1 高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。
4.2 天平，感量0.0001 g和0.00001 g。
4.3 超聲波清洗器，功率≥120 W。
4.4 渦旋振蕩器。
4.5 離心機。
4.6 混合陰離子固相萃取柱（填料質(zhì)量≥150 mg），基質(zhì)為季銨鹽改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，使用前依次用15 mL甲醇（3.1）、15 mL水活化。
4.7 固相萃取裝置。
5 分析步驟
5.1 標準系列溶液的制備
分別準確移取壬二酸標準儲備溶液（3.9）適當量，用水稀釋配制成濃度分別為3 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL的標準系列溶液。
5.2 樣品處理
5.2.1 洗面奶、洗發(fā)水、沐浴露等淋洗類化妝品
稱取混合均勻的樣品1.0 g（精確到0.0001 g）于10 mL具塞比色管中，加甲醇（3.1）約8 mL，渦旋分散后超聲提取10 min，放冷后定容至刻度，準確量取5 mL上清液（必要時可離心或過濾），置10 mL具塞比色管中，用水定容至刻度，搖勻，濾過，即得待測溶液。
5.2.2 其他類化妝品
稱取混合均勻的樣品1.0 g（帶有載體的面膜，去除載體后取樣；精確到0.0001 g）于10 mL具塞比色管中，加甲醇（3.1）2 mL，渦旋分散，加水約6 mL，加氨溶液（3.5）0.5 mL，充分渦旋2 min后超聲提取10 min，放冷后用水定容至刻度，渦旋混勻。準確量取0.5~5 mL上清液（必要時可離心或過濾）置已活化好的固相萃取柱（4.6）上，待樣品溶液流盡后，依次用水15 mL、甲醇（3.1）15 mL淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，再用2%磷酸甲醇溶液（3.6）5 mL洗脫，收集洗脫液置10 mL比色管中，用水定容至刻度，搖勻，濾過，即得待測溶液。
注1：待測原料含量比較大的樣品可通過適當稀釋或減少上樣體積以確保待測溶液濃度在標準曲線范圍內(nèi)。
注2：凝膠類樣品推薦上樣量不超過2 mL。
5.3 參考色譜條件
色譜柱：金剛烷基鍵合硅膠色譜柱（5 μm，4.6×250 mm），或等效色譜柱；
流動相：A：乙腈（3.4）；B：0.1%磷酸溶液（3.7）；梯度洗脫程序見表1。
表1 梯度洗脫程序
|
時間/min |
V（A）/% |
V（B）/% |
|---|---|---|
|
0 |
17 |
83 |
|
6 |
17 |
83 |
|
8 |
26 |
74 |
|
15 |
26 |
74 |
|
17 |
90 |
10 |
流速：1.0 mL/min；
柱溫：40 ℃；
進樣量：20 μL；
檢測波長：210 nm。
5.4 測定
在“5.3”色譜條件下，取標準系列溶液（5.1）分別進樣，進行色譜分析，以標準系列溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
取“5.2”項下的待測溶液進樣，根據(jù)保留時間和紫外光譜圖定性，測得峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測溶液中壬二酸的濃度。按“6”計算樣品中壬二酸的含量。
6 分析結果的表述
6.1 計算
式中：ω（以壬二酸計）——化妝品中壬二酸的質(zhì)量分數(shù)，%；
ρ——從標準曲線得到壬二酸的質(zhì)量濃度，μg/mL；
V——樣品稀釋定容體積，mL；
m——樣品取樣量，g；
D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
6.2 回收率和精密度
多家實驗室的回收率在80.7%～110.6%之間，相對標準偏差小于9.2%（n=6）。
7 圖譜
1：壬二酸（15.8min）
注：壬二酸二鉀和壬二酸二鈉在液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜上均是以壬二酸形式被檢出。
附錄A
（規(guī)范性附錄）
壬二酸結果的確證
如液相色譜方法中檢出結果和化妝品標簽成分不一致，需采用液相色譜-質(zhì)譜法進行確認。
A.1 樣品前處理過程見5.2樣品處理。
A.2 參考色譜條件
色譜柱：C18柱（1.8 μm，2.1×100 mm），或等效色譜柱；
流動相：A：乙腈；B：0.05%甲酸溶液。
梯度洗脫程序見表A.1；
表A.1 流動相梯度洗脫程序
|
時間/min |
V（A）/% |
V（B）/% |
|
0 |
35 |
65 |
|
3 |
35 |
65 |
|
7 |
90 |
10 |
|
8 |
90 |
10 |
|
8.1 |
35 |
65 |
|
10.5 |
35 |
65 |
流速：0.3 mL/min；
柱溫：40 ℃；
進樣量：2 μL。
A.3 參考質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI）；
監(jiān)測模式：負離子多反應監(jiān)測模式（MRM）；監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定見表A.2；
表A.2 監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定表
|
名稱 |
母離子(m/z) |
子離子(m/z) |
碰撞能(V) |
|
壬二酸 |
187.1 |
125.1* |
-20 |
|---|---|---|---|
|
97.0 |
-24 |
*為推薦定量離子。
注：當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。
A.4 定性
用液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行定性。如樣品檢出的特征離子峰的保留時間與濃度相近的壬二酸標準溶液一致（相對偏差在±2.5%之內(nèi)），且樣品所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與標準溶液的監(jiān)測離子對的相對豐度比的偏差不超過表A.3規(guī)定范圍，則可判斷樣品中存在壬二酸。
表A.3 結果確證時離子對相對豐度比的最大允許偏差
|
相對離子豐度（k） |
k＞50% |
50%≥k＞20% |
20%≥k＞10% |
k≤10% |
|
允許的最大偏差 |
±20% |
±25% |
±30% |
±50% |
化妝品中非那西丁的檢驗方法
Determination of Phenacetin in Cosmetics
1 范圍
本方法規(guī)定了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中非那西丁的含量。
本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、粉類等化妝品中非那西丁的定性與定量。
2 方法提要
樣品以乙腈為溶劑提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性、定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。
本方法取樣量為0.5 g時，檢出濃度為0.012 mg/kg，最低定量濃度為0.04 mg/kg。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 甲醇，色譜純。
3.2 乙腈，色譜純。
3.3 氯化鈉。
3.4 50%乙腈：取乙腈、水等體積混合，搖勻。
3.5 飽和氯化鈉溶液：稱取40 g氯化鈉（3.3），置于250 mL磨口錐形瓶中，加入100 mL水，超聲15 min，即得。
3.6 標準品：非那西丁（英文名稱：Phenacetin，分子式：C10H13NO2，CAS：62-44-2），純度≥98%。
3.7 標準儲備溶液：精密稱取非那西丁標準品10 mg（精確到0.00001 g）于10 mL容量瓶中，加入甲醇（3.1）溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標準溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期3個月。
3.8 標準中間液：精密量取適量標準儲備溶液（3.7），用甲醇（3.1）稀釋成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標準中間液。
4 儀器和設備
4.1 高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。
4.2 分析天平：感量0.0001 g和0.00001 g。
4.3 超聲波清洗器（≥250 W）。
4.4 渦旋混合儀。
4.5 高速離心機。
5 分析步驟
5.1 空白基質(zhì)提取液
稱取空白試樣0.5 g（精確到0.0001 g），置于15 mL具塞比色管中，自“加入飽和氯化鈉溶液2 mL”起與樣品同法處理（5.4），作為空白基質(zhì)提取液。該基質(zhì)提取液進入質(zhì)譜后，在非那西丁的特征離子峰保留時間處未出峰且未檢出其特征離子對，則確認為空白基質(zhì)提取液，可用于下一步實驗?？瞻讟悠返男誀顟c待測化妝品盡量基本一致。
5.2 基質(zhì)標準中間液
精密量取非那西丁標準中間液（3.8）0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（5.1）稀釋至刻度，搖勻，制成非那西丁濃度為100 μg/L的基質(zhì)標準中間液?；|(zhì)標準中間液現(xiàn)用現(xiàn)配。
5.3 基質(zhì)標準系列溶液的制備
精密量取基質(zhì)標準中間液（5.2）0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，用空白基質(zhì)提取液（5.1）配制濃度為1.0、2.0、5.0、10、20、50 μg/L基質(zhì)標準系列溶液?；|(zhì)標準系列溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。
5.4 樣品處理
膏霜乳類、液體類、凝膠類：稱取樣品0.5 g（精確到0.0001 g），置于15 mL離心管中，加入飽和氯化鈉溶液（3.5）2 mL，渦旋30 s，分散均勻，準確加入乙腈（3.2）10 mL，渦旋30 s，超聲提取10 min，靜置至室溫，以8000 r/min轉速離心5 min。準確吸取上清液5 mL，加50%乙腈（3.4）定容至10 mL，混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實際濃度進行適當稀釋）。
粉類：稱取樣品0.5 g（精確到0.0001 g），置于15 mL離心管中，準確加入乙腈（3.2）10 mL，渦旋30 s，超聲提取10 min，靜置至室溫，以8000 r/min轉速離心5 min。準確吸取上清液5 mL，加50%乙腈（3.4）定容至10 mL，混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實際濃度進行適當稀釋）。
5.5 參考液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用條件
色譜條件
色譜柱：C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，2.7 μm），或等效色譜柱；
柱溫：30 ℃；
進樣體積：2 μL；
流動相A：水，流動相B：乙腈；
流速：0.3 mL/min。
表1 梯度洗脫程序
|
時間（min） |
流動相A（%） |
流動相B（%） |
|---|---|---|
|
0.0 |
90 |
10 |
|
2.0 |
90 |
10 |
|
5.0 |
25 |
75 |
|
5.1 |
10 |
90 |
|
7.0 |
10 |
90 |
|
7.1 |
90 |
10 |
|
9.0 |
90 |
10 |
質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI源）；
監(jiān)測模式：正離子多反應監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關參數(shù)設定見表2。
表2 非那西丁的監(jiān)測離子對及相關參數(shù)設定
|
組分名稱 |
母離子 （m/z） |
子離子 （m/z） |
CE （V） |
|---|---|---|---|
|
非那西丁 |
180.1 |
110.2* |
26 |
|
138.1 |
14 |
*為推薦的定量離子。
注：當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。
5.6 定性判定
取供試品溶液（5.4）與標準溶液在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，非那西丁的特征離子峰保留時間與標準溶液對應的保留時間偏差小于±2.5%，且選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當濃度的標準溶液的監(jiān)測離子對的相對豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在非那西丁。
表3 定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差
|
相對離子豐度（k） |
k＞50% |
50%≥k＞20% |
20%≥k＞10% |
k≤10% |
|
允許的最大偏差 |
±20% |
±25% |
±30% |
±50% |
5.7 定量測定
在“5.5”項液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用條件下，取基質(zhì)標準系列溶液（5.3）依次測定，以非那西丁的系列濃度為橫坐標，其定量離子對色譜峰面積為縱坐標，進行線性回歸，繪制基質(zhì)標準曲線，其線性相關系數(shù)應大于0.99。
取“5.4”項下處理得到的待測溶液進樣，將非那西丁定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標準曲線，計算非那西丁的質(zhì)量分數(shù)，按“6”項下公式，計算樣品中非那西丁的含量。
6 分析結果的表述
6.1 計算
式中：ω—樣品中非那西丁的質(zhì)量分數(shù)，mg/kg；
ρ—供試品溶液中非那西丁的質(zhì)量濃度，μg/L；
V—樣品定容體積，mL；
m—樣品取樣量，g；
D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。
6.2 回收率和精密度
多家實驗室驗證回收率為82.6%～115.8%，相對標準偏差小于6.4%。
7 圖譜
Determination of Hydroxycapric Acid in Cosmetics
1 范圍
本方法規(guī)定了高效液相色譜法測定化妝品中羥基癸酸的含量。
本方法適用于液體類、凝膠類、膏霜乳類化妝品中羥基癸酸含量的測定。
2 方法提要
以甲醇提取化妝品中羥基癸酸，用高效液相色譜儀進行分離，二極管陣列檢測器檢測，以保留時間和紫外光譜圖定性，峰面積定量，以標準曲線法計算含量。
本方法中羥基癸酸的檢出限為0.125 μg、定量下限為0.375 μg。取樣量為1.0 g，定容體積為10 mL時檢出濃度為250 μg/g，最低定量濃度為750 μg/g。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 磷酸氫二銨。
3.2 磷酸，優(yōu)級純。
3.3 甲醇，色譜純。
3.4 乙腈，色譜純。
3.5 甲酸，色譜純。
3.6 0.05 mol/L的磷酸氫二銨溶液：稱取6.60 g磷酸氫二銨（3.1），加水1000 mL溶解，用0.22 μm濾膜過濾。
3.7 標準品：羥基癸酸（英文名稱：Hydroxycapric acid，分子式：C10H20O3，CAS：5393-81-7），純度≥98%。
3.8 標準儲備溶液
精密稱取羥基癸酸標準品（3.7）0.5 g（精確到0.0001 g）于10 mL容量瓶中，加甲醇（3.3）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成標準儲備溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期1個月。
4 儀器和設備
4.1 高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。
4.2 天平，感量分別為0.1 mg、0.01 mg。
4.3 超聲波清洗器，功率100 W。
4.4 高速離心機，轉速≥14000 r/min。
4.5 pH計，精度0.01。
4.6 渦旋振蕩器。
5 分析步驟
5.1 標準系列溶液的制備
精密移取不同體積的標準儲備溶液（3.8），用甲醇（3.3）配制成濃度為0.125、0.25、0.5、1、2.5、5 mg/mL的標準系列溶液。
5.2 樣品處理
稱取混合均勻的樣品1.0 g（精確到0.001 g）于10 mL具塞比色管中，加甲醇（3.3）至10 mL刻度，充分渦旋混合30 s，超聲提取30 min，取適量樣品在10000 r/min下高速離心15 min，取上清液過0.45 μm的濾膜，取續(xù)濾液作為待測溶液。
5.3 參考色譜條件
色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），或等效色譜柱；
流動相：甲醇+ 0.05 mol/L的磷酸氫二銨溶液（3.6）[磷酸（3.2）調(diào)pH值為3.0]（70+30）；
流速：1.0 mL/min；
檢測波長：214 nm；
柱溫：室溫；
進樣量：5 μL。
5.4 測定
在“5.3”色譜條件下，取標準系列溶液（5.1）分別進樣，進行色譜分析，以標準系列溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
取“5.2”項下的待測溶液進樣，根據(jù)保留時間和紫外光譜圖定性，測得峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測溶液中羥基癸酸的濃度。按“6”計算樣品中羥基癸酸的含量。
6 分析結果的表述
6.1 計算
式中：ω——樣品中羥基癸酸的質(zhì)量分數(shù)，μg/g；
ρ——從標準曲線得到待測原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；
V——樣品定容體積，mL；
m——樣品取樣量，g；
D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。
在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
6.2 回收率和精密度
方法回收率為85%~115%，相對標準偏差小于10%。
7 圖譜
附錄A
（規(guī)范性附錄）
羥基癸酸陽性結果的確證
因羥基癸酸極性大，紫外吸收接近截止波長，測定時易出現(xiàn)干擾，必要時可采用液相色譜－質(zhì)譜法確證結果，以排除基質(zhì)中其他組分的干擾。在相同的液相色譜－質(zhì)譜實驗條件下，如果樣品中色譜峰的保留時間和紫外光譜圖與標準溶液中對應成分一致（相對偏差在±2.5%之內(nèi)），所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子對的相對豐度比的偏差不超過表A.1規(guī)定范圍，則可以判定樣品中存在對應的測定成分。
表A.1 結果確證時相對離子豐度比的最大允許偏差
|
相對離子豐度（k） |
k＞50% |
50%≥k＞20% |
20%≥k＞10% |
k≤10% |
|
允許的最大偏差 |
±20% |
±25% |
±30% |
±50% |
A.1 儀器參考條件
A.1.1 色譜條件
色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），或等效色譜柱；
流動相：A：乙腈（含0.1%甲酸）；B：0.1%甲酸水溶液；
表A.2 流動相梯度洗脫程序
|
時間/min |
V（流動相A）/% |
V（流動相B）/% |
|
0 |
0 |
100 |
|
4 |
0 |
100 |
|
15 |
95 |
5 |
|
17 |
95 |
5 |
|
17.1 |
0 |
100 |
|
22 |
0 |
100 |
流速：0.2 mL/min；
柱溫：30 ℃；
進樣量：5 μL。
A.1.2 質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI源）；
監(jiān)測模式：負離子多反應監(jiān)測模式；監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定見表A.3；
鞘氣流速：11 L/min；
干燥氣流速：14 L/min；
鞘氣溫度：350℃；
干燥氣溫度：230℃；
碰撞氣：Ar，20 psi；
離子源電壓（IS）電壓：負離子：3000 V。
表A.3 羥基癸酸的監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定表
|
組分名稱 |
母離子（m/z） |
子離子（m/z） |
CE（V） |
|
羥基癸酸 |
187.1 |
141.1* |
-20 |
|
139 |
-20 |
*為推薦的定量離子。
注：當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化。
化妝品中石棉的檢驗方法
Determination of Asbestos in Cosmetics
1 范圍
本方法規(guī)定了用偏光顯微鏡、掃描電子顯微鏡-能譜儀和X射線衍射儀測定化妝品中石棉的方法。
本方法適用于粉劑類、塊狀類、膏霜乳類化妝品中石棉的測定。
2 方法提要
石棉具有耐高溫性，并具有特定的形態(tài)特征、光學特性和元素組成。樣品經(jīng)高溫處理和酸洗，使用偏光顯微鏡檢測其中是否含有符合石棉形態(tài)特征及光學特性的纖維顆粒。使用掃描電子顯微鏡-能譜儀對纖維顆粒的形態(tài)特征和元素組成進行確認，判定樣品中是否含有某種類型的石棉。
石棉X射線衍射峰的強度與其含量成正比。當觀測到可明確歸屬為某一類石棉的X射線衍射峰時，可基于衍射峰的強度確定樣品中石棉的含量。
3 術語和定義
石棉是指具有纖維狀晶體生長習性的蛇紋石和角閃石類的硅酸鹽礦物，包括纖維狀蛇紋石（溫石棉）和纖維狀角閃石類（青石棉、鐵石棉、直閃石石棉、透閃石石棉、陽起石石棉）。
4 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
4.1 石棉標準物質(zhì)/標準樣品：溫石棉、青石棉、鐵石棉、直閃石石棉、透閃石石棉、陽起石石棉。
4.2 折射率浸油：nＤ25℃=1.550、1.620、1.690，精度為±0.005。
4.3 甲酸。
4.4 20%甲酸溶液：吸取甲酸（4.3）20 mL，加水至100 mL，搖勻。
4.5 剛玉（α-Al2O3）：純度≥99.9%，粒徑≤0.040 mm。
4.6 載玻片和蓋玻片：無色透明玻璃，表面潔凈，無可見的霧狀物、水跡和指印等，無可見的凹坑、粒狀物、結石、劃痕、斷裂等缺陷。
4.7 工具：坩堝、瑪瑙研缽、標準篩（325目，孔徑45 μm）、移液器、導電膠帶、蒸發(fā)皿等。
5 儀器和設備
5.1 偏光顯微鏡(PLM)：應達到的技術要求見附錄B.1。
5.2 掃描電子顯微鏡-能譜儀（SEM-EDS）：應達到的技術要求見附錄C.1。
5.3 X射線衍射儀（XRD）：應達到的技術要求見附錄D.1。
5.4 分析天平：感量0.1 mg。
5.5 箱式高溫爐：溫度范圍100~500 ℃，控溫精度±10 ℃，具備程序升溫功能。
5.6 恒溫烘箱：溫度范圍50~120 ℃，控溫精度±2 ℃。
5.7 超聲波清洗器，功率500 W。
5.8 渦旋混合器。
6 分析步驟
6.1 樣品處理
6.1.1 向潔凈的坩堝（4.7）中稱取約10 g化妝品樣品，置于箱式高溫爐中。主成分為滑石粉的爽身粉樣品可直接升溫至465 ℃保持4 h。含有機成分較多的樣品可參考表1進行程序升溫，必要時應增大稱樣量，確?；一髿埩粑锊簧儆?00 mg。
表1 程序升溫表
|
步驟 |
起始溫度（℃） |
升溫時間（min） |
目標溫度（℃） |
保持時間（min） |
|
1 |
室溫 |
20 |
120 |
0 |
|
2 |
120 |
60 |
200 |
20 |
|
3 |
200 |
20 |
250 |
0 |
|
4 |
250 |
120 |
465 |
240 |
6.1.2 樣品冷卻后，在瑪瑙研缽（4.7）中研磨，過45 μm標準篩（4.7），混勻，作為分析試樣。研磨應采用邊磨邊過篩的方式，避免過度研磨造成石棉晶體形態(tài)或晶格受損，影響測試結果。
6.2 偏光顯微鏡檢測
6.2.1 分析試樣準備
取約20 mg分析試樣（6.1.2）至15 mL離心管中，加入10 mL 20%甲酸溶液（4.4），加蓋渦旋30 s，超聲5 min，劇烈振搖后移取20 L至潔凈的載玻片（4.6）上，于恒溫烘箱中50 °C烘干后蓋上蓋玻片（4.6），平行制備3份。向3份樣品的蓋玻片邊緣分別滴加折射率為1.550、1.620、1.690的浸油（4.2），使粉體顆粒充分浸潤和分散，作為待測樣。
6.2.2 觀測和判定
偏光顯微鏡使用10倍目鏡，10~40倍物鏡檢測3份待測樣，每份至少檢測10個視野，不少于1000個顆粒。如3000個顆粒中累計發(fā)現(xiàn)4個或4個以上形態(tài)特征符合條件a或條件b的纖維顆粒，且存在光學特性符合附錄表B.1的纖維，則轉入掃描電子顯微鏡-能譜測定，否則判定為未檢出石棉。
條件a：長徑比大于20或長于5 µm的細針狀纖維；
條件b：以下特征符合2項或以上：
1成束狀的平行纖維；
2纖維束末端呈發(fā)散性；
3薄針狀纖維；
4由單個纖維狀物纏結而成的團塊或彎曲狀纖維。
6.3 掃描電子顯微鏡-能譜檢測
6.3.1 儀器參數(shù)
掃描電鏡工作電壓：5 kV，工作電流：10 μA；
掃描電鏡工作距離：8 mm；
能譜工作電壓：15 kV；
能譜工作距離：15 mm。
6.3.2 分析試樣準備
取6.2.1中劇烈振搖后的混懸液20 μL，滴于貼有導電膠（4.7）的掃描電鏡觀測臺上，50 ℃烘干后作為待測樣。平行制備3份。
6.3.3 檢測和判定
在200~10000倍放大倍數(shù)下檢測3份待測樣，每份至少觀測20個視野，不少于1000個顆粒。若3000個顆粒中累計觀測到4個或4個以上形態(tài)特征符合6.2.2中條件a或條件b的纖維顆粒，則使用能譜分析纖維顆粒的元素組成。若能譜檢出的元素種類與標準物質(zhì)/標準樣品一致（見附錄表A.1、C.2），則判定檢出石棉并報告種類。否則判定為未檢出石棉。
7 分析結果的表述
7.1 檢出濃度
以陰性分析試樣（6.1.2）為基質(zhì)進行加標實驗，結果顯示：
按6.2和6.3的方法檢測，偏光顯微鏡和掃描電鏡-能譜對于6種石棉的檢出濃度均為0.1%。
實驗室在檢測時應隨行使用陽性質(zhì)控，確認能夠滿足檢出濃度的要求。
7.2. 分析結果
對于偏光顯微鏡或/和掃描電鏡-能譜未檢出石棉的樣品，結果表述為“未檢出石棉”。
對于偏光顯微鏡和掃描電鏡-能譜檢出石棉的樣品，結果表述為“檢出…石棉”。
8 檢測路徑
本方法的檢測路徑如圖1所示。
圖1 化妝品中石棉檢測的路徑
附錄A
（規(guī)范性附錄）
滑石粉和各類型石棉的基本信息
表A.1 滑石粉和各類型石棉的基本信息
|
中文名稱 |
英文名稱 |
CAS號 |
化學式 |
|
滑石粉 |
Talc |
14807-96-6 |
Mg3(Si4O10)(OH)2 |
|
溫石棉 |
Chrysotile |
12001-29-5 |
Mg3Si2O5(OH)4 |
|
青石棉 |
Crocidolite |
12001-28-4 |
Na2(Mg?Fe)5Si8O22(OH)2 1 |
|
鐵石棉 |
Amosite |
12172-73-5 |
(Fe?Mg)7Si8O22(OH)2 2 |
|
直閃石 |
Anthophyllite |
77536-67-5 |
(Mg?Fe)7Si8O22(OH)2 3 |
|
陽起石 |
Actinolite |
77536-68-6 |
Ca2(Mg?Fe)5Si8O22(OH)2 4 |
|
透閃石 |
Tremolite |
77536-66-4 |
Ca2(Mg?Fe)5Si8O22(OH)2 4 |
注：1. Fe/Mg≈4.5/0.5 (mol/mol)。
2. Fe/Mg≈4.5/2.5 (mol/mol)。
3. Fe/Mg<1/6 (mol/mol)。
4. 透閃石與陽起石的Mg/Fe浮動較大，且各類檢測手段均不能很好區(qū)分二者。如有檢出，種類可歸為“透閃石/陽起石”。
附錄B
（資料性附錄）
偏光顯微鏡
B.1 偏光顯微鏡的技術要求
B.1.1 帶有藍色濾光片的光源，光源側配備偏振鏡或起偏器，偏振方向可調(diào)整至與檢偏鏡正交。
B.1.2 帶有可360°旋轉的載物臺，旋轉角度可以測量。
B.1.3 10~100倍物鏡。
B.1.4 帶有十字線的聚焦目鏡，倍數(shù)為10~15倍。
B.1.5 配有照相裝置，并可與電腦連接。
B.1.6 石膏試板。
B.1.7 λ補償板或補償器。
B.2 偏光顯微鏡的觀測指標
表B.1 偏光顯微鏡下6種石棉纖維光學特性
|
石棉種類 |
單偏光下觀測 |
正交偏光下觀測 |
||
|
顏色1 |
多色性 |
消光2 |
延性符號3 |
|
|
溫石棉 |
無色 |
無 |
平行 |
正延性+ |
|
鐵石棉 |
無色至棕色 |
弱中 |
通常是平行 |
正延性+ |
|
青石棉 |
藍色至棕灰色 |
強 |
通常是平行 |
負延性- |
|
直閃石 |
無色至亮棕色 |
無 |
平行 |
正延性+ |
|
透閃石、陽起石 |
無色至淺綠色、黃綠色 |
無或弱 |
近平行（約16°），混合纖維顯示平行消光 |
正延性+ |
注：1.顏色和多色性：在單偏光模式下轉動載物臺，纖維顆粒從平行于偏光方向至垂直于偏光方向過程中呈現(xiàn)的顏色。
2.消光：插入檢偏鏡，在正交偏光模式下將載物臺轉動360°，纖維顆粒呈現(xiàn)四次明亮、四次黑暗特征。在完全黑暗時纖維顆粒的延長方向與目鏡十字線的縱軸或者橫軸之間的銳角夾角為纖維的消光角。
3.延性符號：在正交偏光鏡模式下插入石膏試板，轉動載物臺至纖維顆粒的延長方向與目鏡十字線呈45°（NE-SW），此時，纖維顆粒如呈現(xiàn)藍綠色，則為正延性（+），如呈現(xiàn)橙色或者黃色，則為負延性（-）。
B.3 偏光品中石棉檢測的路徑
附錄C
（資料性附錄）
掃描電子顯微鏡
C.1 掃描電子顯微鏡的技術要求
C.1.1 加速電壓：0.5~20 kV，放大倍數(shù)25~50000。
C.1.2 二次電子分辨率：1.0 nm（15 kV），2.0 nm（1 kV）。
C.1.3 能譜：能量分辨率＜130 eV。
注：達到上述性能指標的電子探針顯微分析儀也可代替掃描電子顯微鏡，用于本標準的分析。
C.2 能譜的觀測指標
對纖維顆粒部位進行能譜分析，結果應含有石棉化學式中所有元素峰（不計氫），且無成峰型的鋁、鉀峰。掃描電子顯微鏡下各類石棉的典型圖像和能譜分析結果見圖C.1~圖C.6。
附錄D
（資料性附錄）
石棉參考定量方法——X射線衍射儀測定法
5種角閃石石棉的主要特征衍射峰接近但吸收強度不同，當定性檢出石棉且角閃石石棉種類不超過1種時，具備使用X射線衍射儀定量的條件。需要時，可進行定量測定。
D.1 X射線衍射儀的技術要求
D.1.1 多晶X射線衍射儀。
D.1.2 測角儀測角準確度優(yōu)于0.02°（2θ）。
D.1.3 儀器分辨率優(yōu)于60%。
D.1.4 綜合穩(wěn)定率優(yōu)于±1%。
D.2 儀器參數(shù)
靶類型：Cu-Ka；
工作電壓：40 kV；
工作電流：40 mA；
發(fā)散狹縫：1 mm；
散射狹縫：1 mm；
接受狹縫：0.3 mm；
掃描速度：1/16°（2θ）/min或20 s/步；
采樣步寬：0.02°（2θ）/步；
測定掃描范圍（2θ）：10°~13°；34.5°~36°。
D.3 參比強度（K值）的測定
D.3.1 材料
6種石棉的K值各不相同，應根據(jù)定性檢測中確定的石棉種類，選擇相應的石棉標準物質(zhì)/標準樣品。選用的標準物質(zhì)/標準樣品應結晶良好，研磨至粒徑小于0.040 mm。選用剛玉作為內(nèi)標。石棉標準物質(zhì)/標準樣品和剛玉（4.5）置于105 ℃恒溫烘箱內(nèi)2 h，冷卻至室溫后使用。
D.3.2 制樣
按1:1質(zhì)量比，稱取某種石棉標準物質(zhì)/標準樣品和剛玉（4.5）適量，放入瑪瑙研缽（4.7）中研磨，形成均勻的混合試樣。采用背壓法制片，將樣品框置于平板玻璃上，裝入混合試樣，用光滑的玻璃表面垂直壓制成型，要求壓力適中，表面平整，不存在波紋或凹痕。
D.3.3 衍射峰強度測量
將石棉標準物質(zhì)/標準樣品和剛玉混合試樣壓片置于X射線衍射峰上檢測。每份混合試樣重復制片測量5次。
D.3.4 計算K值
石棉的K值按式（1）計算：
Ki = Ii / Icor (1)
式中：
Ki ——i類石棉的參比強度；
Ii ——i類石棉的定量用衍射峰（見附錄表D.1）的積分強度；
Icor——剛玉衍射峰的積分強度。
以5次測量的平均Ki值作為參比強度。
D.4 分析試樣準備
稱取約200 mg分析試樣（6.1.2）至15 mL離心管中，加入10 mL 20%甲酸（4.4），加蓋渦旋30 s，超聲5 min，劇烈振搖后傾入潔凈的蒸發(fā)皿（4.7）中，50 ℃烘干。
按1:1的質(zhì)量比，精密稱取上述分析試樣和剛玉（4.5），在瑪瑙研缽（4.7）中充分混合均勻，制作2份混合樣品。采用背壓法制片，將樣品框置于平板玻璃上，裝入混合樣品，用光滑的玻璃表面垂直壓制成型，要求壓力適中，表面平整，不存在波紋或凹痕。
D.5 樣品測定
于X射線衍射儀上檢測壓制的樣品片，如采集的衍射圖譜中含有石棉定量用特征峰（見表D.1），則按式(2)計算樣品中對應石棉礦物的含量。
c=Ix*ms/(Is*mx*Ki)*100%/f (2)
式中：c——樣品中石棉含量，%；
Ix——待測石棉衍射峰積分強度；
Is ——剛玉衍射峰積分強度，如存在本底衍射峰，應扣去本底值；
ms——剛玉的稱樣量，g；
mx——分析試樣的稱樣量，g；
Ki——待測類型石棉的K值；
f ——樣品灰化后的質(zhì)量與灰化前質(zhì)量的比值。
以2份平行樣品結果的平均值作為最終測定結果。
表D.1 各類型石棉定量用衍射峰
|
石棉種類 |
2θ/（°） |
d/10-10m |
|
溫石棉 |
12.01 |
7.36 |
|
鐵石棉 |
10.60 |
8.34 |
|
青石棉 |
10.64 |
8.31 |
|
直閃石 |
10.61 |
8.33 |
|
陽起石 |
10.49 |
8.42 |
|
透閃石 |
10.55 |
8.38 |
注：陽起石和直閃石的最強衍射峰受滑石粉峰的干擾，因此定量用衍射峰均未選擇其最強衍射峰。
D.6 定量分析結果的表述。
D.6.1 定量濃度
按D.2的儀器參數(shù)檢測，X射線衍射法對于6種石棉的定量濃度均為1%。
D.6.2 分析結果
對于偏光顯微鏡、掃描電鏡-能譜檢出石棉，且含量達到X射線衍射定量濃度的樣品，結果表述為“檢出……石棉，含量為……”。
對于偏光顯微鏡和掃描電鏡-能譜檢出石棉，但X射線衍射未檢測到石棉定量特征峰或者峰S/N＜10的樣品，結果表述為“檢出……石棉，含量低于定量濃度”。
化妝品中葡糖醛酸等14種原料的檢驗方法
Determination of Glucuronic Acid andOther 13 Kinds ofComponents in Cosmetics
1 范圍
本方法規(guī)定了高效液相色譜法測定化妝品中葡糖醛酸等14種原料的含量。
本方法適用于液體類、凝膠類、膏霜乳類化妝品中葡糖醛酸等14種原料含量的測定。
本方法所指的14種原料包括葡糖醛酸、酒石酸、羥基乙酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、2-羥基丁酸、乳酸甲酯、扁桃酸、乳酸乙酯、乳酸丁酯、二苯乙醇酸、檸檬酸三乙酯、羥基辛酸。
2 方法提要
以水提取化妝品中葡糖醛酸等14種原料，用高效液相色譜儀進行分離，二極管陣列檢測器檢測，以保留時間和紫外光譜圖定性，峰面積定量，以標準曲線法計算含量。
本方法中14種原料的檢出限、定量下限及取樣量為1.0 g，定容體積為10 mL時檢出濃度和最低定量濃度見表1。
表1 14種原料的檢出限、定量下限和檢出濃度、最低定量濃度
|
序號 |
原料名稱 |
檢出限 |
定量下限 |
檢出濃度 |
最低定量濃度 |
|---|---|---|---|---|---|
|
（μg） |
（μg） |
（μg/g） |
（μg/g） |
||
|
1 |
葡糖醛酸 |
0.08 |
0.24 |
160 |
480 |
|
2 |
酒石酸 |
0.03 |
0.09 |
60 |
180 |
|
3 |
羥基乙酸 |
0.02 |
0.06 |
40 |
120 |
|
4 |
蘋果酸 |
0.02 |
0.06 |
40 |
120 |
|
5 |
乳酸 |
0.05 |
0.15 |
100 |
300 |
|
6 |
檸檬酸 |
0.02 |
0.06 |
40 |
120 |
|
7 |
2-羥基丁酸 |
0.04 |
0.12 |
80 |
240 |
|
8 |
乳酸甲酯 |
0.04 |
0.12 |
80 |
240 |
|
9 |
扁桃酸 |
0.001 |
0.003 |
2 |
6 |
|
10 |
乳酸乙酯 |
0.04 |
0.12 |
80 |
240 |
|
11 |
乳酸丁酯 |
0.04 |
0.12 |
80 |
240 |
|
12 |
二苯乙醇酸 |
0.001 |
0.003 |
2 |
6 |
|
13 |
檸檬酸三乙酯 |
0.04 |
0.12 |
80 |
240 |
|
14 |
羥基辛酸 |
0.02 |
0.06 |
40 |
120 |
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 磷酸氫二銨。
3.2 磷酸，優(yōu)級純。
3.3 甲醇，色譜純。
3.4 乙腈，色譜純。
3.5 甲酸，色譜純。
3.6 0.05 mol/L的磷酸氫二銨溶液：稱取6.60 g磷酸氫二銨，加水1000 mL溶解，用0.22 μm濾膜過濾。
3.7 標準品：14種原料標準品信息詳見附錄A。
3.8 葡糖醛酸等9種組分混合標準儲備溶液
分別精密稱取（精確到0.0001 g）葡糖醛酸、酒石酸、羥基乙酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、2-羥基丁酸、扁桃酸和二苯乙醇酸（3.7）適量于同一容量瓶中，加水適量，60 ℃超聲15 min使溶解，用水定容，搖勻，配制成混合標準儲備溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期1個月。標準儲備溶液濃度見表2。
3.9 羥基辛酸單標標準儲備溶液
精密稱取（精確到0.0001 g）羥基辛酸（3.7）適量于容量瓶中，加水適量，60 ℃超聲15 min使溶解，用水定容，配制成單標標準儲備溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期1個月。標準儲備溶液濃度見表2。
3.10 乳酸甲酯等3種組分混合標準儲備溶液
分別精密稱?。ň_到0.0001 g）乳酸甲酯、乳酸乙酯、檸檬酸三乙酯（3.7）適量于同一容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，配制成混合標準儲備溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期1個月。標準儲備溶液濃度見表2。
3.11 乳酸丁酯單標標準儲備溶液
精密稱?。ň_到0.0001 g）乳酸丁酯（3.7）適量于容量瓶中，加2 mL甲醇（3.3）溶解，用水定容，搖勻，配制成單標標準儲備溶液備用，轉入棕色儲液瓶中，4 ℃避光保存，有效期1個月。標準儲備溶液濃度見表2。
4 儀器和設備
4.1 高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。
4.2 天平，感量分別為0.1 mg、0.01 mg。
4.3 超聲波清洗器，功率100 W。
4.4 高速離心機，轉速≥14000 r/min。
4.5 pH計，精度0.01。
4.6 渦旋振蕩器。
5 分析步驟
5.1 混合標準系列溶液的制備
分別精密移取不同體積的葡糖醛酸等9種組分混合標準儲備溶液（3.8）、羥基辛酸單標標準儲備溶液（3.9）、乳酸甲酯等3種組分混合標準儲備溶液（3.10）及乳酸丁酯單標標準儲備溶液（3.11）于10 mL容量瓶中，用水定容。標準系列溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。標準系列溶液濃度見表2。
表2 14種原料的標準儲備溶液和標準系列濃度
|
原料名稱 |
標準儲備溶液濃度（mg/mL） |
混合標準系列溶液濃度（mg/mL） |
|||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
|
葡糖醛酸 |
8 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.8 |
2 |
4 |
|
酒石酸 |
4 |
0.05 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
1 |
2 |
|
羥基乙酸 |
8 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.8 |
2 |
4 |
|
蘋果酸 |
8 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.8 |
2 |
4 |
|
乳酸 |
10 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
檸檬酸 |
10 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
2-羥基丁酸 |
10 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
乳酸甲酯 |
50 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
扁桃酸 |
0.2 |
0.0025 |
0.005 |
0.01 |
0.02 |
0.05 |
0.1 |
|
乳酸乙酯 |
40 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.8 |
2 |
4 |
|
乳酸丁酯 |
50 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
二苯乙醇酸 |
0.2 |
0.0025 |
0.005 |
0.01 |
0.02 |
0.05 |
0.1 |
|
檸檬酸三乙酯 |
50 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
|
羥基辛酸 |
50 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
2.5 |
5 |
5.2 樣品處理
稱取混合均勻的樣品1.0 g（精確到0.001 g）于10 mL具塞比色管中，加水至10 mL刻度，充分渦旋混合30 s，60 ℃超聲提取30 min，取適量樣品在10000 r/min下高速離心15 min，取上清液過0.45 μm的濾膜，取續(xù)濾液作為待測溶液。如樣品為油包水等難于在水中分散劑型，可先加入1 mL異丙醇渦旋混合30 s使分散均勻，再加水至10 mL刻度。
5.3 參考色譜條件
色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），或等效色譜柱；
流動相：A：0.05 mol/L的磷酸氫二銨溶液（3.6），用磷酸（3.2）調(diào)pH值為3.0；
B：甲醇；
檢測波長：214 nm；
柱溫：室溫；
進樣量：5 μL。
表3 流動相梯度洗脫程序
|
時間/min |
流速/mL/min |
V（流動相A）/% |
V（流動相B）/% |
|
0 |
0.7 |
100 |
0 |
|
6.5 |
0.7 |
100 |
0 |
|
6.6 |
1.0 |
100 |
0 |
|
15 |
1.0 |
60 |
40 |
|
30 |
1.0 |
30 |
70 |
|
40 |
1.0 |
30 |
70 |
|
40.1 |
0.7 |
100 |
0 |
|
50 |
0.7 |
100 |
0 |
5.4 測定
在“5.3”色譜條件下，取混合標準系列溶液（5.1）分別進樣，進行色譜分析，以標準系列溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
取“5.2”項下的待測溶液進樣，根據(jù)保留時間和紫外光譜圖定性，測得峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測溶液中各原料的濃度。按“6”計算樣品中各原料的含量。
6 分析結果的表述
6.1 計算
6.1.1 葡糖醛酸等10種α-羥基酸
式中：ω——化妝品中葡糖醛酸等10種α-羥基酸原料的質(zhì)量分數(shù)，μg/g；
ρ——從標準曲線得到待測原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；
V——樣品定容體積，mL；
m——樣品取樣量，g；
D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。
6.1.2 乳酸甲酯等3種乳酸酯類
式中：ω——化妝品中乳酸甲酯等3種乳酸酯類原料的質(zhì)量分數(shù)（以乳酸計），μg/g；
m——樣品取樣量，g；
ρ——從標準曲線得到待測原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；
V——定容體積，mL；
D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）；
90.08——乳酸的摩爾質(zhì)量，g/mol。
6.1.3 檸檬酸三乙酯
式中：ω——化妝品中檸檬酸三乙酯的質(zhì)量分數(shù)（以檸檬酸計），μg/g；
m——樣品取樣量，g；
ρ——從標準曲線得到待測原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；
V——定容體積，mL；
D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）；
192.12——檸檬酸的摩爾質(zhì)量，g/mol。
在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
6.2 回收率和精密度
方法回收率為85%~115%，相對標準偏差小于10%。
7 圖譜
1：葡糖醛酸（3.619 min）；2：酒石酸（4.024 min）；3：羥基乙酸（4.573 min）；4：蘋果酸（5.534 min）；5：乳酸（7.180 min）；6：檸檬酸（8.439 min）；7：2-羥基丁酸（12.588 min）；8：乳酸甲酯（14.366 min）；9：扁桃酸（17.194 min）；10：乳酸乙酯（17.958 min）；11：乳酸丁酯（26.831 min）；12：二苯乙醇酸（27.449 min）；13：檸檬酸三乙酯（28.625 min）；14：羥基辛酸（30.465 min）
附錄A
（資料性附錄）
葡糖醛酸等14種原料標準品信息表
表A.1 葡糖醛酸等14種原料標準品信息表
|
序號 |
中文名稱 |
英文名稱 |
CAS登錄號 |
分子式 |
相對分子質(zhì)量 |
|
1 |
葡糖醛酸 |
Glucuronic acid |
6556-12-3 |
C6H10O7 |
194.14 |
|
2 |
酒石酸 |
Tartaric acid |
87-69-4 |
C4H6O6 |
150.09 |
|
3 |
羥基乙酸 |
Glycolic acid |
79-14-1 |
C2H4O3 |
76.05 |
|
4 |
蘋果酸 |
Malic acid |
97-67-6 |
C4H6O5 |
134.09 |
|
5 |
乳酸 |
Lactic acid |
79-33-4 |
C3H6O3 |
90.08 |
|
6 |
檸檬酸 |
Citric acid |
77-92-9 |
C6H8O7 |
192.12 |
|
7 |
2-羥基丁酸 |
2-Hydroxybutyric Acid |
600-15-7 |
C4H8O3 |
104.10 |
|
8 |
乳酸甲酯 |
Methyl lactate |
547-64-8 |
C4H8O3 |
104.11 |
|
9 |
扁桃酸 |
Mandelic acid |
90-64-2 |
C8H8O3 |
152.15 |
|
10 |
乳酸乙酯 |
Ethyl lactate |
97-64-3 |
C5H10O3 |
118.13 |
|
11 |
乳酸丁酯 |
Butyl lactate |
138-22-7 |
C7H14O3 |
146.21 |
|
12 |
二苯乙醇酸 |
Benzilic acid |
76-93-7 |
C14H12O3 |
228.24 |
|
13 |
檸檬酸三乙酯 |
Triethyl citrate |
77-93-0 |
C12H20O7 |
276.28 |
|
14 |
羥基辛酸 |
Hydroxycaprylic acid |
617-73-2 |
C8H16O3 |
160.21 |
注：標準品可能存在不同形式，其CAS號也會不同，當與目標成分不同時需進行必要的折算。
附錄B
（規(guī)范性附錄）
葡糖醛酸等14種原料陽性結果的確證
因α-羥基酸極性大，紫外吸收接近截止波長，測定時易出現(xiàn)干擾，必要時可采用液相色譜－質(zhì)譜法確證結果，以排除基質(zhì)中其他組分的干擾。在相同的液相色譜－質(zhì)譜實驗條件下，如果樣品中色譜峰的保留時間和紫外光譜圖與標準溶液中對應成分一致（相對偏差在±2.5%之內(nèi)），所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子對的相對豐度比的偏差不超過表B.1規(guī)定范圍，則可以判定樣品中存在對應的測定成分。
表B.1 結果確證時相對離子豐度比的最大允許偏差
|
相對離子豐度（k） |
k＞50% |
50%≥k＞20% |
20%≥k＞10% |
k≤10% |
|
允許的最大偏差 |
±20% |
±25% |
±30% |
±50% |
B.1 儀器參考條件
B.1.1 色譜條件
色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），或等效色譜柱；
流動相：A：乙腈（含0.1%甲酸）；B：0.1%甲酸水溶液；
表B.2 流動相梯度洗脫程序
|
時間/min |
V（流動相A）/% |
V（流動相B）/% |
|
0 |
0 |
100 |
|
4 |
0 |
100 |
|
15 |
95 |
5 |
|
17 |
95 |
5 |
|
17.1 |
0 |
100 |
|
22 |
0 |
100 |
流速：0.2 mL/min；
柱溫：30 ℃；
進樣量：5 μL。
B.1.2 質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI源）；
監(jiān)測模式：正、負離子多反應監(jiān)測模式；監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定見表B.3；
鞘氣流速：11 L/min；
干燥氣流速：14 L/min；
鞘氣溫度：350℃；
干燥氣溫度：230℃；
碰撞氣：Ar，20 psi；
離子源電壓（IS）電壓：正離子：4000 V；負離子：3000 V。
表B.314種原料的監(jiān)測離子對及相關電壓參數(shù)設定表
|
序號 |
組分名稱 |
母離子（m/z） |
子離子（m/z） |
CE(V) |
|
1 |
葡糖醛酸 |
193.2 |
113.1* |
-14 |
|
131.1 |
-11 |
|||
|
2 |
酒石酸 |
149.1 |
73.0* |
-14 |
|
87.1 |
-18 |
|||
|
3 |
羥基乙酸 |
75.2 |
47.1* |
-16 |
|
45.1 |
-15 |
|||
|
4 |
蘋果酸 |
133.2 |
115.0* |
-16 |
|
71.2 |
-17 |
|||
|
5 |
乳酸 |
89.2 |
43.1* |
-13 |
|
45.1 |
-15 |
|||
|
6 |
檸檬酸 |
191.1 |
111.1* |
-12 |
|
87.1 |
-11 |
|||
|
7 |
2-羥基丁酸 |
103.2 |
57.1* |
-13 |
|
45.1 |
-16 |
|||
|
8 |
乳酸甲酯 |
104.9 |
45.0* |
9 |
|
33.0 |
15 |
|||
|
9 |
扁桃酸 |
151.2 |
107.1* |
-15 |
|
76.9 |
-23 |
|||
|
10 |
乳酸乙酯 |
118.9 |
45.0* |
17 |
|
47.1 |
11 |
|||
|
11 |
乳酸丁酯 |
147.3 |
45.1* |
14 |
|
63.0 |
8 |
|||
|
12 |
二苯乙醇酸 |
227.1 |
183.2* |
-15 |
|
121.2 |
-9 |
|||
|
13 |
檸檬酸三乙酯 |
299.2 |
210.7* |
13 |
|
178.7 |
15 |
|||
|
14 |
羥基辛酸 |
159.2 |
113.2* |
-16 |
|
45.0 |
-17 |
*為推薦的定量離子。
注：檸檬酸三乙酯母離子為加鈉離子。當檸檬酸三乙酯母離子為加氫離子時，參考母離子為277.1 m/z，子離子為157.0* m/z、203.1 m/z。CE為15 V、12 V。當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化。
來源：國家藥監(jiān)局
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